可注射复合人工骨修复犬胸腰椎骨折后的轴向承压能力

背景:此前已有学者从组织学等多角度探讨并进行了可注射复合人工骨作为椎体成形填充剂的实验研究,还需要进一步从术后伤椎轴向承压能力方面探讨此种治疗方法的疗效,以取得在人体上难以得到的直观对比数据.目的:观察在椎体成形术治疗犬胸腰椎骨折过程中植入可注射复合人工骨后伤椎的轴向承压能力.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/2009-01在深圳市龙岗区中心医院外科动物实验室完成.材料:脊柱矫形固定器钉棒Ⅰ型、Ⅱ型由天津正天医疗器械有限公司提供.参照尹庆水等提供的方法制备注射型复合人工骨,低温保存备用.其中珊瑚羟基磷灰石颗粒、重组人骨形成蛋白2冻干粉由解放军军事医学科学院提供,2%几丁糖溶液由解放军第二军医大学与上海其胜生物材料研究所联合研制.方法:1岁龄普通级健康家犬20只,随机分为治疗组和对照组各10只,模仿高处坠落致胸腰段受到屈曲压缩暴力进行造模,治疗组采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位后通过伤椎椎弓根注入复合人工骨行椎体成形治疗.对照组仅采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位内固定.主要观察指标:术后3个月处死动物,取伤椎及上下椎体段脊柱,在微电脑压力测试试验机上测量椎体中心点最大负载压强.结果:实验组100%伤椎中心点负载压强与同个体上下椎体比较差异无显著性意义,恢复了轴向承压能力;而对照组有60%伤椎中心点负载压强与同个体上下椎体比较差异有显著性意义(P<0.05),未恢复轴向承压能力.结论:采用椎弓根螺钉系统复位内固定及可注射人工骨椎体成形治疗胸腰椎骨折可能会有效地恢复术后伤椎抗轴压能力,从而提高手术成功率.     

关节镜下髌周支持带平衡术治疗髌股关节对合异常

目的探讨采用关节镜下髌周支持带平衡术治疗髌股关节对合异常的临床疗效。方法自2007年9月~2011年9月,对53例(62膝)髌股关节对合异常患者,依据其对合不良的严重程度,分别采用关节镜下外侧支持带松解术及关节镜下髌周支持带平衡术进行治疗。结果外侧支持带松解组术前、术后Kujala关节评分分别为(59.49±2.52)、(75.15±3.40)分,髌周支持带平衡组分别为(60.35±3.17)、(88.62±3.74)分,2组术后髌股关节功能均得到改善,其Kujala髌股关节评分术前、术后差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下外侧支持带松解及髌周支持带平衡术均能有效去除髌股关节对合异常所致的应力失衡,防止髌股软骨面进一步磨损,减轻疼痛症状,改善髌骨活动度及关节伸屈功能。但关节镜下髌周支持带平衡术是治疗髌股关节对合异常更为有效的方法。     

延迟植入嗅鞘细胞修复成鼠的胸髓损伤

背景:脊髓损伤后在一定的微环境中有再生的能力。嗅鞘细胞兼具星形胶质细胞和许旺细胞的特性,具有促进脊髓轴突再生的能力。目的:制作成鼠胸髓损伤模型,观察嗅鞘细胞对损伤脊髓轴突再生的作用。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:实验于2001-01/2002-11在中山大学附属第二医院完成。20只成年SD雄性大鼠,体质量(380±20)g,由中山大学实验动物中心提供(机构许可证号:SYXK(粤)2004-0020)。低糖的DMEM培养液(L-DMEM,GibcoBRL公司)、胎牛血清(Hyclone公司)、MBP(髓磷脂碱性蛋白,Sigma公司)、抗神经生长因子受体抗体(Sigma公司)。应用随机数字表完全随机化分为细胞移植组和对照组,每组10只。方法:将成年SD大鼠麻醉断颈处死,无菌条件下取出完整嗅球分嗅神经。采用改良Allen法打击脊髓建立胸髓损伤模型。细胞移植组于损伤脊髓处注入10μL嗅鞘细胞悬液(2.5×1010L-1),对照组仅注入相同剂量DMEM/F12(1∶1)培养液。移植后6周通过组织学和免疫组织化学方法观察嗅鞘细胞对脊髓轴突再生的影响。主要观察指标:①抗神经生长因子受体抗体染色鉴定嗅鞘细胞。②髓磷脂碱性蛋白染色观察髓鞘的修复。③嗜银染色观察神经轴突再生。结果:细胞移植组有2只动物死亡,对照组有3只死亡,共15只大鼠进入结果分析。①细胞移植组可见损伤脊膜完整,较正常脊髓稍变细。苏木精-伊红染色见损伤区有多极细胞,且与脊髓组织有移行过度现象,说明存活的嗅鞘细胞与宿主融合良好。新生的轴突多呈束状,周围有小圆淋巴细胞浸润。嗜银染色可见再生轴突长入损伤区组织中,多与束状排列的多极细胞伴行;对照组脊髓损伤处明显变细,脊膜尚完整。苏木精-伊红染色见脊髓损伤区未见新生轴突。嗜银染色未见再生轴突。②细胞移植组可见多极细胞,多呈束状排列,胞浆内有大量抗神经生长因子受体抗体阳性颗粒存在,进一步证明嗅鞘细胞移植6周后仍然存活,且与宿主融合良好。髓磷脂碱性蛋白染色见损伤区有呈线状髓磷脂碱性蛋白阳性纤维,提示损伤区两端均有髓鞘样物质产生,且互相靠拢。同时多极细胞中也发现有髓磷脂碱性蛋白阳性物质存在,说明移植的嗅鞘细胞有产生髓鞘样物质的作用。对照组未见轴突再生。结论:嗅鞘细胞延迟植入成鼠打击伤后脊髓后,可存活并产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生。     

人骨髓间质干细胞和嗅鞘细胞移植对大鼠急性脊髓损伤功能修复的比较研究

目的对比人骨髓基质细胞(BMSCs)与人胚嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠脊髓损伤功能修复的影响。方法将45只SD大鼠分成脊髓损伤后BMSCs移植组(BMSCs组)、OECs移植组(OECs组)和PBS对照组(PBS组),通过BBB评分、运动诱发电位(MEP)评估脊髓传导功能的改善状况,免疫组织化学方法检测移植细胞存活和分化情况,病理形态学方法观察组织结构修复情况。结果BMSCs组BBB评分高于OECs组(P<0.05);两细胞治疗组MEP潜伏期明显缩短(P<0.05);BMSCs组嗜银染色可见脊髓损伤近端有较多再生纤维向远端延伸,形成神经纤维束,而OECs组再生纤维较少;两种移植细胞均可在损伤处部分存活,BMSCs组可见BMSCs来源的细胞Nestin、NF、GFAP的阳性表达。结论BMSCs移植比OECs移植能更有效促进大鼠急性脊髓损伤修复。     

应用新型脊髓打击器建立急性脊髓挫伤动物模型

可靠性高、重复性好的脊髓损伤(SCI)模型对于阐明其病理生理机制和评价损伤后干预手段的效果非常关键.遵循重物坠落致伤法的原理.我们研发了可通用于大小实验动物的新型脊髓打击器(命名为SS-Ⅱ型),结合调节打击高度,建立相应的不同程度脊髓挫伤模型.     

丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166。丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%。结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞。     

椎弓根钉复位内固定结合可注射复合人工骨修复胸腰椎骨折的稳定性

背景:胸腰椎骨折后路椎弓根螺钉系统复位后易出现椎体内空壳现象,防止断钉、断杆、螺钉松动、弯曲、Cobb角增加及后期椎体高度丢失等并发症是近年来脊柱外科研究的热点之一.目的:观察椎弓根钉系统复位内固定结合可注射型复合人工骨椎体成形修复胸腰椎骨折的效果.设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2005-06/2006-12在深圳市龙岗中心医院骨科进行.对象:胸腰椎骨折患者17例,男11例,女6例,平均年龄38.2岁.损伤节段:T112例,T125例,L17例,L23例.压缩性骨折9例,爆裂性骨折8例.合并有神经损伤13例.方法:采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位后通过伤椎椎弓根注入复合人工骨行椎体成形治疗,治疗前后行X射线摄片和CT检查并随访.主要观察指标:①材料与宿主的生物相容性反应.②人工骨吸收情况.③伤椎椎体前缘高度、后凸Cobb角.结果:17例患者均获随访,随访大于10个月.①随访期内无内固定材料松动及断裂现象,椎体高度恢复满意,无再塌陷,人工骨椎体内充填满意,1例发生椎管漏.②CT显示注入椎体内的人工骨均在4个月内吸收.③治疗后伤椎压缩程度和后凸畸形Cobb角明显小于治疗前[(9.79±3.23)%,(51.28±8.67)%,P<0.01;(5.6±3.8)°,(23.4±7.6)°,P<0.0].结论:采用椎弓根螺钉系统复位内固定及可注射人工骨椎体成形治疗胸腰椎骨折解决了椎体内的空壳问题,减少了修复后并发症的发生,提高了脊柱的稳定性.     

结缔组织生长因子对体外培养的兔关节软骨细胞增殖和表型的影响

背景：在关节软骨损伤修复的过程中,由于目前实验室中常用的细胞因子存在半衰期短、价格昂贵等缺点,不能广泛应用于临床。 目的：假设结缔组织生长因子对体外培养的兔关节软骨细胞增殖和表型有一定的影响,为组织学方法修复关节软骨缺损寻找新的细胞因子。 设计、时间及地点：随机区组设计对照实验,于2007-08/2008-02在深圳龙岗中心医院完成。 材料：健康1月龄新西兰大白兔2只;结缔组织生长因子为Propetech公司产品。 方法：获取兔关节软骨组织,将其剪碎,Ⅱ型胶原酶消化法原代分离培养兔关节软骨细胞,待细胞铺满瓶底80%胰酶消化传代,取其第2代,细胞贴壁后随机分组,实验组分别加入30,50,100,150 μg/L的结缔组织生长因子,对照组仅加入DMEM培养液进行体外培养。 主要观察指标：采用倒置相差显微镜下观察细胞形态及数量改变,采用四唑盐(MTT)法检测不同浓度的结缔组织生长因子对软骨细胞增殖的影响,免疫组织化学法(SABC法)检测Ⅱ型胶原的表达情况。 结果：①结缔组织生长因子作用下的兔关节软骨细胞生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,部分细胞聚集成团,形成软骨结节。②结缔组织生长因子能显著促进兔关节软骨细胞增殖,与对照组相比差异具有显著性意义(P < 0.01)。不同质量浓度的结缔组织生长因子均能促软骨细胞增殖,100 μg/L为最佳作用质量浓度(P < 0.01)。③结缔组织生长因子作用下的兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达增多,且始终为阳性。 结论：结缔组织生长因子可以刺激体外培养的兔关节软骨细胞增殖,促进软骨特异性Ⅱ型胶原表达,维持软骨表型。结缔组织生长因子可能用来作为组织工程学修复软骨缺损,治疗骨关节炎的新的生长因子。     

人神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响

目的:探讨人神经干细胞(hNSCs)移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响及可能机制。方法:取2～3个月流产胎儿海马区组织,体外培养神经干细胞;采用通用型脊髓打击器将24只成年SD大鼠制成脊髓损伤模型,伤后第8天随机分为移植组和对照组,于损伤中心分别注入CM-DiI标记的hNSCs悬液和DMEM/F12培养液。分别于hNSCs移植后当天及1、2、3、4、6、8周采用Basso,Beattie,Bresnahan(BBB)行为功能评定量表评估大鼠后肢运动功能恢复情况。移植后第4、8周取损伤部位脊髓,行病理切片,免疫组化方法观察移植细胞的存活和迁移,并检测损伤脊髓处胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核心抗原(NeuN)、2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、神经巢蛋白(Nestin)等抗原的表达。结果:移植组后肢运动功能评分随时间延长而逐渐升高,移植1周时后肢运动功能有所改善,与对照组无明显差异(6.4±0.99 vs 6.0±0.93,P>0.05);移植4周时后肢运动功能比1周时有明显恢复,BBB评分明显高于对照组(9.7±1.04 vs 7.4±0.95,P<0.05);移植的hNSCs可在损伤脊髓处长时间存活(至少8周),并分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。结论:人神经干细胞可在损伤脊髓处向神经元和神经胶质细胞分化,并能促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的部分恢复。     

关节镜下治疗前交叉韧带胫骨止点撕脱性骨折

目的 探讨在关节镜辅助下对Ⅱ、Ⅲ型胫骨止点骨折进行微创治疗的手术方法及近期疗效。方法 自2001年5月至2006年6月，共手术治疗27例前交叉韧带胫骨止点撕脱性骨折，其中合并半月板损伤11例。术中在关节镜辅助下，首先处理合并损伤，然后通过关节镜观察应用探钩等对骨折进行复位，通过克氏针临时固定，“C”臂机透视确认后，再根据骨折移位和骨片大小选择空心钉螺钉或钢丝等固定。21例应用AO松质骨螺钉固定，5例采用钢丝固定，1例用可吸收线缝合固定；术后按程序进行康复锻炼。结果 27例患者均获得随访，平均随访时间（12±5）个月，术后无切口愈合不良、感染和骨筋膜间室综合征等早期并发症，骨折在3～4个月骨性愈合，23例膝关节功能完全正常，4例活动范围0°～100°，根据Rasmussen评分，26例病例为优良，1例为可，本组总评分为27±1。结论 在治疗胫骨止点Ⅱ、Ⅲ型骨折时，采用关节镜辅助下撬拨复位空心钉、钢丝等固定的手术，具有创伤小、可同时处理关节腔内的其他损伤等优势，可以获得骨折愈合快、膝关节功能良好的近期疗效，因此值得推广应用。