TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型的建立

目的 建立TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型.方法 构建pEGFP-TNNT3(R69H)转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pEGFP-TNNT3(R69H)注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠.用PCR和Southern blot方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western blot的方法检测TNNT3基因表达.结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎82枚,出生40只子代鼠,经PCR和Southern方法检测得到5只转基因阳性小鼠.对其子代小鼠进行RT-PCR、Western blot检测结果显示,TNNT3在转基因小鼠心脏和骨骼肌中表达量明显增多.结论 通过显微注射法使外源基因pEGFP-TNNT3(R69H)在小鼠基因组中整合,成功建立了TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型.     

体外受精-胚胎移植技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用

目的 研究体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用.方法 分别应用自然交配与体外受精方法进行APP/PSl双转基因繁育,比较受精率及产仔数量;腹腔注射PMSG-HCG超排雌性C57BL/6小鼠,分别与12周龄、24周龄、36周龄、52周龄、72周龄的成年雄性APP/PSl双转基因小鼠进行体外受精,将获得的2-细胞胚胎移植到假孕雌鼠的输卵管,通过PCR方法对仔代小鼠进行鉴定.结果 6只雄性转基因小鼠与18只野生型雌性小鼠自然方式交配,实验周期为21d,获得胚胎的受精率为73.3％.应用体外受精的方法用1只雄性转基因小鼠的精子与18只雌性野生型小鼠的胚胎进行体外受精,受精率达到95％,实验周期为4d.两种繁育方式产仔数量阳性生小鼠数量有显著差异（P＜0.05）,阳性生率无显著性差异（P＞0.05）. 12周龄、24周龄、36周龄的APP/PSl转基因雄性小鼠的体外受精结果显示,三种不同周龄的雄性APP/PS1转基因小鼠受精率、产仔数量及阳性率均无显著性差异（P＞0.05）.对应用常规繁育方法难以获得后代的老龄APP/PS1双转基因雄性小鼠（52周龄、72周龄）体外受精率分别为85.6％、84.1％,获得阳性后代18只和14只.结论 APP/PS1双转基因小鼠可以采用IVF-ET技术进行繁育,为APP/PS1双转基因小鼠快速扩大繁育提供一种新方式.     

mTOR/S6K1在2型糖尿病Wistar大鼠肝脏和肌肉的表达

目的应用Wistar大鼠制备2型糖尿病的动物模型,观察肝脏和肌肉组织mTOR/Rps6kb1(S6K1)表达的变化。方法雄性Wistar成年大鼠高脂饲料喂养8周,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)25mg/kg,注射后第4周检测空腹血糖、胰岛素水平,对结果进行统计分析;解剖大鼠,取肝脏和肌肉组织,应用RT-PCR和Western blot检测肝脏和肌肉组织mTOR及S6K1表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血糖值升高(0.05),胰岛素水平下降(0.05),肝脏和肌肉中的mTOR/S6K1蛋白和mRNA表达均升高(0.05)。结论 mTOR及S6K1在2型糖尿病大鼠肝脏和肌肉过表达,提示其可能参与2型糖尿病发病过程。     

突变DJ-1转基因小鼠模型的建立

目的 探讨DJ-1~(L166P)突变基因在帕金森病发生中的作用.方法 构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1~(L166P)真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1~(L166P)基因片段(约3.9 kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行聚合酶链反应和Southern blot检测,对Southern blot鉴定阳性的转基因小鼠进行逆转录聚合酶链反应和Western blot检测.结果 共产生20只子代小鼠,1号和7号为DJ-1~(L166P)转基因阳性小鼠.1号转基因小鼠大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的DJ-1 mRNA表达,均高于正常对照小鼠,但只有大脑中DJ-1 mRNA的表达水平显著高于正常对照小鼠(P<0.05);7号转基因小鼠只有肝、肺组织中有DJ-1 mRNA表达,也高于正常对照小鼠,但差异无统计学意义.只有1号小鼠大脑有His标签蛋白的表达.结论 成功获得1只DJ-1~(L166P)基因突变转基因小鼠模型,为课题的下一步实验研究打下良好的基础.     

Dicer 1转基因小鼠模型的建立

目的 建立Dicer1转基因小鼠模型.方法 构建pcDNA3.I-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导人BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内.出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组化检测Dicer1基冈表达.结果 显微注射172枚卵,移植119枚卵于3只受体输卵管中,2只怀孕,共产仔15只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern榆测6只均为阳性.对Southern检测阳性转基因小鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明Dicer1基因在肝脏、肾脏、肺内均有表达.对腹腔肿胀的转基因阳性1号鼠解剖发现肝脏、脾脏明显增大,胚胎发育异常.结论 成功建立Dicer1基因表达的转基因小鼠模型,该模型为进一步研究DICER1基因功能及miRNA的表达及功能等奠定基础.     

大鼠心脏TNNT2基因的克隆及表达研究

目的克隆大鼠心脏TNNT2基因，研究其表达情况。方法以成年SD大鼠心脏为实验材料，提取其总RNA并反转录；根据Genebank中提供的大鼠TNNT2基因cDNA序列，利用PCR方法扩增此序列，并进行表达研究。结果克隆了大鼠心脏TNNT2基因cDNA全长，反转录后克隆出TNNT2 cDNA全长并与Genebank中提供的序列对比发现了新的cNDA序列，递交至Genebank数据库，登陆号为：EU295527。组织表达谱研究表明TNNT2基因在大鼠心脏、肾、肝、脾、肺、肌肉中均有表达，以心脏中表达最高（P〈0．05）。结论首次克隆了大鼠TNNT2 cDNA，Genebank登陆号：EU295527。TNNT2基因在多种组织中有表达，在心脏中表达最高。     

5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备

目的研究SD大鼠两种繁殖方式对生产性能的影响,提供客观、科学的数据,为大鼠的规模化生产,选择合适的繁殖方法。方法在SPF级屏障设施饲养环境下,对SD大鼠的雌雄6：1循环交配法和雌雄1：1长期同居法进行比较对妊娠率、初生仔鼠重、平均窝产仔数、离乳仔鼠均重、离乳存活率和胎次间隔等生产性能指标的统计分析。结果SD大鼠两种不同繁殖方法的同胎次间的比较：离乳存活率呈极显著性差异（P〈0．01）;初生仔重,窝产仔数,离乳仔重,胎次间隔没有显著性差异（P〉0．05）。结论雌雄6：1循环交配法,可有效提高离乳存活率,提高种鼠的生产效率：同时,能有效控制动物种群数量和生产数量,适宜于大鼠的规模化生产。