27例HIV抗体检测不确定者结果特征及跟踪随访分析

目的探讨"HIV抗体不确定"结果和跟踪随访的特点,揭示WB确证试验存在的问题,并提出改进措施。方法回顾分析和评价抗体筛查、受检者随访复检及WB试验各种带型对判断HIV抗体不确定的效果。结果 27例HIV抗体不确定者的样本中,其人群分布既有一般人群,也有高危人群;S/CO值从低到高都有分布,其中S/CO值在0~2.9之间较多,占77.78%;另2例S/CO≥6样本WB结果为阴性,HIV初筛阳性S/CO值的高低不能做为确证阳性的判断依据;抗体不确定样本中WB带型以单一P24带型最多,占59.3%,是WB试验的假阳性主要因素。结论引起HIV抗体不确定结果的因素是多样的,除加强实验室质量控制和对不确定结果受检者的追踪随访外,必要时应结合其他检测技术及流行病学调查结果,从而作出准确诊断。     

人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2单链抗体的研究

目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2（HCVE2）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法 以重组的HCVE2为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ELISA）和DNA序列分析。获得HCVE2的人源单链抗体；用该抗体对10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组织化学鉴定。结果 ELISA结果表明，制备的HCVE2人源单链抗体（吸光度值A450为1.88)能与HCVE2抗原特异性结合，免疫组织化学结果表明，该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCVE2抗原，与正常肝组织及乙型肝炎病毒（HBV）抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，为HCVE2病原的检测提供了新的有效的试剂。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

目的 利用噬菌体表面展示技术,从半合成人源化单链可变区抗体库中筛选、鉴定丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构蛋白ＮＳ４Ａ的单链可变区抗体（ＳｃＦｖ）及其编码基因,为抗ＨＣＶ的细胞内免疫基因治疗研究开辟新途径。方法 采用噬菌体表达展示技术,以重组的ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ４Ａ为包被抗原,从噬菌单链可变区抗体库中经过３轮“吸附－洗脱－扩增”筛选过程,获得抗原结合活性较强的ＨＣＶ ＮＳ４Ａ人单链可变区抗体段阳性克隆     

乙型肝炎病毒囊膜中蛋白与白细胞介素18联合基因免疫的实验研究

构建ＨＢＶ囊膜中蛋白核酸疫苗表达载体并免疫小鼠 ,观察白细胞介素 18对基因免疫的辅助作用。构建质粒ｐＶＲ10 12 Ｍ、ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18,肌注法免疫 2 5只Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,3组小鼠分别注射 10 0 μｇｐＶＲ10 12 ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ和ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18质粒 ,每 2周 1次 ,共 3次。每次免疫 2周后眼眶采血 ,检测血清抗 ＨＢｓ ,第 3次免疫后 2周应用乳酸脱氢酶检测法验证特异性细胞杀伤率。结果表明 ,经注射上述质粒后 ,可观察到注射ｐＶＲ10 12 Ｍ组的小鼠随免疫次数的增加 ,抗 ＨＢｓ阳性…     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）准种在慢性乙型肝炎患者中的存在状态。方法 以已知中国株HBV基因序列为依据。设计特异性聚合酶链反应（PCR）引物,自3例慢性乙型肝炎患者体内扩增HBV全S基因片段,克隆人pGEMTeasy质粒,用限制性片段长度多态性（RFLP）法确定HBV的变异现象,DNA测序确定病毒的变异程度。结果 分别自3例患者血清中克隆出29、28和8个阳性克隆,以EcoRⅠ酶切患者1和2的RFLP结果提示各有5种不同的长度带型,PCR产物XhoI酶切RFLP结果表现为高度保守,测序结果发现HBV体内毒株DNA序列高度一致,同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于97%。结论 慢性乙型肝炎患者体内有HBV准种共存,且呈现出一定的优势克隆现象。可能与患者预后有关。     

HCV非结构蛋白NS5A人源单链可变区抗体基因的筛选与鉴定

目的 筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS5A的人源单链可变区抗体（ScFv)的编码基因,为HCV NS5A蛋白质生物学功能的研究及抗HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法 采用噬菌体表面展示技术,以重组纯化的HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的HCVNS5A人源单链可变区抗体基因片段的阳性克隆,并对其进行免疫检测及序列测定,结果 筛选得到的ScFv片段基因核苷酸序列为789nt,编码由262个氨基酸残基组成的多肽,具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有HCV NS5A蛋白反应的免疫学活性和特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术,成功获得了HCV NS5A人单链可变区抗本ScFv编码基因,并获得了可溶性单链抗体的表达。     

HCV核心蛋白结合蛋白基因6的克隆

目的：克隆与丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法：应用酶母双杂交系统，构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱铒质粒，转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合，在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个克隆，既能在四缺营养缺陷培养基上生长(SD/Trp-Leu-Ade-His）又能在涂有x-α-gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落，提取此酵母克隆的质粒，转化大肠埃希菌后进行测序，进行生物信息学分析。结果：分析结果显示，其中6号克隆的测序结果与Genbank中的2个未知功能序列有98％的同源性，初步证明了此基因与丙型肝炎病毒核心蛋白有结合性。结论：丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白肝基因克隆成功。     

外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法 采用特异性引物设计,以多聚酶链反应（PCR）自身患者血清中扩增全S基因片段,测序以明确变异的部位,并与既往已发表的HBV adr亚型进行序列比较。结果 经测序发现慢性HBV感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因,并存有HBsAg和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论 在外周血中存在HBV截短型囊膜蛋白编码基因,可能与患者不良预后有关。