开腹与腹腔镜结肠癌根治术的临床疗效研究

目的:探讨传统开腹手术与腹腔镜结肠癌根治术的临床疗效、安全性及临床应用价值。方法:将56例经病理活检确诊的结肠癌患者随机分为腹腔镜组(n=28)与开腹组(n=28),观察对比两组手术时间、出血量、淋巴结清除数量、肠功能恢复时间、3年生存率及并发症发生情况。结果:两组均无手术死亡病例出现,且腹腔镜组无一例中转开腹。腹腔镜组术中出血量、术后肠道功能恢复时间、并发症发生率优于开腹组,但手术时间长于开腹组,差异有统计学意义(P<0.05);两组淋巴结清除数量、3年生存率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腹腔镜结肠癌根治术可取得与开腹组相似的远期生存率,具有开腹手术无可比拟的优点,体现了微创的治疗理念与良好的临床应用价值,可作为手术治疗结肠癌的另一选择。     

~(60)钴辐照法对生物羊膜中人类免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究60钴辐照法对生物羊膜中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对辐照法灭活生物羊膜中人工污染HIV-1ⅢB病毒效果进行观察。结果经辐照剂量为25 k Gy处理,可使污染在生物羊膜制品的HIV-1ⅢB病毒滴度下降6.5个log以上。处理后生物羊膜制品经细胞培养盲传三代,均未出现细胞病变。结论 25 k Gy辐照法能够完全灭活生物羊膜产品中污染的人免疫缺陷病毒。     

1996-2014年中国HIV-1毒株CRF01_AE亚型传播簇和传播网络研究

目的 了解我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型在省内和省际的传播规律和风险因素,为实施精准干预提供参考依据。方法 收集我国19个省份1996-2014年已有的2 094条CRF01_AE pol区基因序列,利用PhyML 3.0软件构建系统进化树,确定传播簇,利用Cytoscape 3.6.0软件构建传播网络,结合背景信息分析传播风险。结果 发现82个传播簇,包含255条序列（12.18%,255/2 094）,省内传播簇数量和包含序列数（61个,173条）明显多于跨省传播簇（21个,82条）。传播簇中男男性传播人群的成簇比例随时间上升趋势明显,由1996-2008年的2.41%（2/83）上升为2013-2014年的23.61%（72/305）（χ²=27.800,df=1,P=0.000）。跨省传播簇的男男性传播人群比例明显高于省内传播簇,由1996-2008年的0.67%（2/297）上升为2013-2014年的6.36%（30/472）,具有随时间的上升趋势（χ²=20.276,df=1,P=0.000）。跨省传播簇中男男性传播的比例（86.59%,71/82）明显高于省内传播簇（56.65%,98/173）,差异有统计学意义（χ²=22.792,P=0.000）。含2种及以上传播途径的跨省传播簇的比例（33.33%,7/21）明显高于省内传播簇（13.11%,8/61）,差异有统计学意义（χ²=4.273,P=0.039）。传播网络分析发现,跨省传播簇内高传播风险人群比例（51.22%,42/82）明显高于省内传播簇（26.59%,46/173）,差异有统计学意义（χ²=14.932,P=0.000）。跨省传播簇以男男性传播人群为主。结论 我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型存在复杂的传播网络,跨省传播簇快速增长,其中高风险传播者对HIV-1亚型的大范围传播起到重要作用,应深入进行传播网络研究以指导精准干预。     

乳腺癌不同部位组织的雌激素受体测定

乳腺癌的雌激素受体(ER)状况决定其对内分泌治疗的反应,对指导乳腺癌的治疗及预测其预后有重要意义。本文对59例女性乳腺癌患者行乳腺根治切除术后,从切除标本中,分别从癌肿中央部、癌肿边缘部、癌肿边缘旁开2cm处及腋窝转移性淋巴结等4个部位切取组织行ER检测,以癌肿边缘部组织ER阳性率最高(p<0.05)。我们认为从该部位取材送ER检测最可靠。     

重组腺相关病毒介导的VLDLR基因转移改善2型糖尿病大鼠大脑海马tau蛋白Alzheimer病样改变

目的:Tau蛋白过度磷酸化是Alzheimer病(AD)的重要特征,在2型糖尿病中tau蛋白呈AD样过度磷酸化改变。本研究运用极低密度脂蛋白受体(VLDLR)基因转移干预2型糖尿病大鼠(T2DM),观察海马tau蛋白磷酸化修饰水平的变化。方法:将8周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组(CTL)以普通饮食喂养,2型糖尿病组(T2DM)及2型糖尿病处理组(T2DM+VLDLR)。葡萄糖氧化酶法检测血浆血糖,放免法检测血浆胰岛素,Western blotting分析海马内总tau、tau蛋白上部分位点磷酸化及VLDLR水平。[γ-32P]标记的ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号转导系统中的关键酶糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)活性。结果:T2DM组大鼠经VLDLR基因处理之后(T2DM+VLDLR)与对照组(CTL)海马回总tau蛋白水平无差异,T2DM组tau(pS214)、tau(pS396)、tau(pS422)及tau(pSpS199/202)位点上的磷酸化水平显著高于CTL组,而在tau-1位点免疫反应显著弱于CTL组;运用VLDLR基因处理之后,tau蛋白上tau(pT217)、tau(pS396)及tau(pSpS199/202)位点磷酸化水平显著下降,tau-1位点显著增强,但tau(pS214)及tau(pS422)位点磷酸化水平无显著下降。免疫组化结果检测到T2DM组大鼠海马区tau蛋白在Ser214位点上磷酸化程度较CTL组显著增高,运用VLDLR基因处理之后,tau蛋白磷酸化程度逆转不明显。3组大鼠海马细胞内总GSK-3β无显著差异,但T2DM组GSK-3β磷酸化程度显著下降,运用VLDLR基因处理后GSK-3β磷酸化程度显著上升。结论:重组腺相关病毒介导的VLDLR基因处理可能是通过抑制GSK-3β活性来改善2型糖尿病大鼠海马tau蛋白上部分位点的Alzheimer病样过度磷酸化状态。     

重组腺相关病毒介导的VLDLR基因对2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱的作用

目的： 探索增加极低密度脂蛋白受体 (VLDLR) 基因表达对2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱和动脉粥样斑块的影响。方法: 构建携带人VLDLR基因的重组腺相关病毒载体（rAAV-VLDLR）。高脂高糖饮食8周后尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造2型糖尿病动物模型,VLDLR治疗组大鼠注射rAAV-VLDLR,糖尿病对照组注射rAAV-0。RT-PCR及Western blotting分别检测大鼠骨骼肌、心脏、主动脉、肝脏、脂肪VLDLR mRNA及蛋白表达水平。检测VLDLR基因对血糖、胰岛素、稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、脂蛋白脂酶（LPL）活性及主动脉粥样斑块的影响。结果: rAAV-0组大鼠骨骼肌、主动脉、脂肪VLDLR mRNA及蛋白水平低于正常组,VLDLR治疗组VLDLR mRNA及蛋白水平较rAAV-0组有不同程度增加。VLDLR治疗后4、8周的TG及4、8、12周的TC明显降低（P＜0.05）,8周HOMA-IR明显降低(P＜0.05),LPL活性明显增强(P＜0.05),主动脉内膜损伤减轻。结论: 增加VLDLR基因表达对改善2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱效果显著,并可在此基础上减轻主动脉粥样斑块程度。     

ASPCR检测微量HIV-1 K103N耐药突变方法的建立

目的 建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR(allele-specific real-time PCR,ASPCR)方法,用于微量K103N耐药突变的检测和分析.方法 首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法,然后对方法进行验证,最后采用ASPCR方法检测对照样本.构建含K103N突变的质粒作为标准品,然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板,采用SYBR green法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线.分别采用特异性和非特异性引物扩增模板,根据二者Ct(cycle threshold)值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例.对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证.结果 特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差(△Ct)可达13.56;当突变比例小于0.1%时仍具有良好的准确性;批内变异系数小于0.7,批间变异系数小于1.6;检测灵敏度可达0.01%.检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值,阳性对照样本检测结果均为刚性.结论 ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法,可为临床抗病毒治疗提供理论指导.     

WuT系列试剂检测我国不同地区艾滋病病人CD4和CD8细胞相对计数的效果评价

目的评价武汉生物制品研究所WuT系列CD3FITC/CD4PE和CD3FITC/CD8PE试剂,检测我国不同地区的艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人CD4和CD8细胞相对计数的效果。方法以美国BD公司的试剂为参比,用CD3FITC/CD4PE和CD3FITC/CD8PE试剂分别检测616人的CD4/CD3比值和584人的CD8/CD3的比值,用线性回归方法对结果进行比较。结果CD3FITC/CD4PE和CD3FITC/CD8PE试剂与参比试剂的检测结果有较好的一致性。CD3FITC/CD4PE试剂与参比试剂的检测结果呈正相关关系(r=0.956,P<0.01),回归方程为y=0.922x 0.0047;CD3FITC/CD8PE试剂与参比试剂的检测结果也呈正相关关系(r=0.941,P<0.01),回归方程为y=0.9464x 0.0097。结论WuT系列CD3FITC/CD4PE和CD3FITC/CD8PE试剂检测我国不同地区艾滋病病人的CD4和CD8细胞的相对计数取得较好的效果。     

对in-house HIV-1基因型耐药性检测方法的评价

目的 评价in-house HIV-1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法 收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统(ViroSeqTM v2.0)为参考方法,并与建立起的基因型耐药性检测方法(in-house)平行检测待检样本,比较二者在扩增效率、耐药突变位点检测以及耐药报告等方面的一致性。结果已知的14 850个耐药突变位点中,2种方法可同时对99.3％(14 752/14 850)的耐药突变位点准确检出;在对不同突变位点的检测中,2种方法对蛋白酶抑制剂耐药突变位点、逆转录酶抑制剂耐药突变位点及两类抑制剂耐药突变位点检测一致率分别为99.7％、99.0％和99.3％（Kappa值分别为0.909 9、0.952 1和0.948 8,P值均＜0.01）;2种方法出具的两类药物的耐药结果报告一致率94.6％（Kappa=0.637 4,P＜0.01）。本研究共检测到34个ViroSeqTM数据库(ViroSeqTM software v2.7)未收录位点,其中2个突变位点对耐药的影响较大。结论in-house基因型耐药性检测方法与ViroSeqTM基因型耐药性检测系统在耐药突变位点检测以及评价上具有高度一致性,是一种快速准确、性价比高的HIV-1基因型耐药检测方法,同时在耐药数据库方面具有一定优势。     

河南某农村接受抗病毒治疗的艾滋病患者HIV-1耐药发生的六年队列分析

Objective To analyze the occurring rules of human immunodeficiency virus (HIV)drug resistance under an unique therapy model among HIV-1 infected individuals on antiretroviral therapy (ART) in rural areas of Henan, China. Methods A cohort of 75 individuals on an ART regimen of zidovudine (ZDV) , dideoxyinosine (ddI) and nevirapine (NVP) was established in March 2003. A total of 12 surveillances were conducted and 788 person-times were studied until 2010. The parameters of CD4 cell count and viral load (VL) were tested in each survey. And genotypic resistance testing was performed in patients with a failure of viral suppression. Survival analysis was used to estimate the occurrence time of resistance. Results The cumulative mortality rate was 16% (12/75) in the cohort. And the cumulative resistance rate was 88% (66/75) from 2004 to 2010. The rate of resistance reached 54. 7% and the probability from susceptibility to drugs developing resistance decreased drastically from 100% to 45. 3% within the first 1 year of initiation. The occurrence time of resistance for half of individuals in the cohort was at 12.0 months(95% CI 8. 6 - 17. 0)after initiation, 25. 1 months(95%C/19.0-33. 3)in those whose VL was less than 4. 0 lgU/ml and 4. 8 months (95% CI 4.1 - 5. 6) at VL ＞ 4. 0 lgU/ml during the first investigation. The individuals with an early occurrence of resistance within 12 months carried high risks for afailure of viral suppression and a decrease of CD4 counts. Conclusion The occurrence of resistance rises with the course of therapy. And the greatest probability for resistance is within the first 1 year of initial therapy. A high level of VL has a significant impact on the development of resistance. Preventing the occurrence of resistance during the initial therapy remains a key goal.