异硫氰酸荧光素染色在真菌性角膜炎中的应用

目的：寻找真菌性角膜炎组织切片快速、准确、方便操作的特殊染色方式。

方法：采用经真菌培养均为阳性的真菌性角膜炎患者的角膜标本38例,常规固定脱水透明浸蜡,进行4μm石蜡切片,脱蜡至水,选用异硫氰酸荧光素(FITC)荧光法和过碘酸雪夫氏染色法(PAS)进行染色对比。

结果：异硫氰酸荧光素法检测阳性率为97.4%(37/38),过碘酸雪夫氏染色法检测阳性率为86.8%(33/38)。结果比较有统计学差异(P<0.001)。

结论：异硫氰酸荧光素法镜检真菌性角膜炎优于过碘酸雪夫氏染色法镜检。     

17α-己酸羟孕酮对人外周血单个核细胞抵抗地塞米松的逆转作用研究

目的探讨17α-己酸羟孕酮对外周血单个核细胞抵抗地塞米松的逆转作用。方法分离健康男性外周血单个核细胞,利用白介素2(IL-2)和IL-4以及植物血凝素刺激外周血单个核细胞,建立地塞米松抵抗的炎症细胞实验模型;单用地塞米松和地塞米松与17α-己酸羟孕酮联合应用于该模型,酶联免疫吸附法检测细胞的IL-2值的改变。结果地塞米松对植物血凝素诱导人外周血产生的IL-2呈现显著的浓度依赖性的抑制作用;用IL-2(13ng·mL-1)和IL-4(6.5ng·mL-1)刺激,再用植物血凝素(15μg·mL-1)刺激外周血单个核细胞可以作为评价地塞米松抵抗的细胞实验模型;在17α-己酸羟孕酮的浓度为10-11,10-10,10-7和10-5 mol·L-1时,可显著提高地塞米松对人外周血产生的IL-2的抑制率,降低地塞米松的IC50(半数抑制浓度)值至少100倍以上。结论 17α-己酸羟孕酮逆转外周血单个核细胞对地塞米松的抵抗,可作为地塞米松等糖皮质激素的增敏剂。     

泪液缺乏性干眼治疗转归的定量检测

目的：应用角膜共焦显微镜、结膜印迹细胞学在泪液缺乏性干眼治疗前后定量测定病变角膜上皮细胞、结膜细胞,以期进一步准确评价干眼的治疗效果及预后。 方法：选择临床确诊为泪液缺乏性干眼症患者21例41眼,根据患者病史、症状、角结膜体征及相关检查确诊为泪液缺乏性干眼。应用聚乙二醇滴眼液及卡波姆凝胶联合治疗所有干眼患者,治疗前后依据结膜印迹细胞检查对干眼患者结膜细胞的鳞状化生及杯状细胞数量的多少进行分级,并对治疗前后印迹细胞分级进行统计学比较。应用海德堡激光共聚焦显微镜观察干眼治疗前后角膜上皮下神经纤维的形态学改变,定量评价同级结膜细胞干燥程度下治疗前后角膜上皮细胞密度的变化。 结果：印迹细胞检查:治疗前≤Ⅱ级6眼,Ⅲ级25眼,≥Ⅳ级10眼;治疗6mo后≤Ⅱ级19眼(46.3%),Ⅲ级17眼(41.5%),≥Ⅳ级5眼（12.2%）。治疗前后不同级别印迹细胞患者比例显著改变(P＜0.05）。共焦显微镜下细胞形态学改变：治疗前明显的角膜上皮细胞坏死脱落区,细胞密度下降,角膜上皮下神经纤维出现分支杂乱、异常走行,未见上皮下神经纤维5眼。治疗6mo后区域性细胞密度增加,所有患者均可见上皮下神经纤维,少数病例仍可见分支杂乱、异常走行。共焦显微镜显示在同级结膜印迹细胞程度下,角膜上皮细胞密度治疗前后进行比较,统计学上具有显著性差异（P<0.05）。治疗后细胞密度明显增加。 结论：应用角膜激光共焦显微镜和结膜印迹细胞定量观察泪液缺乏性干眼的治疗转归,从而确定以上两种方法在干眼治疗评价中具有重要价值。     

一种制备McAb腹水的新方法

小鼠单克隆抗体（McAb）现已成为临床免疫检验和免疫学研究的重要试剂，其来源多用杂交瘤细胞接种到事先经降植烷，石蜡油或不完全佐剂处理的小鼠腹腔内诱导其产生含McAb的腹水（黄宇烽等．上海免疫学杂志，1988；（2）：81）。据黄宇烽研究表明，以上所提三种诱导剂中以不完全佐剂效果最好，即产生的McAb量最多，效价最高。由于不完全佐剂中含有石蜡油、羊毛脂，这两种成份混合，粘稠度大，每次吸取和给动物注射都费时费力，给制备工作带来了一定的困难。我们在制备腹水的实践中，发现硅胶H也具有诱导小鼠产生含MCAb腹水的作用。这种试…     

眼部常见酵母样菌的快速鉴别及药敏实验方法的建立

真菌性角膜炎、角膜溃疡等是一种危害极大的眼病,特别是近十年来随着抗生素的滥用,真菌感染,尤其是酵母类菌所致的感染明显增加。真菌性眼病若不及时诊断、治疗,将导致角膜穿孔,失明,甚至眼球摘除。如何尽快对真菌进行鉴别诊断并搞清它的耐药情况,对临床及时治疗意义至关重大。我所引进目前全球领先的CANDIFAST检测试剂盒,用白色念珠菌标准株建立测定方法,获得成功,现报告如下:     

干燥脱水法长期保存角膜及角巩膜植片的组织活性研究

目的 研究干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片的组织活性。方法 应用无水氯化钙－硅胶干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片，根据现有保存资料统计共1287例，保存时间半年至15年，对不同保存时间的植片进行了组织结构，细胞活性和超微结构的研究。结果 干燥保存角膜片5，10，15年的组织切片报告其胶原纤维束清昕可见，各层纤维排列呈一定角度，成纤维细胞减少，细胞器存在，内皮细胞的核存在。保存后植片合格率分别为：半年98．8％，1年98．4％，5年98．9％，10年93．3％，15年96．7％。保存合格植片临床应用，术后植片透明率平均94．9％。结论 无水氯化钙－硅胶干燥脱水法长期保存的角膜及角巩膜植片，具有一定的组织活性，临床应用效果好，操作简便，费用低廉，值得推广。     

沙眼依原体单克隆抗体在眼科临床的应用

利用沙眼依原体单克隆抗体免疫荧光直接法诊断和鉴别诊断３０例沙眼及其它眼病。结果２０例临床诊断为沙眼，检测均为阳性。５例慢性结膜炎，其中２例为阳性。５例疑为病毒性结角膜炎，２例为阳性。５例正常人结膜上皮涂片，均为阴性。结果证明，沙眼依原体荧光单克隆抗体具有临床诊断和鉴别诊断价值。     

眼部白色念珠菌感染的快速诊断方法

目的介绍一种白色念珠菌的快速检测方法。方法以白色念珠菌标准株为阳性对照,普通酵母菌标准株为阴性对照,采用荧光标记的抗白色念珠菌的单克隆抗体直接免疫荧光法进行测定角膜溃疡病人标本涂片。结果阳性对照、及白色念珠菌感染病人标本中有边缘着绿色,中间为暗红色的阳性菌。普通酵母菌及非白色念珠菌感染对照组酵母细胞染红色。结论该方法快速、简便、特异性强,结果判断直观,并可广泛的推广应用。     

丫啶橙荧光染色结膜印迹细胞定量检测干燥性角结膜炎

目的应用丫啶橙荧光染色法进行结膜印迹细胞学检查,通过判断结膜细胞功能状态,对干燥性角结膜炎患者的眼部干燥程度进行定量检测,为临床的治疗提供实验室依据。方法选自我院眼科门诊已确诊的干燥性角结膜炎患者23例(38眼),用丫啶橙荧光染色结膜印迹细胞检查法进行检测,并用结膜印迹细胞检查结果评价标准进行评价,按Tseng分类法进行分级。结果干燥性角结膜炎患者23例(38眼)中,25眼细胞分级为Ⅱ～Ⅲ级,13眼细胞分级为Ⅲ—Ⅳ级。结论丫啶橙荧光染色法进行结膜印迹细胞学检查可以确认结膜细胞鳞状化生的程度,为干燥性角结膜炎病变程度提供临床分级、定量诊断,指导临床用药。     

正常角膜上皮细胞单纯疱疹病毒I型的检测

单纯疱疹病毒（herpes simplex virus,HSV)在眼部感染主要为HSV-Ⅰ型，其最主要的生物学科特性是能够形成潜伏感染，目前已公认HSV-Ⅰ可以潜伏在静止期单纯疱疹病毒性角膜炎（herpes simplex keratitis,HSK）角膜组织中。针对正常角膜内是否有HSV-Ⅰ的存在，近几的国内外学者采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测到正常角膜内存有HSV-Ⅰ DNA。