八聚体结合转录因子4与蛋白激酶B1基因在卵巢浆液性肿瘤组织表达及耐药相关性研究

目的 研究八聚体结合转录因子4（OCT4）和蛋白激酶B1（AKT1）基因在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达，探讨两者之间相关性及在化疗耐药中发挥的作用。 方法 全部病例来自中国医科大学附属盛京医院2004年1月至2010年10月。采用免疫组织化学SP法对67例卵巢浆液性腺癌（化疗耐药30例，化疗敏感37例）、10例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、10例卵巢良性浆液性囊腺瘤和10例正常卵巢组织中OCT4和AKT1的表达情况进行检测。 结果 OCT4的阳性表达率在卵巢浆液性腺癌、卵巢交界性浆液性囊腺瘤、卵巢良性浆液性囊腺瘤和正常卵巢组织中依次降低，差异具有统计学意义（P=0.002）；在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为83.33%和45.95%，差异有统计学意义（P=0.002）。AKT1蛋白在正常组、良性组、交界性组和恶性组的阳性表达率分别为0、40.00%、70.00%、62.69%，差异具有统计学意义（P=0.001）；在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为76.67%和51.35%, 两组比较，差异有统计学意义（P=0.033）。OCT4蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关，AKT1蛋白与卵巢浆液性癌的临床分期呈正相关（P<0.05）。OCT4与AKT1蛋白在耐药组中呈正相关（r=0.388，P=0.034）；在敏感组无明显相关性（r=0.246，P=0.142）。     

产后6～8周女性阴道微生态的特征及乳杆菌比例影响因素分析

目的:探究产后女性阴道微生态特征及产后女性乳杆菌比例的影响因素。方法:收集2018年12月至2020年1月就诊于沈阳市妇婴医院,行产后复查女性864例为产后组,同期就诊健康体检女性815例为对照组。根据产后组乳杆菌比例将产后组分为乳杆菌比例正常组（n=203）及乳杆菌比例降低组（n=661）。采集患者阴道分泌物行阴道微生态检测,并收集分娩相关信息,分析两组阴道微生态的总体情况及影响产后女性乳杆菌比例的相关因素。结果:产后组阴道炎检出率明显低于对照组（16.09%vs 35.71%,P<0.01）,无阴道炎菌群抑制发生率更高（60.55%vs 14.89%,P<0.01）,产后组以需氧菌性阴道炎（AV）（75.24%）及AV+细菌性阴道炎（BV）（97.06%）为主。阴道微生态检测中,产后组上皮细胞、菌群密集度及多样性均少于对照组,产后组较对照组乳杆菌比例更低（P<0.01）,白细胞及致病菌阳性率均低于对照组（P<0.01）,且阴道清洁度优于对照组（P<0.01）;但Nugent和AV评分及阴道pH均高于对照组（P<0.01）。过氧化氢（H2O2）、白细胞酯酶阳性率高于对照组,而唾液酸酐酶及凝固酶阳性率则低于对照组,以上差异均有统计学意义（P<0.01）。产后女性中乳杆菌比例下降与体质量指数（BMI）和分娩方式有关,BMI<25 kg/m2、剖宫产是产后女性生殖道内乳杆菌比例降低的危险因素[OR 1.817,95%CI （1.309,2.520）,P<0.001;OR 1.820,95%CI （1.294,2.558）,P=0.001]。结论:阴道微生态的失衡、乳杆菌比例的降低在产后女性中普遍存在,剖宫产女性更应关注阴道微生态状况。恢复阴道内乳杆菌的数量及功能,是产后女性生殖健康保健的重中之重,并且均需要警惕需氧菌性阴道炎、细菌性阴道炎的发生。     

OCT4及BIM蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性研究

目的 研究OCT4及Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性,并探讨两者在化疗耐药中的影响.方法 采用免疫组化sp法,对67例卵巢浆液性囊腺癌(化疗耐药30例,敏感37例)、卵巢浆液性囊腺瘤石蜡标本10例、卵巢交界性浆液性囊腺瘤者石蜡标本10例及正常卵巢组织石蜡标本10例,进行OCT4及Bim蛋白表达情况检测.结果 OCT4蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递减,差异有统计学意义(P=0.002);在耐药组与敏感组阳性表达率分别为83.33％和45.95％,差异有统计学意义(P =0.002).Bim蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递增,差异有统计学意义(P =0.002);在耐药组与敏感组阳性表达率分别为43.33％和70.27％,差异有统计学意义(P=0.026).在化疗耐药卵巢浆液性癌中,OCT4蛋白与Bim蛋白表达无明显相关性(γ=0.03;P=0.875);在化疗敏感卵巢浆液性癌中,OCT4蛋白与Bim蛋白表达亦无明显相关性(γ =0.006;P =0.97).OCT4蛋白与Bim蛋白表达与卵巢浆液性癌的发展呈负相关(P＜0.01).OCT4蛋白与Bim蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关.结论 OCT4及Bim蛋白与卵巢浆液性癌的发生与发展有关.OCT4蛋白与Bim蛋白表达在卵巢浆液性癌的发展呈负相关.OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤的发生、发展相互作用.OCT4基因高表达,Bim基因低表达可能是造成卵巢浆液性癌对紫杉醇+铂类化疗耐药的因素之一.     

人抗原RmRNA与蛋白和环氧合酶-2蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨人抗原R（human antigen R，HuR）mRNA与蛋白和环氧合酶-2（COX-2）蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其与卵巢浆液性癌临床病理生物学特征的关系。方法 采用RT-PCR技术、免疫组化方法分别检测中国医科大学附属盛京医院2006年1月至2008年2月收集的31例卵巢浆液性癌组织标本、22例卵巢浆液性良性瘤组织标本中HuR mRNA与蛋白和COX-2蛋白的表达，并以8例正常卵巢组织作为对照组。结果 （1）HuR mRNA在卵巢浆液性癌中表达明显高于卵巢浆液性良性瘤和正常卵巢组织（P<0.05）。HuR mRNA 的表达与卵巢浆液性癌细胞分化有关（P<0.05）,与手术病理分期、淋巴结转移无关（P>0.05）。（2）HuR蛋白相对含量和胞浆表达阳性率在卵巢浆液性癌中的表达显著高于卵巢浆液性良性瘤和正常卵巢组织（P<0.05）。HuR蛋白相对含量和胞浆表达阳性率与卵巢浆液性癌细胞分化有关（P<0.05）,与手术病理分期、淋巴结转移无关（P>0.05）。（3）COX-2蛋白相对含量与卵巢浆液性癌手术病理分期有关（P<0.05）,与细胞分化、淋巴结转移无关（P>0.05）。依据31例卵巢浆液性癌中免疫组化结果半定量分析，经Spearman等级相关分析发现HuR与COX-2之间呈正相关（r=0.680，P=0.000）。结论 卵巢浆液性肿瘤的发展与胞浆中HuR的过表达有一定相关性，HuR与COX-2蛋白在卵巢浆液性癌中的表达呈正相关。     

精脒合酶蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中表达及其与预后关系研究

目的探讨精脒合酶(Srm)蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达情况及其与卵巢浆液性癌临床病理特征及预后的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院2008年1月至2014年12月经手术治疗并于术后病理证实的卵巢浆液性癌组织石蜡切片80例、卵巢交界性浆液性肿瘤组织蜡块切片26例、卵巢良性浆液性肿瘤组织蜡块切片13例及正常卵巢组织石蜡切片12例。应用免疫组化法检测Srm蛋白在不同组织中的表达情况,分析其表达与卵巢浆液性癌临床病理特征的关系;同时对卵巢浆液性癌患者进行生存随访并进行单因素及多因素的生存分析,研究Srm蛋白表达与卵巢癌患者预后的相关性。结果 Srm蛋白的表达水平与患者是否绝经、卵巢浆液性癌FIGO手术病理分期及组织病理分级程度相关(χ~2=4.752、13.182、5.921,均P0.05),与是否存在淋巴转移情况无关(χ~2=1.537,P0.05)。多因素COX模型生存分析显示:FIGO手术病理分期、Srm蛋白表达程度及有无淋巴结转移是影响卵巢浆液性癌预后的独立危险因素(χ~2=5.941、4.699、4.596,均P0.05)。结论 Srm蛋白的高表达与卵巢浆液性癌发病之间存在联系。Srm蛋白可能参与卵巢浆液性癌发生发展,其高表达可能是影响卵巢浆液性癌预后的独立危险因素之一。     

关节镜结合小针刀松解膝内侧副韧带浅层治疗退行性膝关节内侧半月板损伤

目的:探讨采用关节镜结合小针刀松解膝内侧副韧带浅层治疗退行性膝关节内侧半月板损伤的临床效果。方法:选择2016年2月至2018年11月存在膝关节内侧间隙局限性疼痛、绞锁、屈曲受限,X线Kellgren-Lawrence分级Ⅰ-Ⅱ级,MRI提示为膝关节内侧半月板损伤(Ⅲ度)患者56例(56膝),其中男30例(30膝),女26例(26膝),采用关节镜下内侧半月板成形加小针刀松解内侧副韧带浅层。采用Lysholm膝关节评分标准判断手术效果。结果:56例术后均获随访,时间3～24个月,平均10个月。根据Lysholm膝关节评分标准,末次随访膝关节评分(85.72±5.28)分,较术前(37.24±1.32)分提高(P0.05)。结论:关节镜结合小针刀松解膝内侧副韧带浅层治疗退行性膝关节内侧半月板损伤能有效改善膝关节内外侧力学平衡,促进患者膝关节功能的恢复,具有临床推广价值。     

miR-30a-5p/MTA1轴与喉鳞状细胞癌细胞Hep2生物学特性的相关性研究

目的 探讨miR-30a-5p通过靶向调控MTA1对喉鳞癌细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响.方法 通过生物信息技术预测miR-30a-5p靶基因MTA1,并采用实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告实验验证.将miR-30a-5p模拟物(mimics)和对照组(NC)分别转染至对数期的喉鳞癌细胞株Hep2中.利用CCK-8实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.结果 实时荧光定量PCR实验结果显示,实验组和对照组中转染后表达水平分别为(12.62±0.97)和(1.04±0.32),差异有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告实验结果显示,miR-30a-5p模拟物+pGL4.10和+pGL4.73分别与其野生型和突变型比较表达水平为(0.41±0.06)和(0.91±0.01),差异有统计学意义(P＜0.05).在CCK-8实验结果显示,实验组比对照组24、48、72 h的吸光度值相对倍数低,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell细胞迁移实验结果显示,实验组和对照组细胞数目分别为(207.67±7.23)个和(369.00±41.22)个,差异有统计学意义(P＜0.05).在流式细胞术检测细胞周期结果示,实验组G1期、S期和G2期均较miR-NC对照组小,细胞周期阻滞;细胞凋亡结果示,实验组和对照组细胞凋亡率分别为(22.61±5.70)％和(4.52±2.12)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-30a-5p/MTA1轴可能对喉鳞状细胞癌的发生机制产生一定的阻碍作用.     

CRISPR/Cas9构建TGFBI稳定敲除HSC-3细胞系

目的利用CRISPR/Cas9技术稳定敲除人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）细胞系HSC-3中的TGFBI基因。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对于TGFBI外显子3上下游的小向导RNA（small guide RNA, sgRNA）,并以PX330质粒为骨架构建能表达此sgRNA的真核重组质粒。将此质粒以及PGK-puro质粒共转染HSC-3细胞,用嘌呤霉素抗性筛选细胞克隆,并用PCR、核酸电泳和测序初步确定基因敲除情况,再通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法确认细胞中TGFBI的mRNA和蛋白水平的表达变化情况。结果通过CRISPR/Cas9技术,HSC-3中的TGFBI基因外显子3的核苷酸序列已被完全敲除。免疫印迹法检测显示,相对于HSC-3,TGFBI敲除细胞中无法检测到TGFBI蛋白的表达。同时,通过RT-qPCR对部分基因进行检测,发现一系列与细胞周期和上皮间充质转化相关基因表达发生了改变（P＜0.05）。结论通过CRISPR/Cas9技术成功获得了TGFBI基因敲除的HSC-3细胞系,为进一步研究TGFBI在OSCC中的作用及其机制提供了理论基础。     

上海地区汉族健康成年人唾液微生物菌群结构分析

目的 研究健康成年人唾液微生物群落结构。方法 采集37名健康的上海地区常驻汉族居民的非刺激唾液,利用Illumina Hisep测序平台对微生物16 S rDNA的V3~V4高度可变区扩增产物进行测序,分析唾液微生物的群落结构。结果 共获得1329271条优质序列,平均每个样本为（35926.24±4718.069）条,这些序列可归为110个属,12个门。其中有5个优势菌门（97.54%）,以及12个核心菌属(79.71%)。男性与女性两组之间的生物多样性指数及主成分分析等差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 对上海地区汉族健康成年人口腔唾液微生物群落结构的分析,为进一步研究人类口腔唾液微生物群落结构提供了基础资料,且为口腔疾病的防治及诊断提供了参考。