同种异体输血对肝癌患者术后免疫功能的影响

同种输血是临床治疗的重要手段之一，对严重出血、贫血、多种血液性疾病、晚期肿瘤有辅助治疗作用，对外科复杂手术的顺利进行起到了保障作用。但近年来发现同种输血可能会导致部分肿瘤患者术后复发率增加，5年生存率下降^[1],并初步认为与同种输血引起机体免疫功能下降有关。为了研究血液中何种成分影响免疫功能，笔者选择原发性肝癌患者作为研究对象，观察不同成分输血后肝癌患者细胞及体液免疫功能的变化，以探讨解决同种输血的副作用。     

以案例为中心的心血管系统基础课程整合初探

为适应现代医学模式的发展,我校开展以器官系统为基础的临床专业课程整合改革,本课程组承担"心血管系统"基础课程整合。通过构建"冠心病"临床案例并设计问题,按照从宏观向微观、从形态向功能、从正常向疾病开展教学活动。理论课以LBL和CBL相结合,实验课注重验证性和设计性实验相结合,充分体现了临床专业"早临床、多临床、反复临床"的教学要求,教学效果良好。     

复制缺陷型重组腺病毒介导mlFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的研究

目的：探讨人类复制缺陷型重组腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的可行性和效果。方法：利用人类复制缺陷型重组腺病毒将目的基因mIFN-β经体外、体内两种途径导入小鼠黑色素瘤细胞（B16细胞）中，观察体外转mlFN-β基因的B16细胞的体内致瘤性和瘤苗作用，及通过腺病毒载体介导的mIFN-β对体内局部肿瘤治疗和抗肿瘤转移的作用。结果：1）携带目的基因的重组腺病毒感染B16细胞能获得较高的转移效率和目的基因的有效表达；2）将mIFN-β基因导入B16细胞对B16细胞的体外增殖能力无明显影响，但能显著提高细胞表面MHC-I类抗原的表达；3）将转mIFN-β基因的B16细胞接种小鼠，其体内致瘤性明显降低．且对对侧野生型B16细胞的致瘤性有抑制作用；4）瘤体内注射和经尾静脉注射途径给予AdCMV mIFN-β．对局部肿瘤和转移瘤有治疗作用。结论：利用人类复制缺陷型腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤是可行的，并具有较好疗效，提示用腺病毒载体携带有效的目的基因来开发瘤苗和治疗肿瘤具有良好的临床应用前景。     

异位骨化的预防与治疗

异位骨化(HO)是正常骨骼系统之外的软组织出现异常新生骨。目前除使用常规药物外,还可以通过小分子受体兴奋剂/抑制剂、基因治疗、中和抗体和放射治疗等靶向异位骨形成的微环境、必要信号通路、关键中介及前体细胞等进行预防与治疗,此外手术切除是异位骨化最直接有效的治疗方法。本文还对不同防治方法的局限性做了总结,希冀为临床治疗提供新思路。     

噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。     

获得性异位骨化的研究进展

获得性异位骨化(aHO)是指正常骨骼系统之外出现的异常骨组织。aHO的创伤来源丰富且病因复杂,BMP信号通路、Hedgehog信号通路、Wnt/β-catenin信号通路和NF-κB信号传导通路在aHO的致病过程中发挥重要作用。     

复制缺陷型重组腺病毒介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的研究

目的:探讨人类复制缺陷型重组腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的可行性和效果。方法:利用人类复制缺陷型重组腺病毒将目的基因mIFN-β经体外、体内两种途径导入小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)中,观察体外转mIFN-β基因的B16细胞的体内致瘤性和瘤苗作用,及通过腺病毒载体介导的mIFN-β对体内局部肿瘤治疗和抗肿瘤转移的作用。结果:1)携带目的基因的重组腺病毒感染B16细胞能获得较高的转移效率和目的基因的有效表达;2)将mIFN-β基因导入B16细胞对B16细胞的体外增殖能力无明显影响,但能显著提高细胞表面MHC-I类抗原的表达;3)将转mIFN-β基因的B16细胞接种小鼠,其体内致瘤性明显降低,且对对侧野生型B16细胞的致瘤性有抑制作用;4)瘤体内注射和经尾静脉注射途径给予AdCMVmIFN-β,对局部肿瘤和转移瘤有治疗作用。结论:利用人类复制缺陷型腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤是可行的,并具有较好疗效,提示用腺病毒载体携带有效的目的基因来开发瘤苗和治疗肿瘤具有良好的临床应用前景。     

用差异显示杂交技术筛选与造血相关的新基因

目的 建立4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库，并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法 表达性差异显示技术（RDA）、核芏酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果 建立了4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库。该文库富集了造血及肝生长调控相关基因，部分克隆序列测定及分析表明该库含有重要的未知功能新基因，具有一株新基因可能与红细胞增殖、分化有关。结论 RDA技术为寻找新的基因提供了有效的手段。该EST库内富含了与造血相关基因包括一株新基因。     

HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析

目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。     

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建

目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。