人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)理想的分离、培养方法。方法采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁法分离培养人骨髓干细胞,并将其分别置于普通培养瓶6、0Co培养瓶中培养,应用倒置显微镜和免疫组化法观察和鉴定骨髓间充质干细胞;流式细胞术检测细胞表面标志。结果人骨髓干细胞呈均一梭形、成纤维细胞样,形成集落样生长。60Co培养瓶细胞贴壁情况明显好于普通培养瓶,且费用低;免疫组化及流式细胞术显示CD34、CD45表达为阴性,CD29、CD44表达为阳性。60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高,增殖力强,克隆形成早,传代时间短。结论全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞,其中60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养简单易行,骨髓干细胞增殖快,活性好,传代力持久。可以收获大量、高纯度的MSCs;本实验为MSCs进一步的研究与临床应用提供了实验方法及依据。     

带J链的α-防御素-1基因转染COS-7细胞后的表达检测

目的将α-防御索-1（HNP-1）基因与J链基因重组为一种新的杀菌肽分子J-HNP-1，观察J-HNP-1在细胞内的表达及分泌情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法分别从pCH-J质粒和pBabeNco-HNP-1质粒中扩增出J链和HNP-1；进行重组PCR，获取J-HNP-1 DNA片段．并插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3．1（-）／Myc-HisC中；用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入COS-7细胞。然后应用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测His-tag标签基因。结果用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约24ku处均有强反应条带显示，其大小与预测相符；对照组未见相应条带显示。结论采用Western blot检测到新的杀菌肽分子J-HNP-1在细胞内得到表达并分泌到细胞外．为进一步研究J-HNP-1杀菌肽的抗菌活性奠定了基础。     

祛湿解毒软坚汤治疗囊肿性痤疮疗效观察

目的：探讨中药祛湿解毒软坚汤治疗囊肿性痤疮的疗效及安全性。方法将139例囊肿性痤疮随机分为观察组70例和对照组69例。观察组口服祛湿解毒软坚汤，每天1剂，对照组口服阿维A胶囊每次10 mg，每天3次，疗程均为6周，对比分析两组的治疗效果、安全性及停药1个月时复发情况。结果治疗6周时观察组总有效率为90.0%（63/70），对照组为85.5%（40/69），两组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）；停药1个月时两组总有效率分别为85.7%（60/70）和66.7%（33/69），观察组的疗效显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0.01）；观察组不良反应率为8.6%（6/70），对照组为37.7%（26/69），观察组安全性显著优于对照组，差异有统计学意义（P〈0.01）。结论祛湿解毒软坚汤治疗囊肿性痤疮疗效肯定，安全性高，复发率低。     

研究生培养与实验室开放的结合与应用

研究生培养是指在加强基础知识和基本理论培养的同时，高度重视研究生创新能力培养。其内容涉及创新意识，创新思维，创新技能，创新人格等多个方面。而我们开放性实验室则给研究生培养提供了有利条件，在完成研究生培养的同时，也使开放性实验室自我得到了完善。将研究生培养与开放性实验室有机地结合在一起，对双方都起到了极大的促进作用。     

一种改良的质粒DNA的快速提取方法

目的：建立一种确实有效的更实用的小量质粒ＤＮＡ的提取方法。方法：将一含有目的质粒的大肠杆菌扩增后采用改良后的方法提取质粒ＤＮＡ，然后采用紫外分光光度计测定含量，并且进行酶切。结果：每毫升原细菌培养物质粒ＤＮＡ的产量明显增高，且酶切效果极好。结论：改良后的质粒ＤＮＡ提取法具有速度快、收获量多、纯度高、经济又方便等优点，适合于应用与推广。     

白色念珠菌粘附肠上皮细胞及IgA及其作用的体外观察

目的：观察特异ＩｇＡ抑制白色念珠菌（白念菌）粘附的作用：方法：首先建立肠上皮细胞ＩＥＣ－６在玻片表面生长西式，将特异ＩｇＡ阳性肠粘液、阴性肠粘液以及抗ＩｇＡ血清中和后的肠粘液分别作用白念菌，收集菌并与上述细胞共同孵育。计数粘粘数，并换算出抑制率。结果：含有特异抗白念菌ＩｇＡ的肠粘液抑制白念菌优于其它肠粘液。结论：持异ＩｇＡ在肠粘液中起重要的抗粘附作用。     

人中性粒细胞防御素HNP1-J链融合多肽的免疫印迹检测

目的:人中性粒细胞防御素具有广谱杀菌活性.将人中性粒细胞肽(HNP)-1基因与J链基因融合转染其他细胞有可能使HNP表达而发挥杀菌作用.文中分析HNPl与J链融合基因在COS-7细胞中表达蛋白的影响因素. 方法:应用免疫印迹技术,注意控制影响蛋白转印的关键条件,分析影响J-HNP1蛋白表达的技术因素.结果:成功检测到融合基因J-HNP1在细胞内的表达. 结论:采用Western blot法可检测到J-HNP1在细胞内的表达并可分泌到细胞外.     

烧伤后小鼠小肠潘氏结RNA的快速制备

目的 本实验拟建立一种更经济、实用、简便又快速的ＲＮＡ制备方法。方法 利用改进后的方法及试剂盒提取烧伤后小鼠小肠潘式结组织中的ＲＮＡ，紫外分光光度计测定Ｄλ值、电泳、然后进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果 １紫外分光光度计测定所提ＲＮＡ Ｄ２６０／Ｄ２８０比值均在２．０左右。第１ｇ小鼠小肠潘氏结组织ＲＮＡ的平均产量为３００～５００μｇ。（２）ＲＮＡ甲醛变性琼脂糖凝胶电泳显示所提总ＲＮＡ完整性好。（３）ＲＴ－Ｐ     

前臂贵要静脉转位建立血管内瘘的临床应用

目的 探讨前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘的方法.方法 自2007年12月至2010年3月,对维持性透析29例进行前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘手术治疗.29例中有18例为原桡动脉-头静脉内瘘因并发症失去功能,11例初次行血管内瘘手术.手术方式采用贵要静脉转位与肱动脉端侧吻合10例;贵要静脉转位与桡动脉端端吻合13例;贵要动脉与尺动脉端侧或端端吻合6例,吻合口直径为5.0～8.0 mm.结果 29例中,1例术后血肿压迫闭塞,2例术后内瘘成熟不良,其余手术一次取得成功,术后血流量达200～350 ml/min.对心功能未造成不良影响,未出现严重并发症.结论 前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘手术,是尽量利用自身血管条件,建立内瘘的一种行之有效的方法.     

老年下肢深静脉血栓形成与Cockett综合征

摘要：目的 探讨老年人的下肢深静脉血栓形成(DVT)与Cockett综合征(CS)的关系。方法 将13年间收治的89例髂股静脉血栓患者，分成老年组和中青年组，分析两组DVT的发病原因，比较两组DVT与CS的关系。43例≥60岁者为老年组，46例＜60岁者为中青年组，两组均行手术取栓治疗。结果 老年组伴有CS者25例，发生率为58.1%；中青年组伴有CS者37例，发生率80.4%，两组差异有显著性（P<0.05）。结论 CS是DVT的重要原因之一；老年人DVT伴CS的发生率较中青年低，而老年人因卧床、外伤骨折、肿瘤、高凝等因素所致的DVT患病率增高。