手工组织显微切割后的快速DNA提取技术

目的:为寻找一种操作简便、结果稳定可靠的组织处理及切片染色技术,尝试应用组织切片手工显微切割后快速提取DNA的方法,观察提取的DNA质、量是否能满足后续分子水平研究的需要.方法:实验于2004-07/2007-07在广东医学院病理学实验室完成.取广东医学院附属医院病理科提供的子宫颈癌石蜡包埋组织切片,将切片贴于载玻片长时间完全脱蜡后,用苏木精对细胞核进行淡染,再在倒转置显微镜下进行显微切割,将切割下的组织放入装有提取缓冲液的EP管中,整个过程不需更换EP管,不经过复杂的酚一氯仿抽提,采用细胞裂解并蛋白酶K消化的方法,快速、简便提取DNA.结果:经分光光度计检测提取的DNA浓度为0.14～5.25 g/L,A260A280值在1.6-1.8i PCR检测扩增出了预期长度为231 bp的目的片段.结论:手工组织显微切割后快速DNA提取法可以提供足量浓度的DNA,PCR反应模板结果稳定可靠,可满足后续分子水平研究的需要.     

绿色荧光蛋白报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达:用做转染报道基因的可行性鉴定

目的:将经过"人类化"改造的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因质粒导入鼻咽癌CNE1细胞系内,观察GFP报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达情况.方法:实验于2004-07/2007-07在广东医学院病理学实验室完成.将带有GFP报道基因的质粒PAT-GFP及PAT-GFP-LMP1在电容960 μ F,280 V条件下电导转染到鼻咽癌CNE1细胞系中,用选择培养液(嘌呤霉素筛选)继续换液培养直至长出抗性细胞克隆,胰酶消化收集细胞.存488 nm光激发下,用荧光显微镜检测及流式细胞仪观察转染细胞在活的、固定后或裸鼠体内移植后3组细胞的GFP的表达情况并计算转染效率,并用免疫组化法及Western blot法观察插入目的基因LMP1的表达情况.结果:温度在28～32℃的条件下活细胞有GFP基因稳定而持续地表达,但表达较低,表达率为(16.20±1.70)%,且目的基因LMP1的插入明显影响GFP基因的表达,表达率为(3.48±0.28)%,而在固定后或裸小鼠体内移植后均无表达;目的基因LMP1则能稳定而持续地表达.结论:绿色荧光蛋白报道基因GFP在CNE1细胞系中能稳定而持续地表达,且不影响插入目的基因的表达,可用做转染报道基因.     

人鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中bcl—2、p53及c—erbB—2表达与EB病毒LMP1的关系

目的研究EB病毒LMP1在人高分化鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中的作用及与bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达的关系.方法将表达EB病毒LMP1的人高分化鼻咽癌细胞及对照阴性细胞移植于裸鼠体内,然后将移植瘤细胞再移入裸鼠建立第二代移植瘤,如此传至第三代,分别观察移植瘤的成瘤和生长的变化,以免疫组化和图像分析技术检测移植瘤细胞bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达.结果表达LMP1的鼻咽癌细胞原代移植成瘤率达75.0%,比对照组显著增高(P＜0.01).平均潜伏期及体内倍增时间分别为29.6±7.7天和2.81±0.13天,比对照组明显缩短(P＜0.01).表达LMP1的鼻咽癌细胞(C1L)各代移植瘤的bcl-2蛋白表达阳性率显著低于对照组对应的各代细胞的表达(P＜0.01);bcl-2蛋白表达阳性率有显著下降趋势,对照组细胞bcl-2蛋白表达则呈峰值变化;各细胞系体内移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达的变化趋势较为相似,即各细胞系不同代间p53表达的阳性率有显著下降趋势,c-erbB-2蛋白表达阳性率有显著上升趋势.表达LMP1的鼻咽癌各代移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达阳性率显著高于对照组对应的各代(P＜0.01).结论LMP1使鼻咽癌细胞的生长能力增强,在癌细胞的演进中使其向去分化方向发展,这种作用可能通过bcl-2表达的替代通路,并使p53的积聚、活性受抑制和c-erbB-2蛋白表达增高来实现促进细胞增殖,在鼻咽癌细胞演进过程中可能起重要协同作用.     

照射存活后代的鼻咽癌细胞株放射生物学特性研究

目的　了解鼻咽癌细胞系CNE -2Z具有淋巴道转移倾向的克隆株H 5照射存活后代的放射敏感性和体内、体外细胞生长特性。方法　采用克隆形成率检测H 5及照射存活后代 2组癌细胞的放射敏感性 ;体外细胞增殖实验结晶紫染色法检测体外细胞增殖能力 ;用瘤细胞裸鼠体内移植观察 2组细胞的体内增殖、转移能力。结果　H5细胞照射存活后代的放射敏感性比未处理的H5细胞低 ,处理前 2Gy存活率 (SF2 )为 0 .3 0 ,平均致死剂量 (D0 )为 1.93Gy ,处理后细胞的SF2为 0 .49,D0 为 2 .56Gy ;体外细胞增殖减慢 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;体内细胞增殖减慢 ,有显著性差异 (P <0 .0 5) ;成瘤率减小 ,转移率增高 ,体积倍增时间延长 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　照射存活后代的细胞放射敏感性降低 ,体内、体外细胞增殖减慢。     

结合多媒体的病理学实验考试方法改革探讨

病理学是一门研究疾病的发生和发展过程的医学基础学科,实验教学是病理学教学的重要组成部分,它通过对各种静态的病理变化(包含组织学切片和大体标本)的观察来验证理论教学的知识[1],加深对理论知识的理解和记忆.     

病理学标本动画库的构建及其应用

病理学是一门形态学科,病变的特征是医学生学习的重点和难点内容,利用F lash的交互功能和网络传播特点制作病理学大体标本的立体动画库,并应用于病理学的教学实践中。该动画库有助于学生掌握病变特征,提高学习效率;有利于提高学生的自学能力。     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],通常由于骨组织致密,坚硬,并含有骨胶等成分,所以要切好一张高质量的切片(和软组织相比),有一定的困难[2].近年来推出了塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术,但目前尚不够成熟稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,我们在制作此标本时,用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当,用于教学效果良好.而连着皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下(图1～4).     

鼻咽癌组织中RASSF1A基因甲基化的研究

目的观察RASSF1A基因在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎的甲基化情况。方法采用甲基化特异性PCR技术检测16例鼻咽低分化未角化癌和10例鼻咽黏膜慢性炎组织中RASSF1A基因的甲基化。结果RASSF1A基因的高甲基化率在鼻咽癌组织中为93．75％（15／16），在慢性鼻咽炎组织中为0，两组病例的RASSF1A基因高甲基化率差别显著，P〈0．005。结论RASSF1A基因在鼻咽癌组织中呈高甲基化，可能是影响鼻咽癌发生发展的抑癌基因之一。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP1的表达

目的:探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况.方法:用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况.结果:免疫组化及Western bolt 法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达.结论:人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关.     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP 1的表达

目的：探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况。方法：用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况。结果：免疫组化及Western bolt法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达。结论：人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关。