解码基因组中的“暗物质”

长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）是非编码RNA家族的重要成员,因其数量、种类、功能状况都不明确,又被称作基因组中的＂暗物质＂。本研究对其研究价值、作用的分子机制、与疾病的关系进行了探讨,     

麻黄汤对体外肥大细胞脱颗粒影响的实验研究

目的 检测麻黄汤对体外肥大细胞脱颗粒的影响.方法 将体外肥大细胞(RBL-2H3细胞株)分别加入高、中、低三种浓度的麻黄汤培养组作为实验组、加地塞米松培养组为阳性对照组,未加药物组为空白对照组;用流式细胞仪分别检测各组的肥大细胞脱颗粒的百分比.结果 麻黄汤对体外肥大细胞脱颗粒过程有抑制作用,高、中、低三种不同浓度的麻黄汤实验结果有差异,随浓度的增高,抑制作用增强,各组之间的差异有统计学意义(P<0.005).结论 麻黄汤对体外培养的肥大细胞脱颗粒过程有一定的抑制作用.     

骨髓贴壁细胞向破骨细胞的分化

背景：一般认为采用贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能够贴壁的细胞为间充质干细胞,并能分化成为成骨、成脂肪及成软骨细胞,其中贴壁的细胞是否有分化为破骨细胞的潜能尚不明确。 目的：检测贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能贴壁的细胞是否能够分化为破骨细胞。 方法：采用贴壁法得到小鼠原代间充质干细胞,以及通过贴壁1-5d后得到不同时间贴壁的骨髓细胞。原代间充质干细胞及不同时间贴壁的骨髓细胞分别用普通培养基,及含m-csf和RANKL培养基,培养9 d后进行碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色。原代间充质干细胞传代后,第2代间充质干细胞分为4组,分别用普通培养基、含m-csf培养基、含RANKL培养基及含m-csf和RANKL的培养基培养,9 d后进行碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色。 结果与结论：贴壁法得到较均一的间充质干细胞,原代及传代贴壁细胞的联合诱导组抗酒石酸酸性磷酸酶染色均为阳性,说明原代和传代的贴壁骨髓细胞中均有可以分化为破骨细胞的细胞。不同时间贴壁的细胞诱导后碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色有差异,说明不同时间贴壁的细胞存在分化差异。     

miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究

目的 ：研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法：mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞＂拯救＂实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果：细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的＂拯救＂实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能＂拯救＂mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 ：mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。     

分子诊断,切中肿瘤要害

提到癌症的早期发现,人们首先想到的是抽血化验肿瘤标记物。若各项指标均在正常范围,你就“万事大吉”：若某一项或某几项结果超标,就凄风苦雨,紧张焦虑。肿瘤标记物检测真能第一时间发现癌魔的迹象吗？当前医学科技发展一日千里,有无更可靠且灵敏的肿瘤检测项目？不仅如此,人们还有这样的疑惑——     

肾盂肾炎患儿尿中分离出一株伦敦沙门菌

<正>沙门菌属(Salmonella)目前属内包括肠道沙门菌(Salmonella enterica)和邦戈沙门菌(Salmonella bongori)2个种。沙门菌主要通过污染食品和水源经口感染,通过消化道传染致病。免疫功能低下的新生儿和患有慢性病或重病的衰弱者及老人易发病。而2013年7月,同济大学附属第十人民医院从1例肾盂肾炎患儿尿中分离出1株伦敦沙门菌(Salmonella London)。曾有报道在患儿血中分离出此菌[1],但在尿中分离出此菌极为少见。     

利用双顺反子系统在大肠杆菌中高表达bFGF

目的:由于人碱性成纤维细胞生长因子编码基因结构存在不利于原核表达的因素,构建了双顺反子的大肠杆菌表达系统,以期提高其表达量。方法:其中质粒表达载体pET-3c携带的T7噬菌体10基因N端氨基酸的编码序列为第一个顺反子,bFGF编码基因为第二个顺反子,二者同处于T7启动子的下游。结果:将重组子转导表达菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达,表达量达到菌体总蛋白的20%,并具有良好的活性。结论:证明双顺反子系统可以有效增加bFGF的表达量。     

hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达。方法:将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF5端的231bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果:融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为5.2。结论:本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。     

EDTA-K2在血液分析仪血小板检测中的应用及阿米卡星对EDTA-K2相关的假性血小板减少症的纠正作用

目的 确认乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)是全自动血液分析仪血小板检测的首选抗凝剂,研究EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少的原因,寻找纠正EDTA-K2相关的假性血小板减少症(EDTA-PTCP)的方法.方法 纳入2015年6月至2016年6月我院健康志愿者25例,采集的血标本分别用EDTA-K2、枸橼酸钠和肝素钠抗凝剂进行抗凝.纳入同期我院确诊的EDTA-PTCP患者10例,采集的血标本分别用EDTA-K2、EDTA-K2+阿米卡星抗凝.健康志愿者和EDTA-PTCP患者的血标本均同时用全自动血液分析仪及血小板手工计数.结果 健康志愿者EDTA-K2抗凝血标本的血小板计数和手工血小板计数在30 min内差异无统计学意义(P＞0.05);枸橼酸钠、肝素钠抗凝血标本的血小板计数和手工血小板计数在5、15、30、60 min时差异均有统计学意义(P＜0.01).EDTA-PTCP患者的EDTA-K2抗凝血标本在0、30、60、90 min时的血小板计数均低于手工血小板计数(P＜0.01).在EDTA-K2抗凝血标本中加入阿米卡星后,血小板计数随着时间延长而逐渐增加,90 min时与手工血小板计数相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EDTA-K2的抗凝效果优于枸橼酸钠、肝素钠抗凝剂,是全自动血液分析仪血小板检测的首选抗凝剂.EDTA-PTCP患者的血标本在使用EDTA-K2作为抗凝剂时,可以用阿米卡星纠正.     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。