急性肾损伤微环境对培养骨髓间充质干细胞分化及分裂增殖的影响

目的:观察体外模拟急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的微环境下,小鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,mMSCs)分化及分裂增殖情况。方法:采用夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30min再开放30min的方法制作缺血再灌注(I/R)性AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作I/R肾脏匀浆上清。抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出mMSCs,以流式细胞仪鉴定。取扩增3代的mMSCs分组培养:(1)对照组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;(2)干预组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基+I/R肾脏匀浆上清。诱导1d、3d、5d、7d后倒置显微镜下观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞仪检测角蛋白18(cytokeratin18,CK18);CCK-8法检测培养mMSCs的增生;TUNEL法检测mMSCs凋亡。结果:分离获得的P3-mMSCs高表达CD29和CD44,低表达CD34和CD45。与对照组长梭形细胞相比,干预组第3天可见部分细胞为椭圆形、短梭形,至第7天大部分细胞呈圆形、椭圆形、短胖梭形;透射电镜也观察到胞质内开始出现较多的粗面内质网、溶酶体、线粒体。流式细胞仪检测发现,对照组mMSCs内仅有极微量CK18表达,而干预组CK18阳性表达率显著增加。经I/R肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSCs的增殖效应均显著减弱,而TUNEL检测显示胞核染色阳性的细胞百分比有显著升高(P0.01)。结论:体外模拟的AKI微环境可诱导mMSCs部分分化为肾小管上皮样细胞,但同时也会导致培养的mMSCs凋亡,增殖能力减弱,进而减少了可肾向分化的mMSCs数量,推测这可能是MSCs体内移植促肾修复能力有限的原因之一。     

骨髓间充质干细胞干预对缺血再灌注诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的：观察骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells,MSCs）对缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）诱导的急性肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells,RTECs）凋亡的保护作用及机制。方法：Percoll密度梯度离心结合贴壁培养法有效分离出C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞（mMSCs）。雄性C57BL/6小鼠45只,分为正常对照组（15只）、I/R组（15只、夹闭双侧肾蒂30min开放）、I/R＋mMSCs组（15只、夹闭双侧肾蒂30min开放的同时尾静脉注射mMSCs）。造模并干预后,于1d、2d、3d、7d、14d分别处死部分小鼠,留取动脉血及肾组织,检测血尿素氮（BUN）及肌酐（Scr）,制作肾组织切片行HE染色进行肾小管损伤程度评分,TUNEL法检测RTECs的凋亡,Western Blot法检测建模后第2天肾小管组织中Caspase-3、Bcl-2蛋白水平的表达。结果：I/R后小鼠的BUN及Scr均显著高于正常对照组,但同一时间点I/R＋mMSCs组小鼠的BUN及Scr水平较I/R组为低,以术后第7天差异最为显著（P〈0.01）,肾小管损伤程度评分也有着显著降低。TUNEL检测表明I/R可诱导RTECs发生明显的凋亡,以术后第2天凋亡指数（apoptosis index,AI）最高（46.71±11.20）（P〈0.01）,而mMSCs干预可显著降低各时间点RTECs的凋亡水平（P〈0.05或P〈0.01）,至14d时AI基本恢复至对照组水平。Western blot进一步显示：I/R＋mMSCs组小鼠的肾组织中Caspase-3蛋白水平明显下降（1.16±0.33,P〈0.01）,而Bcl-2水平却有明显增高（0.94±0.27,P〈0.01）。结论：移植的MSCs对I/R诱导的肾损害小鼠RTECs凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达,上调Bcl-2表达有关,但其细胞学和分子机制还有待进一步研究。     

低钙腹膜透析液对尿毒症患者颈动脉粥样硬化的影响

目的探讨低钙腹膜透析（PD）液对尿毒症患者颈动脉粥样硬化的影响及机制。方法将60例行连续性非卧床腹膜透析（CAPD）且合并颈动脉粥样硬化的患者随机分为A组（标准钙PD液治疗组，30例）和B组（低钙PD液治疗组，30例），均继续行正规CAPD治疗。观察治疗12周前后患者颈动脉内-中膜厚度（IMT）及颈动脉粥样硬化斑块发生率的变化，同时生化法检测血清钙浓度，ELISA法测定血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平。结果经过12周的分组透析后，B组患者的血清钙、MMP-9[（2．25±0．24）mmol／L、（564．72±124．69）μg／L]较A组患者[（2．40±0．37）mmol／L、（718．56±111．83）μg／L]明显下降（P〈0．05），颈动脉IMT[（1．17±0．28）mm]亦显著低于A组[（1．25±0．19）mm]（P〈0．05）。结论低钙PD液可延缓尿毒症患者颈动脉粥样硬化的进展，其对血清MMP-9的影响可能是其机制之一。     

抗肾小球基底膜抗体疾病的临床表现及诊断

抗肾小球基底膜（glomerular basement membrane, GBM）抗体相关疾病是指在循环或脏器中沉积了抗GBM抗体的一组临床疾病。最早是南Emest Goodpasture于1919年发现，他报道了1例18岁的患者表现为咯血、坏死及增生性肾炎，直到1967年抗GBM抗体方被识别。这类疾病的根本特征是组织基膜和血清内存在抗基膜抗体并伴有。肾、肺、中枢神经、眼底、皮肤及血液等系统性损伤。因此，统称这类疾病为抗GBM抗体疾病，其肾脏损伤为抗GBM肾炎。     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞TIMP-1表达的影响

目的探讨金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞表达基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法实验分组：对照组，低糖DMEM培养液(不含金雀异黄素)；实验组，高糖DMEM培养液 不同浓度金雀异黄素(含0、5、10、50、100、200μmol／L金雀异黄素)。各组分别培养12、24、48h。ELISA法检测细胞培养上清液TIMP-1含量；半定量RT—PCR法检测TIMP-1 mRNA表达。结果在实验48h内，金雀异黄素浓度和时间依赖性地抑制系膜细胞外TIMP-1的蛋白水平。对照组及高糖 不同浓度金雀异黄素作用24h后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．797、1．286、1．186、1．013、0．954、0．939、0．823；对照组、高糖组及高糖 50μmol／L金雀异黄素组作用不同时间(12、24、48h)后TIMP-1 mRNA表达量分别为0．801、1．084、0．970、0．865、0．820。结论在体外高糖条件下，一定浓度的金雀异黄素可降低大鼠肾小球系膜细胞TIMP-1的蛋白水平及其mRNA的表达，提示金雀异黄素可能通过促进细胞外基质(ECM)的降解而减少ECM的积聚，延缓糖尿病肾病进展。     

导管相关性多重真菌感染致透析患者真菌性心内膜炎1例

正病例患者濮××,女,42岁,因"肾移植术后近18年,乏力3月"于2018年3月27日就诊于我院。患者因终末期肾病于2004年4月在我院经配型合格后行同种异体肾移植术,术后常规抗排异治疗,肾功能恢复正常水平。2006年9月血肌酐200μmol/L,考虑"移植肾肾病、慢性肾功能不全(CKD4期)"。2007年3月20日因胸闷尿少伴移植肾区疼痛,查血肌酐712μmol/L、血红蛋白29 g/L,诊断"移植肾功能衰竭、重度贫血",予血液透析及对症治疗。2007年8月因内瘘失功行右侧颈静脉带CUFF导管植入。2014年2月因导管感染经抗感染治疗后更换了带CUFF导管。2016年     

老年肾脏病患者的临床特点及病理改变分析

目的 探讨老年肾脏病患者的临床及病理特点。方法 回顾性分析我科56例老年肾脏病患者（年龄≥60岁,老年组）的临床和肾脏病理资料,并与同期住院的280例中青年肾脏病患者（年龄18～59岁,中青年组）资料进行对比。结果 ①老年组起病首发症状依次分别为肾病综合征、高血压、急性肾损害、慢性肾功能不全（32．1％、28．6H、14．3％、14．3％）;②老年组贫血发病率明显高于中青年组发病率（32．1%18．2％,P〈0．05）,低白蛋白血症、肾小球滤过率降低、高血压及高脂血症并发症更为常见（P〈0．05）。③老年组以原发性肾小球疾病为主（占71．4%,病理以膜性肾病（占19．6％）和IgA肾病（占17．9％）最常见。继发性肾脏疾病以高血压肾病（占41．7％）最常见。以急性肾损害为临床表现的老年患者,病理以急性。肾小管坏死（占37．5％）和新月体性肾炎（占37．50%）为多见。结论老年肾脏病患者的临床表现、肾脏病理与中青年不同,值得进一步研究。     

金雀异黄素对糖尿病大鼠糖脂代谢及肾脏的影响

目的探讨金雀异黄素(又称染料木黄酮,genistein,Gen)对糖尿病(DM)大鼠血糖、胰岛素敏感性、血脂、肾功能等代谢指标以及肾脏病理的影响。方法雄性SD大鼠45只,分为正常对照组(10只,普通饲料自由饮食)、DM组(4周组,9只;8周组,8只;普通饲料自由饮食)、DM Gen组(4周组,10只;8周组,8只;普通饲料自由饮食 Gen 30 mg.kg-1.d-1)。DM组及DM Gen组均按60 mg/kg的剂量腹腔内注射STZ建立DM模型。于实验4周、8周末禁食12 h,处死部分大鼠取动脉血检测FBG、FIns、血脂及BUN、Cr;取肾脏制作组织切片行HE染色。结果DM 8周大鼠FBG、ISI、TC、TG、BUN、Cr分别为35.2±1.8 mmol/L、-5.83±0.20、2.50±0.61 mmol/L、1.26±0.30 mmol/L、18.4±0.7 mmol/L、70.2±7.8μmol/L,相应DM Gen 8周组的结果分别为18.8±3.4 mmol/L、-5.27±0.47、1.43±0.19 mmol/L、1.11±0.34 mmol/L、10.0±1.7 mmol/L、51.7±4.5μmol/L。Gen可减轻肾小球肥大、肾小管扩张。结论Gen可改善DM大鼠的糖脂代谢紊乱,减轻肾脏组织病理变化,改善肾功能,延缓糖尿病肾病的进展。     

金雀异黄素对高糖培养肾小球系膜细胞SMemb表达及细胞外基质的影响

目的探讨金雀异黄素（Gen）对高糖培养下大鼠系膜细胞（MC）表型和细胞外基质（ECM）的影响。方法对照组：低糖DMEM培养液；实验组：高糖DMEM培养液（含0、5、10、50、100、200μmol／LGen），培养12、24、48h，分别检测SMemb mRNA、MMP-2 mRNA、TIMP-1 mRNA水平及上清液Fn的含量。结果Gen可抑制高糖刺激下SMemb的表达，减少Fn的分泌（P〈0．01或0．05）；并可增加MMP-2／TIMP-1 mRNA半定量比值，呈浓度、时间依赖性。结论在体外高糖条件下，Gen干预可降低MCSMemb表达，减轻ECM积聚。