快速检测汉滩病毒新型实时荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

目的建立一种汉滩型汉坦病毒(Hantaan virus,HTNV)荧光定量(RT-PCR)的检测方法,以便快速准确地检测HTNV。方法利用Beacon Designer7.0设计引物和探针,以HTNV的S基因片段为模板,进行实时荧光定量RT-PCR,评价此方法的特异性及灵敏度。结果建立的RT-PCR方法对HTNV的最低检出限为4.08copies/μL,模板Ct值与稀释浓度的对数之间具有良好的线性关系,标准曲线方程为Y=-3.4118X+41.997,扩增效率为96.4%,R2=0.994。结论所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可应用于HTNV的快速检测。     

秦皇岛口岸首例输入性登革热病例的分子溯源

目的对2012年秦皇岛口岸的首例登革热输入性病例进行分子溯源,确定病毒的基因型别及感染来源。方法应用ELISA方法和实时荧光RT-PCR方法对患者进行初筛,利用RT-PCR法扩增病毒的NS1基因并测序,根据获得的序列进行同源性分析、遗传距离计算及系统进化树的构建。结果从患者2份血清(QHD-01-BS1和QHD-01-BS2)中检测到Ig M抗体阳性,从QHD-01-BS1及尿液(QHD-01-US)中检测到登革热2型病毒的NS1基因。同源性分析发现QHD-01-BS1(US)与COM基因型中的印度株GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01同源性最高,为97.3%;QHD-01-BS1(US)的遗传距离与COM基因型遗传距离最小,为0.04;进化分析显示QHD-01-BS1(US)与GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01亲缘关系最近。结论分子溯源证实患者感染的登革热病毒与来源于印度的登革热2型病毒亲缘关系最近,指示其传染源极有可能在印度。     

江苏省淮安市蚊虫感染沃尔巴克氏体的调查

目的了解淮安市蚊种自然感染沃尔巴克氏体Wolbachia的特点及Wolbachia种群遗传多样性研究,为蚊媒及蚊媒传染病的生物防治提供科学依据。方法用诱蚊灯法采集蚊虫,对采集的蚊种进行DNA提取,采用PCR扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mt COI)基因及wsp基因、测序及系统进化分析。结果在淮安市捕获蚊种5种共计1 640只,Wolbachia在蚊虫样本组的总感染率为28. 05%(23/82)。淮安市蚊种携带的Wolbachia的核苷酸序列相似性为71. 5%~99. 9%,氨基酸序列相似性为70. 7%~99. 9%。系统进化分析显示淮安蚊种携带的Wolbachia被划分为Mors、Dei和Pip组。淮安蚊种携带的Wolbachia种群有4个单倍型,Wolbachia的单倍型多样性Hd=0. 597,核苷酸多样性π=0. 120,多态性位点S=151。结论淮安市蚊虫普遍存在Wolbachia的感染,其基因型为Mors、Dei和Pip。     

淮阴市市售矿泉水卫生质量抽查分析

为保障广大消费者的身体健康,淮阴市卫生防疫站于２０００年对市售２６份不同厂家的矿泉水的卫生质量进行抽检和分析。１内容和方法１．１样品采集本次抽查产品是全国各地在我市各大、小商场销售的部分矿泉水。由食品监督员采集送至实验室,共抽检各种类型的矿泉水２６份。１．２检验项目分别为细菌总数、大肠菌群、亚硝酸盐、挥发性酚和氰化物。１．３检验方法细菌总数、大肠菌群按ＧＢ８５３８－１９９５进行检验,亚硝酸盐、挥发性酚和氰化物按ＣＢ５７５０－８５进行检验。１．４结果判定依据国家标准ＧＢ８５３７－１９９５污染指标及…     

汉坦病毒通用型实时荧光定量RT-PCR方法的 建立及应用

摘要:目的　建立一种适应汉坦病毒不同基因型别的通用实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法　利用Beacon Designer7.5软件设计引物和探针,以人工合成汉坦病毒5种具有代表性基因型别的L片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR方法的建立,确定所建立方法的检测限及灵敏度并对采集的112份鼠肺进行快速检测。结果　5种模板RNA的Ct值与其稀释浓度的对数存在良好的线性关系,以HTNV为例建立的标准曲线为:y＝-3.40x+46.8,R2＝0.99,其最低检出限为5.32 copies/μl,对于不同基因型别的汉坦病毒,其检测最低限:HTNV为12.40 copies/μl、SEOV为5.32 copies/μl、PUUV为15.02 copies/μl、DOBV为22.14 copies/μl及SNV为24.26 copies/μl。对112份鼠肺样本的病毒检出率为17.86%,较巢式RT-PCR的检出率（8.04%）高。结论　建立的通用型实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高,检测的广谱性好,适合啮齿类动物中携带的汉坦病毒的快速检测。     

2011-2013年淮安市职业暴露人群血清学和环境禽流感监测分析

目的了解淮安市职业暴露人群H5N1禽流感病毒抗体水平和环境中禽流感病毒的分布情况。方法采用血凝抑制试验检测职业暴露人群A(H5N1)血凝素抗体;采用Real-time PCR法对环境标本进行Flu A、H5、H7、H9禽流感病毒核酸检测。结果职业暴露人群240人份血清A(H5N1)抗体均为阴性;环境标本420份禽流感病毒核酸检测A型阳性率为0.71%。城乡活禽市场环境标本的阳性率为2.59%,其他监测场所未检出阳性标本,差异有统计学意义(Fisher确切概率χ2=5.64,P<0.05),宰杀或摆放禽肉案板表面擦拭标本阳性率为13.04%,其他环境标本检测为阴性,差异有统计学意义(Fisher确切概率χ2=18.03,P<0.01)。结论职业暴露人群血清标本中未检测出A(H5N1)禽流感病毒抗体阳性标本;淮安市监测点环境中存在H5、H9禽流感病毒;禽流感感染风险主要集中在城乡活禽市场。     

洪泽县疟疾疫情回升因素的初步探讨

洪泽县位于东经118°,北纬33°,系非稳定性疟区,历史上曾发生过多次疟疾流行。1973年疟疾发病率达11.35%,后经多年反复查治,疟疾发病率逐年下降,1986年已降到1‰以下。但从1988年起疫情明显回升,局部地区发生了暴发流行,1989年进行现场调查,现将结果报告如下:     

PCR-毛细管电泳法在小龙虾中三种食源性致病菌检测中的应用评价

目的 探讨PCR-毛细管电泳法在检测小龙虾中沙门氏菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的应用效果。方法 同时应用食品微生物检验国标GB 4789方法和PCR-毛细管电泳法检测60份小龙虾中的三种致病菌,对两种检测方法的效果进行比较评价。结果 利用国标方法,小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为25.00%、20.00%、10.00%。运用PCR-毛细管电泳方法,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为30.00%、20.00%、10.00%。PCR-毛细管电泳方法沙门氏菌的检出率高于国标方法,三种致病菌的检出情况与国标方法一致,检验过程可控制在24 h之内。结论 PCR-毛细管电泳方法可用于小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检测,具有快速、灵敏、自动化程度高等优点。     

汉城病毒的TaqMan-BHO探针实时荧光定量检测方法的建立

目的：建立一种汉城病毒实时荧光定量 RT-PCR 快速的检测方法。方法用专业软件设计引物和 TaqMan-BHQ探针,以人工合成 L 基因的片段作为模板,进行实时荧光定量 RT-PCR 研究。结果模板的 Ct 值与模板稀释浓度的对数存在良好的线性关系,标准曲线为Y ＝－3.607X ＋41.84,r2＝0.998,PCR 扩增效率为108.1％,其最低检出限为53.2 copies／μL。结论应用 TaqMan-BHQ1探针的实时荧光 RT-PCR 检测汉城病毒核酸,具有耗时短、灵敏度高等特点。