肝移植供肝保存新途径：机械灌注

肝移植是治疗终末期肝病最有效的方法,但由于供肝短缺形势严峻,进一步发展并完善新的离体肝脏保存技术成为必然。机械灌注（MP）是一种新型的供肝保存方法,与传统的静态冷保存相比,能更好地保存离体肝脏,甚至可以挽救非标准供肝,从而进一步扩大供肝池。根据温度不同,MP可以分为低温、亚低温以及常温3种类型。目前针对肝移植的MP尚处于临床试验阶段,其主要技术参数仍需要进一步探索验证。总之,MP为解决供肝短缺提供了新思路,为了获得临床应用仍需要进一步研究,使其简化并合理优化灌注参数。     

大鼠50%减体积肝移植技术的改进

目的建立改良的大鼠50％减体积原位肝移植的模型。方法在经典的双袖套法大鼠肝移植模型的基础上,通过4次贯通穿刺、3次结扎、2次回折的肝脏缝扎方法,改善肝脏减体积切取的效果。结果所有50％减体积原位肝移植的大鼠均存活良好,肝功能迅速恢复正常,达到实验设计对动物模型的要求。结论采用本实验室规范的4贯通、3结扎、2回折的肝脏缝扎方法,可以建立稳定的50％大鼠同种异体减体积原位肝脏移植模型,值得推广应用。     

高脂饮食加低剂量链脲霉素建立小鼠2型糖尿病模型

目的高脂饮食加低剂量链脲霉素(Streptozotocin,STZ)建立小鼠2型糖尿病模型。方法5周的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常饲料组、正常饲料加STZ组、高脂饲料组和高脂饲料加STZ组。相应饲料喂养5周后,按照100 mg/Kg的剂量腹腔注射STZ,然后继续喂养4周。在第5周和第9周末测定小鼠的体重、收缩压、血糖、血胰岛素、血甘油三脂和胆固醇水平。结果STZ注射前各组小鼠的体重、血压、血糖、血胰岛素、血脂和血甘油三脂无明显差异(P0.05)。STZ注射后4周时,高脂饲料加STZ组小鼠的体重、血糖、血胰岛素、血压和血脂水平明显升高(P0.05);而其他三组的这些指标无明显改变或仅部分升高。结论高脂饮食加低剂量链脲霉素可建立小鼠2型糖尿病模型,该模型具有人2型糖尿病的主要表型特征和相似的发病过程。     

不同大鼠心脏死亡器官捐献模型肝脏损伤比较研究

目的探讨不同大鼠心脏死亡器官捐献模型供肝损伤机制。 方法将15只SD大鼠按随机数字表法分为氯化钾注射组、膈肌剪断组、心尖夹闭组,每组5只。氯化钾注射组通过背部浅表层静脉注射10%氯化钾溶液诱导心脏停跳;膈肌剪断组将膈肌剪断导致大鼠低血压和缺氧,诱导心脏停跳;心尖夹闭组开腹后用血管夹夹住左、右心室顶端,诱导心脏停跳。记录各组大鼠心脏停跳时间。3组大鼠心脏停跳后立即下腔静脉采血,检测血清ALT、AST、葡萄糖、乳酸脱氢酶(LDH)含量。取各组大鼠肝脏组织行HE染色,光镜下观察肝脏组织病理学变化。检测各组大鼠肝脏组织中过氧化氢、一氧化氮含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Capase-3)转录情况。蛋白质印迹法检测大鼠肝脏组织磷酸化Akt(p-Akt)、Bax和Bcl-2蛋白表达情况。各组大鼠建模后心脏停跳时间、血清肝功能指标、肝脏组织一氧化氮和过氧化氢含量、凋亡相关分子(Bax、Bcl-2、Capase-3)转录水平及相关蛋白表达量比较均采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。 结果膈肌剪断组和心尖夹闭组建模后心脏停跳时间分别为(720±137)、(1 020±142)s,均长于氯化钾注射组[(111±10)s,P均<0.05];氯化钾注射组和膈肌剪断组血清ALT分别为(29±14)、(49±11)U/L,均低于心尖夹闭组[(71±13)U/L,P均<0.05];心尖夹闭组血清AST、葡萄糖和LDH分别为(293±61)、(26.7±6.6)和(2 534±907)U/L,均高于氯化钾注射组[(131±67)、(15.8±8.5)、(1 528±1 170)U/L,P均<0.05]。HE染色结果显示心尖夹闭组和膈肌剪断组较氯化钾注射组有严重的充血和红细胞渗入,而心尖夹闭组与膈肌剪断组差异不明显。氯化钾注射组和膈肌剪断组肝脏组织过氧化氢含量分别为(13.8±3.7)、(13.7±1.8)mmol/L,均低于心尖夹闭组[(19.1±4.1)mmol/L,P均<0.05];心尖夹闭组一氧化氮含量为(13.3±3.2)mmol/L,高于膈肌剪断组[(6.9±0.4)mmol/L,P<0.05]。氯化钾注射组Bax转录量低于膈肌剪断组,心尖夹闭组Bax表达量高于氯化钾注射组,氯化钾注射组P-Akt 473和P-Akt 308表达量显著高于心尖夹闭组(P均<0.05)。 结论氯化钾注射组对肝脏损伤影响最小,可能与细胞凋亡减少、P-akt相关信号通路激活有关。     

常温机械灌注修复长时间冷保存供肝的大动物实验研究

目的探索常温机械灌注(NMP)在挽救大动物边缘供肝中的价值。 方法6只雄性、10～12月龄巴马小型猪分为静态冷保存(SCS)6 h组和SCS 24 h组,每组3只,分别于供肝获取后SCS 6 h、24 h后进行2 h NMP复苏。基于荷兰Organ Assist公司Liver Assist系统和供体猪自身血液,整合四通道生理仪器及自制灌注管路搭建NMP平台。在NMP过程中分别于灌注0、15、60、90、120 min 5个时间点收集灌注液用于肝功能(ALT、AST)检测及血气分析(pH、氧分压)。灌注结束取肝左叶相同位置少许组织,以10%甲醛固定,用于后续HE染色。 结果NMP开始时,SCS 24 h组ALT、AST水平略高于SCS 6 h组,之后AST、ALT水平均缓慢上升。NMP开始时SCS 24 h组pH值中位数为7.28,氧分压中位数为46 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa,下同),均低于SCS 6 h组(7.36,52 mmHg),经过2 h NMP后SCS 24 h组pH值和氧分压逐渐接近甚至优于SCS 6 h组。HE染色发现,灌注前SCS 24 h组肝脏充血严重,炎性细胞浸润明显;NMP 2 h后,肝脏充血明显改善、炎性细胞减少,与SCS 6 h组无明显差异。 结论基于Liver Assist系统和供体猪自身血液成功搭建的NMP平台,可有效改善长时间冷保存的边缘供肝质量,提示NMP在修复边缘供肝、扩展供肝来源方面具有重要临床及基础研究价值。