流式细胞术检测体外微核方法的建立

目的： 建立96孔板流式细胞术体外微核自动化检测的方法,并探讨其用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的可能性。方法：试验分为+S9短时处理组(4 h)和-S9持续处理组(24 h),分别选择3个不同浓度的环磷酰胺和丝裂霉素C处理CHO-K1细胞,24 h后收获细胞。采用EMA和SYTOX Green双色标记,流式细胞仪分析96孔板的微核率,并与常规标准平皿培养、细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较。结果：在有或无S9处理条件下,不同浓度的环磷酰胺、丝裂霉素C诱导产生的微核率较溶剂对照组均显著增加(P均<0.05),剂量-效应关系明显。两种微核检测方法的Spearman相关系数(rs)为1.000。结论：流式细胞术检测环磷酰胺、丝裂霉素C作用于CHO-K1细胞的微核试验结果均为阳性,与文献报道一致,因而本试验初步建立了流式细胞术体外微核检测方法。流式细胞术检测微核的方法与人工阅片的方法相关性好,提示该方法用于化合物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价具有良好的前景。     

儿童重症支原体肺炎20例临床分析

目的：探讨重症支原体肺炎的诊断及治疗。方法：分析20例重症支原体肺炎患儿的临床表现、化验诊治过程。结论：肺炎支原体可引起重症肺炎,根据发病机制,对重症支原体患儿除应用大环内酯类抗生素外,可并用头孢类抗生素、肾上腺皮质激素。     

高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察

目的探讨高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的临床疗效。方法将新生儿病房收治的足月中、重度HIE患儿60例,随机分成治疗组(常规药物加高压氧治疗)、对照组(常规药物治疗)。治疗组在常规药物治疗基础上加高压氧治疗,每日1次,5~7d为1疗程,重度HIE需2~3个疗程。结果2组HIE患儿疗效比较:治疗组有效率显著高于对照组(P<0·05);2组新生儿缺氧缺血性脑病患儿预后比较:治疗组发生伤残率低,2组比较差异显著(P<0·05)。结论高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病是减少伤残率、改善预后、提高生存质量行之有效的方法。     

体内Pig-a基因突变试验高通量方法联合验证研究

目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性。方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)低剂量组(10 mg/kg)、ENU中剂量组(20 mg/kg)和ENU高剂量组(40 mg/kg),给药容量均为10mL/kg,经口灌胃给药,每天1次,连续给药3 d。分别于给药前1天、首次给药后第14和30天颈静脉取血,进行Pig-a基因突变分析;首次给药后第4天颈静脉取血,采用流式细胞仪进行微核检测。结果:在首次给药后第14和30天,3种剂量(10、20和40CD59-CD59-mg/kg)下的ENU均导致大鼠外周血RBC和RET频率显著增加(P0.05),Pig-a基因突变结果与之前的基础型试验得到的结果类似,分析速率和分析细胞的数目得到显著提升;3个剂量的ENU均导致明显的微核率升高,与对照组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变高通量试验方法,该试验具有较好的重复性,并提示该试验可以和微核试验结合到同一个试验中。     

非整倍体诱导剂的检测方法及风险评估

非整倍体(aneuploidy)指细胞核内染色体数不是染色体组的整倍数,包括单体、三体、四体、双三体、缺体等,与恶性肿瘤发生密切相关。非整倍体诱导剂(aneugen)指诱导子细胞染色体数目增加或减少,即导致非整倍体形成的物质。现行的遗传毒性试验指导原则要求评估化学物质诱发非整倍体的可能性,但标准的遗传毒性试验组合不包括专门评估非整倍体诱导剂的试验。微核试验结合FISH和CREST染色为染色体数目畸变提供了直接的证据;体外多终点试验和毒性追踪分析可通过MoA检测非整倍体诱导剂。目前对生殖细胞非整倍体诱导剂进行全面风险评估的数据较少,因此在未来有必要开展非整倍体诱导剂对生殖细胞影响的研究,并对其进行全面的风险评估,以补充这一领域数据的空缺。本文对目前哺乳动物体细胞和生殖细胞中非整倍体形成机制、检测方法、危害以及暴露后的风险评估进行综述。     

小儿肺炎支原体肺炎X线表现28例临床分析

目的了解小儿肺炎支原体肺炎的X线影像学改变的特点及临床意义。方法对2003年12月至2004年5月收治的28例确诊为肺炎支原体肺炎患儿的X线表现进行回顾性分析。结果X线胸部CR片10例显示大片状不规则高密度影,10例为淡片状模糊阴影,6例为纹理模糊,2例为纹理增粗;合并胸腔积液2例,合并肺不张3例,合并膈肌粘连1例。右肺改变13例,左肺改变9例,两侧均有改变6例。结论肺炎支原体肺炎X线改变多种多样,以间质改变为主,轻重不一,以大片状高密度影及淡片状阴影为主约占71.4%,以单侧为主约占78.6%,重者呈大片高密度影或可合并胸腔积液、肺不张等,轻者仅为肺纹理模糊或肺纹理增粗。     

基于流式细胞术的组蛋白γ-H2AX磷酸化检测方法的建立

目的：建立基于流式细胞术的生物标记物γ-H2AX自动化检测方法，并探讨此方法用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的前景。方法：试验分为不添加体外代谢活化系统（-S9）长时（24 h）处理组和添加体外代谢活化系统（+S9）短时（4 h）处理组，分别采用CCK-8方法选择4个不同浓度的依托泊苷（ETO）和环磷酰胺（CP）处理人成淋巴TK6细胞，24 h后收获细胞，采用连接荧光分子的γ-H2AX抗体和核酸染料SYTOX Green双色标记，使用高通量流式细胞仪分析组蛋白H2AX磷酸化（γ-H2AX）阳性的细胞比例。结果：与溶剂对照组比较，-S9 24 h处理组，不同浓度的依托泊苷诱导产生的γ-H2AX阳性细胞比例显著增加，量效关系明显（r=0.999，P < 0.05）；+S9 4 h处理组，不同浓度的环磷酰胺诱导产生的γ-H2AX阳性细胞比例亦显著增加，量效关系明显（r=0.988，P < 0.05）。结论：流式细胞仪可快速、准确地分析体外培养的TK6细胞中γ-H2AX的变化，本试验初步建立了基于流式细胞术的组蛋白γ-H2AX磷酸化检测方法。     

布地奈德雾化吸入治疗急性呼吸道感染时频繁剧烈咳嗽的临床疗效观察

目的探讨布地奈德混悬液雾化吸入治疗急性呼吸道感染引起的频繁剧烈咳嗽的疗效。方法 88例患儿随机分成观察组和对照组各44例。观察组：给予抗炎、止咳、化痰治疗＋雾化吸入布地奈德混悬液,1mg/次,1日2次,1～3d;对照组：给予抗炎、止咳、化痰治疗﹢雾化吸入盐酸氨溴索,7.5mg/次,1日2次,1～3d。观察评价布地奈德雾化吸入治疗的疗效。结果观察组显效32例,有效8例,无效4例。对照组显效6例,有效10例,无效28例。观察组有效率明显高于对照组（90.9%vs36.4%,P〈0.05）。2组均无不良反应发生。结论布地奈德混悬液雾化吸入治疗能够使急性呼吸道感染引起的频繁剧烈咳嗽症状很快缓解。     

三色流式细胞术在小鼠外周血微核检测中的验证

采用不同作用机制的遗传毒性阳性药和阴性药对三色流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血微核(MN)进行方法验证,并与常规人工镜检方法对比.每组10只雄性ICR小鼠,分别单次给予溶剂对照(生理盐水或0.5％羧甲纤维素钠)、苯并芘(BaP)、氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤(MTX)、丝裂霉素C(MMC)、甲磺酸甲酯(MMS)、秋水仙素(Col)、硫酸长春新碱(Vinc)、新化合物A或新化合物B,检测各组小鼠外周血中20 000个网织红细胞(RET)的MN数,同时采用常规显微镜计数各组小鼠骨髓中2 000个嗜多染红细胞(PCE)的MN数.FCM检测的外周血中MN-RET百分率与常规显微镜观察的骨髓中MN-PCE百分率有良好的相关性(r=0.913).FCM小鼠外周血微核法是一种灵敏、快速、客观的自动化微核检测法,可以作为常规显微镜小鼠骨髓阅片法的替代方法.