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1.
目的 基于重叠延伸PCR(SOE PCR)技术构建转录因子EB(TFEB)丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化。 方法 根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物F和R及突变引物Fn和Rn进行第1步PCR扩增,获得含突变位点的产物1和产物2。经第2步PCR退火延伸对产物1和产物2进行重叠拼接,以拼接后DNA片段为模板,采用外侧引物F和R进行第3步PCR扩增获得含突变位点的目的DNA;将其克隆至pGEX-6p-1载体,采用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ进行酶切鉴定,DNA测序验证突变结果。于大肠杆菌(E.coli)中分别采用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同条件下诱导TFEB及其突变体重组蛋白表达。Glutathione-Sepharose 4B琼脂糖凝珠分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化产物蛋白浓度和相对分子质量。 结果 第1步PCR扩增获得均含有突变位点的2条DNA片段,经第2步PCR退火延伸和第3步PCR扩增后获得大量含有突变位点的完整DNA片段。双酶切鉴定,连接的DNA片段与目的片段大小一致。DNA测序显示TFEB的114位丝氨酸(TCT)成功突变为丙氨酸(GCT)。在0.5?mmol·L-1 IPTG、16?℃诱导过夜条件下获得TFEB及其突变体的可溶性蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳,纯化后蛋白浓度较高,分子大小正确。 结论 利用SOE PCR技术成功实现了TFEB丝氨酸114位点的定点突变,并且TFEB及其突变体基因在E.coli中成功表达。 相似文献
2.
目的 探讨影响山东省发热伴血小板减少综合征(SFTS)发病的危险因素,为科学防制该病提供依据。方法 应用1∶2匹配的病例对照研究方法,调查收集病例、对照的基本情况、可疑暴露因素等信息,采用单因素和多因素的配对条件logistic回归分析发病危险因素。结果 本研究共纳入374例SFTS确诊病例和748例对照。分析结果显示,有病例接触史(OR = 5.84,95%CI:1.11~30.88)、有家养动物(OR = 1.74,95%CI: 1.02~2.96)、近1个月见过蜱(OR = 5.85,95%CI: 2.73~12.53)、近2周有蜱叮咬史(OR = 29.58,95%CI: 6.70~130.60)、从事田间作业(OR = 2.63,95%CI:1.41~4.91)、住宅周围环境有杂草/农作物/菜地(OR = 3.24,95%CI:1.74~6.05)和住宅卫生条件差(OR = 2.20,95%CI:1.32~3.66)是SFTS发病的危险因素(P<0.05),近1个月有亲邻发病(OR = 0.01,95%CI:0~0.03)、采取防护措施(OR = 0.21,95%CI:0.10~0.46)是SFTS发病的保护因素(P<0.05)。结论 接触病例、饲养家养动物、蜱叮咬、无防护措施的野外作业及住宅周围环境卫生较差等是影响山东省SFTS发病的危险因素。应加强重点人群SFTS健康教育和行为干预,减少危险因素暴露,以控制SFTS传播。 相似文献
3.
目的 观察基于信息化环境服务性学习在中医护理学课程实践教学改革中的应用效果。方法 将2019级护理本科的两个平行班分为实验组(57人)和对照组(56人)。对照组沿袭传统教学方式,实验组采用服务性学习教学方法。教学结束后,对两组学生的理论和实践技能知识进行考核,对实践操作得分进行比较,并对实验组的服务性学习实践教学效果进行评价。结果 实验组理论、技能知识及实践操作成绩均高于对照组(P<0.05)。实验组82%以上的学生认为实践教学改革有助于端正学习态度,提高知识掌握能力、综合能力和文化认知能力。结论 基于信息化环境的服务性学习是适合中医学科特点的中医课程实践教学的新模式。 相似文献
4.
目的 探讨奥希替尼靶向药联合培美曲塞、顺铂方案化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者无进展生存期及总生存期的影响。方法 选取收治的82例晚期NSCLC患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组各41例。对照组予以培美曲塞联合顺铂化疗,观察组在对照组基础上联合奥希替尼化疗。比较两组临床疗效、毒副反应,治疗前、治疗后评估两组患者血清肿瘤标志物[糖类抗原50(CA50)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]、免疫功能,随访观察患者预后状况。结果 观察组治疗总有效率更高(P<0.05)。治疗9周后,两组CA50、CEA、CYFRA21-1均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后各指标水平更低(P<0.05)。治疗9周后,观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均高于治疗前(P<0.05),对照组CD3+低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后各指标水平高于同期对照组(P<0.05)。... 相似文献
5.
目的:探讨公立医院医疗新技术临床应用管理体系及实践效果。方法:以某公立医疗机构为研究对象,通过文献理论研究和实践验证法探索建立新技术临床应用管理体系,并分析其在实践过程中的效果。结果:提高了医务人员申报新技术的积极性,医院专科综合实力得到显著增强,患者满意度大大提高。结论:公立医院医疗新技术临床应用管理体系有助于规范临床新技术应用的全过程管理,可促进新技术的良性发展,提高医疗服务水平。 相似文献
6.
目的探讨肾周脂肪梅奥粘连概率评分系统(MAP)在肾癌后腹腔镜肾部分切除术中的临床应用价值。 方法回顾性分析2015年1月至2020年6月徐州医科大学附属淮安医院泌尿外科收治的行后腹腔镜肾部分切除术的153例肾癌患者的临床病例资料。依据MAP评分系统将其分为低度复杂组、中度复杂组和高度复杂组三组。比较各组间的手术时间、术中出血量、术中及术后并发症、术中热缺血时间、术后住院时间及术后血肌酐变化情况。 结果在153例患者中,低度复杂组68例,中度复杂组58例和高度复杂组27例。三组患者在年龄、性别、术前血肌酐水平、肿瘤最大径、肿瘤位置、BMI、RENAL评分等方面差异无统计学意义(P>0.05)。随着复杂程度的提高,手术时间、术中出血量也在不断增加(P<0.05);而术中热缺血时间、术后住院时间及术后血肌酐水平无明显变化(P>0.05)。在术中并发症方面,随着复杂程度的提高,术中并发症的发生率也在增加(P<0.05),且高度复杂组的术后并发症发生风险是低度复杂组的13.895倍(P=0.002),MAP评分系统预测术中并发症发生的精度较高(AUC=0.757,P=0.002)。但是术后并发症各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论MAP评分系统在肾癌后腹腔镜肾部分切除术中,对预估手术难度及术中并发症发生风险有较好的临床应用价值。 相似文献
7.
儿童早期发展是从受精卵到8岁儿童体格、心理和社会能力的生长和发育,其发展过程受到遗传、环境等多方面影响。其中,新生儿的优质营养是儿童早期发展的重要物质基础,新生儿期的母乳喂养、新生儿疾病的筛查、早产儿和低出生体重儿的合理喂养都是促进儿童早期发展的关键之一。本文将从新生儿营养的角度,全面总结其对儿童早期发展的作用,为更好地优化母婴营养,促进儿童早期发展提供新的方向与参考。 相似文献
8.
目的探究补肺益肾汤治疗支气管哮喘缓解期的临床效果。方法选取2017年9月至2019年9月于河北省唐山市第三医院就诊的160例支气管哮喘缓解期患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组各80例。两组均予以常规对症处理,同时予以孟鲁司特咀嚼片睡前嚼服,观察组则在此基础上予以补肺益肾汤治疗,两组均连续治疗30天。观察并比较两组治疗前后的中医证候积分、外周血单个核细胞中细胞因子含量、血清氧化应激指标、呼出气一氧化氮、缺氧诱导因子1α和肺功能指标及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,观察组治疗总有效率为92.50%,显著高于对照组的81.25%(P<0.05)。治疗后,两组中医证候(咳嗽、气喘、肺部哮鸣音)积分均下降,观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组外周血单个核细胞中缺氧诱导因子1α含量、缺氧诱导因子1α信使核糖核酸表达量及呼出气一氧化氮均较治疗前下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶与第1秒用力呼气容积、用力肺活量、呼气流量峰值均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。观察组在治疗期间发生腹泻4例,腹痛2例,不良反应发生率为7.50%;对照组在治疗期间发生腹痛3例,头痛2例,不良反应发生率为6.25%,但两组比较差异无显著性(P>0.05)。结论补肺益肾汤联合孟鲁司特可有效控制支气管哮喘缓解期患者的炎症反应及氧化应激反应,降低缺氧诱导因子1α、缺氧诱导因子1α信使核糖核酸水平,改善肺功能,安全性较好。 相似文献
9.
目的:比较开放手术与后腹腔镜手术治疗器官局限性上尿路上皮癌的疗效。方法:回顾性分析我院2010年01月至2015年12月75例接受手术治疗器官局限性上尿路上皮癌患者的临床资料,其中34例行开放肾输尿管加膀胱部分切除术(ONU组)治疗,41例行后腹腔镜肾输尿管加膀胱部分切除术(LNU组)治疗,比较两组患者的基线临床资料、围术期资料及随访预后结果。结果:ONU组的手术时间短于LNU组[136.0(111.0~180.0) min vs 180.0(130.0~210.0)min,Z= 2.525,P=0.012]。LNU组的出血量少于ONU组[100(100~200) mL vs 200(100~300) mL,Z= 2.197,P=0.028]。两组患者术后排气时间、引流管去除时间、术后住院时间及术后并发症发生率差异无明显统计学意义(P>0.05)。ONU组中位随访时间42.5个月,LNU组中位随访时间41.0个月,总生存率(P=0.817)、肿瘤特异性生存率(P=0.448)、无复发进展率(P=0.789)、膀胱内无复发率(P=0.138)在两组患者中差异无明显统计学意义。结论:开放手术与后腹腔镜镜手术均是治疗器官局限性尿路上皮癌的有效方法,应根据临床具体情况选择手术方式。 相似文献
10.
目的探讨前列腺癌125Ⅰ粒子植入术后尿路不良反应及其并发症。 方法回顾性分析2011~2019年在经直肠超声引导下,经会阴前列腺125Ⅰ永久性放射粒子植入治疗前列腺癌患者资料,观察尿路并发症以及下尿路症状。 结果共收集120例前列腺癌患者,随访时间2年,平均年龄(73±5)岁;临床Gleason评分6~10分,平均(8.4±1.1)分;前列腺体积(47±12) ml。患者术前、术后1个月、术后3个月、术后半年、术后1年和术后2年IPSS评分分别为:(13.1±3.6),(21.6±4.6),(19.2±4.4),(15.9±3.9),(13.9±3.1)和(13.5±2.7)。术后1个月内尿路Ⅰ级和Ⅱ级并发症发生率分别为14.2%、5.8%;术后3个月尿路Ⅰ级和Ⅱ级并发症发生率分别为5.0%、2.5%。术后无尿路Ⅲ级和Ⅳ级并发症发生。 结论125Ⅰ粒子永久植入术治疗前列腺癌是一种微创、术后恢复快的治疗方法。虽然放射性粒子对患者的排尿有一定的影响,但程度较轻,具有一定的自限性。术中精确的定位、制定计划及粒子植入操作技术是预防严重合并症的关键。 相似文献