胃癌MG7-Ag模拟表位减毒鼠伤寒沙门菌活菌疫苗研制及免疫效果

目的以减毒鼠伤寒沙门菌为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的口服活菌疫苗,观察Balb/c小鼠口服免疫后诱导的体液和细胞免疫反应。方法构建MG7-Ag模拟表位和HBcAg融合基因的原核表达载体,将其转入减毒鼠伤寒沙门菌得到模拟表位的口服活菌疫苗。用构建的口服鼠伤寒沙门菌疫苗免疫Balb/c小鼠,以PBS和携带pYA3341空载体的减毒鼠伤寒沙门菌作为对照。初次口服接种6周后应用ELISA法检测小鼠血清中抗MG7-Ag抗体的滴度。初次免疫后8周时,取免疫鼠脾细胞,以51Cr释放法检测小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤效果,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击实验,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果口服疫苗免疫小鼠后疫苗免疫组小鼠血清抗MG7-Ag抗体较PBS和空载体对照组显著增高,三组分别为0.954±0.040,0.653±0.018和0.692±0.012(P<0.01)。各组小鼠脾淋巴细胞体外杀伤实验未见显著差异,三组分别为234.7±27.7,183.4±26.0和195.7±8.0(P>0.05)。小鼠艾氏腹水瘤的攻击实验显示:疫苗免疫组中5只小鼠有1只未见肿瘤形成,而对照组小鼠则全部成瘤,且免疫组的成瘤重量为(0.05±0.01)g,明显小于两对照组的(0.10±0.04)和(0.09±0.04)g(P<0.01)。结论以胃癌MG7-Ag模拟表位为基础的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗具有免疫原性,可诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,并具有一定的保护作用。     

FK228抑制EPO介导的人红系前体细胞的增殖与分化

目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂FK228在红细胞生成素(EPO)介导的人红系前体细胞增殖与分化中的调节作用。方法:从经粒细胞集落刺激因子动员的肿瘤患者外周血单核细胞中分离CD34 细胞,用含干细胞生长因子(SCF)、EPO或SCF IL-3及不同浓度FK228的无血清培养基培养7d,分别用抗GPA及抗CD36单克隆抗体(mAb)染色并行流式细胞术检测;将CD34 细胞用含SCF IL-3的无血清培养基培养7d,分离CD36 GPA-细胞,将细胞用含有EPO FK228的无血清培养基培养7d,并行细胞计数;将CD36 GPAlow/-细胞用含EPO加或不加FK228的无血清培养基培养,并进行annexin V和PI染色。结果:FK228以一种剂量依赖方式抑制CD36 GPAhigh、CD36 GPAlow和CD36 GPA-细胞的产生;FK228可诱导CD36 GPAhigh和CD36 GPAlow/-细胞在含EPO的培养基中发生细胞凋亡。结论:FK228可抑制EPO介导的人红系前体细胞的增殖与分化。     

Delta-1对IL-6R+髓系祖细胞分化的影响

目的 探讨Notch配体Delta-1在髓系造血细胞分化过程中对膜结合和可溶性IL-6受体所介导信号的调节作用.方法 分离正常脐血单核细胞,然后利用CD34免疫磁珠试剂盒和FACSVantage流式细胞仪从所获单核细胞中拣选CD34 CD38-细胞;将CD34 CD38-细胞利用SCF、Flt3L、TPO和IL-3(4GFs)培养7 d,用CD36免疫磁珠试剂盒分离掉培养细胞中的CD36 红系祖细胞,然后用FACSVantage流式细胞仪将细胞再次拣选出CDl15- CD14- CD1a- IL-6R 表型的细胞,将这种表型的细胞用含有4GFs、4GFs IL-6或4GFs FP6培养基在有或无Delta-1存在的条件下进行培养11 d,并对CD15 粒细胞、CD14 单核细胞和CD14-CD1a 树突状细胞进行计数.结果 发现所有CD15、CD14或CD1a阳性的细胞均表达IL-6R;IL-6和FP6可促进CD15 细胞的分化;Delta-1在无IL-6和FP6存在时对CD15 细胞的分化表现出轻度的抑制作用;在IL-6和FP6存在时对CD15 粒细胞的分化表现出明显的抑制作用;相反,IL-6和FP6抑制CD14-CD1a 细胞的分化,而Delta-1促进CDl4-CD1a 细胞的分化.结论 Delta-1可通过抑制mIL-6R-和sIL-6R所介导的IL-6生物学效应抑制IL-6R 髓系祖细胞分化为粒细胞和单核细胞,但促进其分化为树突状细胞.     

还原型谷胱甘肽预防表柔比星心肌毒性的临床观察

目的:探讨还原型谷胱甘肽防治表柔比星心肌毒性的疗效。方法:共116例乳腺癌术后患者入组并随机接受4周期TA方案化疗 还原型谷胱甘肽(治疗组)治疗或仅TA方案化疗(对照组);利用心电图和AHA心功能评价标准评价两组患者的心脏毒性。结果:116例乳腺癌患者随机分入治疗组(60例)和对照组(56例),化疗后治疗组8例患者心电图诊断异常,比率为13.3%,对照组14例,比率为25%,两组比较有显著性差异(P<0.05);治疗组化疗前后心功能无改变,对照组经化疗后有3例出现心功能Ⅱ级,差别无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究证实还原型谷胱甘肽可防治表柔比星的心肌毒性,可提高表柔比星化疗后患者生活质量。     

全身热疗联合化疗治疗晚期恶性肿瘤-220例疗效分析

目的:观察晚期恶性肿瘤患者全身热疗联合化疗的近期疗效与毒副反应。方法:220例晚期恶性肿瘤患者,采用常规化疗联合全身热疗,观察其疗效。全身热疗采用SRI全身热疗系统,温度40℃±0.5℃,持续90-120分钟,1次/3周。结果:近期疗效,完全缓解(CR)3例(1.36%),部分缓解(PR)28例(12.73%),疾病稳定(SD)118例(53.64%),疾病进展(PD)71例(32.27%),疾病控制率(CR+PR+SD)67.73%。绝大多数患者自觉症状好转,生活质量提高。结论:全身热疗联合化疗近期疗效确切,不同肿瘤对全身热疗的敏感性还有待进一步研究证实。     

胰腺癌的分子靶向治疗

近年来胰腺癌的发病率有明显增加趋势,且治疗困难。吉西他滨是治疗胰腺癌相对有效的药物,但其治疗进展期胰腺癌的1年生存率仅为18％,中位总生存期(mOS)为5.4～5.6个月。日前,传统治疗方法联合靶向治疗成为晚期胰腺癌治疗的研究焦点。     

利用噬菌体呈现技术筛选单抗MG7ScFv片段

动物源性全抗体应用于人体往往会引起人抗动物抗体反应及过敏反应１将其小型化可显著降低这些不良免疫反应。目前，主要依赖基因工程技术来实现动物源性抗体的小型化，其中近１０年来发展和逐渐成熟起来的噬菌体呈现技术是抗体小型化的最佳方式２３。单抗（ｍＡｂ）ＭＧ７是我所研制的一种特异性较高的鼠抗人胃癌的ｍＡｂ，其针对的抗原在临床病例中的阳性率达９０％，因此将其用于胃癌的靶向治疗具有一定的临床前景４。为降低ＭＧ７全抗体用于体内研究时出现的强抗原性，我们以ＭＧ７杂交瘤为材料，利用噬菌体呈现技术，制…     

VEGF启动子介导鼠α1，3半乳糖基转移酶表达及其对缺氧的人肝癌细胞HepG2的靶向杀伤效应

目的:利用血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子介导鼠α1,3半乳糖基转移酶(α1,3 GT)在缺氧肝癌细胞HepG2中靶向表达并检测其诱导的人血清天然抗体对肝癌细胞的杀伤效应,为肝癌的靶向基因治疗方法提供新的思路.方法:利用PCR从Balb/c 小鼠肝组织中扩增出小鼠VEGF 基因启动子片段并插入到荧光素酶报告载体中;用所构建的荧光素酶报告载体瞬时转染 HepG2 细胞;经缺氧诱导后检测转染细胞中荧光素酶活性;进一步通过基因重组构建受VEGF 基因启动子调控的鼠α1,3GT重组逆转录病毒载体并稳定转染HepG2细胞;转染细胞在缺氧条件下培养后,通过CDCC试验检测人血清对转染细胞的杀伤效应.结果:在转染重组有VEGF 基因启动子的荧光素酶报告载体的HepG2中,荧光素酶的活性是对照组的2-3倍;通过CDCC实验发现转染有鼠α1,3GT重组逆转录病毒载体的HepG2细胞经缺氧培养后对人血清的杀伤效应更加敏感.结论:利用VEGF基因启动子介导鼠α1,3GT在缺氧肿瘤细胞中靶向表达并诱导人血清天然抗体对肿瘤细胞产生杀伤效应在肿瘤的靶向基因治疗中具有潜在的临床应用价值.     

Notch配体δ-1对IL-6/sIL-6R融合蛋白诱导红系祖细胞分化成熟的影响

目的 探讨Notch配体δ-1在红系造血细胞分化过程中对可溶性IL-6受体（sIL-6R）生物效应的影响。方法 用CD34免疫磁珠和FACS Vantage流式细胞仪筛选脐血单个核细胞中的CD34^＋CD38^-细胞；将CD34^＋CD38^-细胞用含SCF、Flt3L、TPO和IL-3四种生长因子组合（4GFs）的培养基培养7d，然后用CD36免疫磁珠分离CD36^＋红系祖细胞，用流式细胞术检测IL-6R和血型糖蛋白（GPA）的表达，并分选CD36^＋GPA—IL-6R^＋和CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞，将这两种表型的细胞分别进行集落分析；将CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞用含有4GFs、4GFs＋IL-6或4GFs＋IL-6／sIL-6R融合蛋白（FP6）培养基并在加与不加Notch配体δ-1的情况下培养14d，并对CD36^＋GPA^high成熟红细胞进行计数。结果 CD36^＋GPA^＋细胞中IL-6R^-细胞占95％；CD36^＋GPA^-细胞可分为IL-6R^＋和IL-6R^-两部分，分别占46％和54％；IL-6R^＋细胞形成的粒-单核细胞集落形成单位（CFU—GM）数为2．1±1．8，IL-6R^-细胞形成的红系祖细胞爆式集落形成单位（BFU—E）数为58．2±18．1，明显高于IL-6R^＋细胞形成的CFU—GM数（P〈0．05）；在含有FP6的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（1．400±0．180）×10^6；在含FP6和Notch配体δ-1的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（2．460±0．190）×10^6，明显高于单独含有FP6的培养体系（P〈0．05）。结论 Notch配体δ-1可增强IL-6-红系细胞分化过程中sIL-6R所介导的生物学效应。