启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响

为了建立近似于临床PTCA及支架术后再狭窄的动物模型。经颈动脉入路将镍钛记忆合金自展支架植入犬股动脉，12周后进行病理学观察。支架植入段血管平滑肌细胞大量增殖。胶原合成增加，新生内膜形成，造成管腔明显狭窄。经颈动脉将记忆合金支架植入犬股动脉方法操作简单，内膜增生可靠，病理过程近似临床再狭窄。是研究支架术后再狭窄，尤其是平滑肌细胞迁移。增殖的可靠动物模型。     

在家蝇中表达人胰岛素基因的研究

目的 研究人胰岛素基因在家蝇中的表达，建立家蝇生物反应器。方法 以家蝇作为实验动物，利用BAEKON6000型基因转移仪将胰岛素基因组基因导入家蝇进行实验研究。收集家蝇新产卵(1—1．5h内)，将环状质粒pCMV—mINS、pCMV-ImINS、pEF1α—mINS、pEF1α—ImINS以10μg/ml浓度分别与新采集的家蝇卵混合后进行电转移。经人工孵化发育为成虫(R)，G418(3．0mg／ml)筛选Fl代，待F1代发育至成虫并产卵后，采用PCR、Tricine-SDS-PAGE和Western-blot技术对F2代蝇蛆进行整合与表达水平检测。结果 四种质粒均能在家蝇中表达人胰岛素，表达量各占蝇蛆总蛋白0．207％、0．357％、0．473％和0．831％。结论 人胰岛素基因能够在蝇蛆中表达，即蝇蛆机体可对人胰岛素原进行翻译后加工。     

人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究

目的: 构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体.方法:常规法构建重组质粒pEF1α-ImINS.将重组质粒pEF1α-ImINS和胰岛素其他3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾(BHK)细胞,经G418筛选,阳性克隆传至20代,分别用放射免疫和免疫组化技术分析胰岛素和(或)胰岛素原在BHK细胞中表达的情况.并用重组质粒pEF1α-ImINS转染BHK细胞的阳性克隆20代的PBS细胞悬浮液(5×107个/只)及其培养上清(0.5 ml/只)对昆明小鼠行腹腔注射,通过对注射前后小鼠血糖值测定,分析转基因产物降血糖的生物学效应.结果:胰岛素的表达量最高为7.984 μIU/ml ,胰岛素表达水平的灰度值在BHK细胞质中为177.5±15.10,细胞核中为150.3±21.43;昆明小鼠注射pEF1α-ImINS转染BHK克隆细胞株的悬浮液后6 h与注射前24 h血糖值比较,差异极显著(P<0.01).结论:BHK细胞中重组质粒pEF1α-ImINS是胰岛素表达量最高的质粒;pEF1α-ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达,并且对正常小鼠有降血糖的作用.     

人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及其降血糖效应

背景:随着分子生物学和分子遗传学技术的发展和应用,人们利用基因工程方法进行人胰岛素的生产研究,并从分子水平再造分泌胰岛素的克隆细胞系来替代胰岛素注射和胰岛移植治疗糖尿病。目的:构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。设计:随机对照实验研究。单位:中国医科大学实验动物部。材料:实验选取健康成年清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,自由饮水,自由采食人工颗粒料,每日光照14h,实验动物由长春解放军军需大学实验动物中心提供。大肠肝菌DH5α和幼仓鼠细胞系由实验动物中心保存。方法:常规法构建重组质粒pEF1α-ImINS。将重组质粒pEF1α-ImINS和胰岛素其他3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾细胞,经G418筛选,阳性克隆传至20代,分别用放射免疫和免疫组织化学技术方法分析胰岛素和/或胰岛素原在幼仓鼠肾细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾细胞的阳性克隆20代的PBS细胞悬浮液(5×107细胞/只)及其培养上清(0.5mL/只)对昆明小鼠行腹腔注射,通过对注射前后小鼠血糖值测定,分析转基因产物降血糖的生物学效应。主要观察指标:胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中整合和表达的结果,以及注射前后血糖的变化。结果:胰岛素的表达量最高为7.984mIU/L,胰岛素表达水平的灰度值在幼仓鼠肾细胞质中为177.50±15.10,细胞核中为150.30±21.43;昆明小鼠注射pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾克隆细胞株的悬浮液后6h血糖值明显下降,与注射前24h比较,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论:幼仓鼠肾细胞中重组质粒pEF1α-ImINS是胰岛素表达量最高的质粒;pEF1α-ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达,并且对正常小鼠有降血糖的作用。     

人乙肝病毒基因在家蝇基因组中的整合

背景与目的:探讨人乙肝病毒基因能否整合在家蝇基因组中.材料与方法:构建人乙肝病毒基因质粒载体pHBVneo,以电转移方式在新生家蝇蝇卵中实施HBV基因转移,通过特异PCR反应鉴定HBV基因在转人乙肝病毒基因家蝇基因组中的整合情况.结果:成功构建了人乙肝病毒基因质粒载体pHBVneo,并在转HBV基因家蝇基因组中检测到特异HBV基因存在.结论:人乙肝病毒基因能够在家蝇基因组中整合.     

人胰岛素基因重组杆状病毒在家蝇中表达的研究

目的:利用杆状病毒表达系统进行人胰岛素基因在家蝇中表达的研究.方法:用携带有人胰岛素基因的重组杆状病毒感染家蝇幼虫,用放射免疫技术、Tricine-SDS-PAGE和Western-blot技术对蝇蛆胰岛素表达水平进行检测.结果:重组的杆状病毒感染家蝇幼虫后,蝇蛆中有人胰岛素的表达,表达量为37.401μIU/ml,占蝇蛆总蛋白的0.583%.结论:利用杆状病毒表达系统可以在家蝇蝇蛆中表达人胰岛素.     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

GFP转基因指示系统建立的研究

用环磷酰胺分别按１００、１５０、２００和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量对小鼠一次腹腔注射，均可使小鼠外周血白细胞在注药后４ｄ降至最低，给药后５ｄ回升，给药后６ｄ超越用药前水平，并维持相当长一段时间。白细胞降至最低的水平与用药剂量呈负相关。对白细胞总数每天的动态变化分析结果提示：能提高此模型小鼠外周血白细胞低峰值的治疗手段，或可视为防止化疗引致外周血白细胞减少症的方法。     

人生长激素转基因家蝇表达载体的构建与鉴定

目的：构建人生长激素(hGH)转基因家蝇表达载体。方法：将hGH基因片段分别与线性去磷pcDNA3和pCMVGFP载体连接，经转化、克隆扩增和快速鉴定等步骤筛选可疑重组子．通过特异性限制性内切酶切割．琼脂糖电泳进行鉴定。结果：成功构建hGH转基因家蝇表达质粒载体pchGH和pcFhGH。结论：为建立hGH转基因家蝇模型提供了基本的实验条件。     

人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及其降血糖效应

背景：随着分子生物学和分子遗传学技术的发展和应用，人们利用基因工程方法进行人胰岛素的生产研究，并从分子水平再造分泌胰岛素的克隆细胞系来替代胰岛素注射和胰岛移植治疗糖尿病。 目的：构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。 设计：随机对照实验研究。 单位：中国医科大学实验动物部。 材料：实验选取健康成年清洁级昆明小鼠40只．雌雄各半，自由饮水，自由采食人工颗粒料，每日光照14h，实验动物由长春解放军军需大学实验动物中心提供。大肠肝菌DH5α和幼仓鼠细胞系由实验动物中心保存。 方法：常规法构建重组质粒pEF1α—ImINS。将重组质粒pEF1α—ImINS和胰岛素其他3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾细胞，经G418筛选，阳性克隆传至20代，分别用放射免疫和免疫组织化学技术方法分析胰岛素和／或胰岛素原在幼仓鼠肾细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾细胞的阳性克隆20代的PBS细胞悬浮液（5&;#215;10^7细胞／只）及其培养上清（0．5mL/只）对昆明小鼠行腹腔注射，通过对注射前后小鼠血糖值测定，分析转基因产物降血糖的生物学效应。 主要观察指标：胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中整合和表达的结果，以及注射前后血糖的变化。结果：胰岛素的表达量最高为7．984mIU／L，胰岛素表达水平的灰度值在幼仓鼠肾细胞质中为177．50&;#177;15．10，细胞核中为150．30&;#177;21．43；昆明小鼠注射pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾克隆细胞株的悬浮液后6h血糖值明显下降，与注射前24h比较，差异有极显著性意义（P〈0．01）。 结论：幼仓鼠肾细胞中重组质粒pEF1α—ImINS是胰岛素表达量最高的质粒；pEF1α—ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达，并且对正常小鼠有降血糖的作用。