通过小干扰RNA沉默mdr-1基因逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL多药耐药的研究

 目的　构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的多药耐药-1（mdr-1）基因的短发夹状RNA重组质粒，探讨RNAi沉默技术逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞多药耐药的可行性。方法　运用基因克隆技术构建靶向于mdr-1基因的重组质粒PGPU6／GFP／Neo-mdr-1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL，反转录聚合酶链反应检测到mdr-1基因表达。CCK-8检测对SKOV3／TAXOL细胞增殖的抑制作用。结果　构建的重组质粒PGPU6／GFP／Neo-mdr-1能明显抑制mdr-1基因的表达。蛋白质印迹结果表明，转染重组质粒PGPU6／GFP／Neo-mdr-1的SKOV3／TAXOL靶细胞的抑制率显著提高。RT-PCR检测mdr-1基因mRNA转录水平下降；pPGPU6／GFP／Neo-mdr-1明显抑制SKOV3／TAXOL细胞的增殖。结论　重组质粒PGPU6／GFP／Neo-mdr-1可有效地抑制SKOV3／TAXOL细胞内源mdr-1基因的表达和mRNA的转录，并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生，应用RNAi技术，能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的多药耐药。为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。     

配偶淋巴细胞免疫治疗反复自然流产91例分析

目的探讨反复自然流产患者,运用配偶淋巴细胞免疫治疗后,体内封闭抗体水平的变化及其临床疗效.方法对确诊为封闭抗体缺乏的RSA患者91例,用分离的配偶淋巴细胞,皮内注射法免疫治疗3～5疗程,治疗前后运用流式细胞仪测定患者体内封闭抗体水平.结果 91例RSA患者经免疫治疗后,体内封闭抗体的水平显著提高,抗配偶CD3%、抗配偶CD4%、抗配偶CD8%,分别由治疗前的-1.32±0.98、-1.39±0.80、-0.96±0.54上升为0.99±0.74、1.01±0.64、0.75±0.49(P＜0.05);妊娠成功80例,成功率为87.9%(80 / 91).结论配偶淋巴细胞免疫治疗,可以提高患者体内封闭抗体水平,有助于妊娠成功.     

耐药基因检测及体外药敏试验在卵巢癌个体化治疗中的价值

目的 探讨卵巢癌耐药基因表达与体外药敏试验及临床生物学行为的关系.方法 采用流式细胞术和MTT法对60例卵巢癌患者分别检测组织中的COX-2、CX43、P-gp基因表达和对常用化疗药物的敏感性,并对其临床近期疗效关系进行分析.结果 COX-2表达在顺铂(DDP)耐药组高于DDP敏感组,差异有统计学意义(P=0.01).CX43表达在DDP耐药组低于DDP敏感组,差异有统计学意义(P=0.005).P-gp表达在对依托泊苷(VP16)耐药组高于VP16敏感组,差异有统计学意义(P=0.009).CX43表达在对紫杉醇(Taxol)耐药组低于Taxol敏感组.差异有统计学意义(P=0.001).COX-2高表达、CX43低表达、P-gp高表达的癌组织对化疗药物的敏感性低于COX-2低表达、CX43高表达、P-gP低表达者.5-Fu、CBP、VCR、PYM、EPI、GEM的敏感性与COX-2、CX43、P-gp表达高低无显著相关性.结论 卵巢癌组织中COX-2与P-gp高表达、CX43低表达与部分化疗药物的体外药敏试验敏感性有关.耐药基因相关蛋白COX-2、P-gp、CX43的检测,结合肿瘤药敏试验结果选择敏感化疗方案能提高化疗疗效.从而使卵巢癌治疗个体化.     

上皮性卵巢癌细胞DNA倍体和端粒酶活性检测的临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌DNA倍体和端粒酶活性与FIGO病理分期、病理分级、盆腹腔淋巴结转移的关系。方法:对45例上皮性卵巢癌进行全面准确的FIGO病理分期,通过流式细胞术对癌细胞进行DNA倍体检测,采用改进的银染TRAP法进行端粒酶活性检测。结果:病理分级、临床分期与DNA倍体含量比较:G2与G3比较异倍体率差异有显著性(P<0.05)。Ⅰ期 Ⅱ期与Ⅲ期比较差异无显著性(P>0.05)。病理分级、临床分期与端粒酶活性比较:病理分级与端粒酶活性比较差异有极显著性(P<0.005),二者存在正相关。临床分期与端粒酶活性比较差异有显著性(P<0.05),二者存在正相关。盆腹腔淋巴结转移与病理分级、临床分期比较:G2与G3比较差异无显著性(P>0.05)。Ⅰ期 Ⅱ期与Ⅲ期比较差异有显著性(P<0.05)。结论:对上皮性卵巢癌患者必须进行全面准确的分期探查,其癌组织的DNA倍体、端粒酶活性与FIGO病理分期、病理分级、盆腹腔淋巴结转移之间存在正相关。DNA异倍体和端粒酶阳性是判断卵巢癌恶性程度及其预后的客观指标,具有重要临床意义。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的影响

目的构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的mdr1基因的短发夹状RNA重组质粒，研究其沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的抑制作用。方法运用基因克隆技术构建靶向于mdr1基因的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL，CCK-8检测对SKOV3／TAXOL细胞增生的抑制作用。结果构建的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1能明显抑制mdr1基因的表达。CCK-8检测结果表明，转染重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1的SKOV3／TAXOL靶细胞的抑制率比对照组显著提高（P〈0．05）。pGPU6／GFP／Neo—mdr1明显抑制SKOV3／TAXOL细胞的增生。细胞凋亡检测显示，pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T后细胞凋亡增加，通过pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T促进凋亡的发生。结论mdr1基因在耐药的卵巢癌细胞增生与凋亡过程中发挥作用，重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1可有效地抑制SKOV3／TAXOL细胞内源mdr1基因的表达和mRNA的转录，并抑制细胞的增生和促进凋亡的发生，     

耐药性卵巢癌中CX43和P-gp的检测

目的:探讨细胞间隙连接蛋白43(connexin43,CX43)和P糖蛋白(P鄄Glycoprotein,P鄄gp)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系。方法:在1999年1月至2003年6月间,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌(primaryepitheliaovariancarcinoma,PEOC)和6例正常卵巢的存档蜡块,作为研究对象。根据临床诊断将它们分为三组:化疗耐药组30例,化疗敏感组30例,正常卵巢组6例。这些病例术前均未接受过放疗,入院后均行全子宫和双附件切除 盆腔淋巴结清扫 阑尾切除 大网膜切除术,全部66例患者均有随访结果。用流式细胞术定量分析66例标本组织中CX43和P鄄gp蛋白的表达量。结果:①CX43蛋白的表达:化疗耐药组<化疗敏感组<正常卵巢组织,两两比较结果差异有统计学意义。②P鄄gp的表达:化疗耐药组>化疗敏感组>正常卵巢组织,差异均有统计学意义。结论:CX鄄43蛋白表达下降及P鄄gp蛋白的表达上升与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关。     

Ⅰb和Ⅱa期子宫颈癌282例临床分析

目的　探讨Ⅰb 和Ⅱa期子宫颈癌盆腔淋巴结转移相关因素以及年龄大小与宫颈癌病理组织学类型 ,盆腔淋巴结转移之间的关系。方法　回顾分析 2 82例广泛性子宫切除及盆腔淋巴结清扫术的Ⅰb和Ⅱa期子宫颈癌患者的临床资料 ,统计其盆腔淋巴结清除数 ,阳性数及转移率。结果　临床分期Ⅰb和Ⅱa期子宫颈癌盆腔淋巴结转移率比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。病理类型 ,病理分级 ,宫颈肿瘤大小 ,间质浸润深度 ,脉管侵犯及病人年龄不同 ,子宫颈癌盆腔淋巴结转移率比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。与 35岁以上宫颈癌患者相比 ,35岁以下年轻Ⅰb 和Ⅱa期子宫颈癌中 ,腺癌比例多 ,盆腔淋巴结转移率高 ,两者比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论　盆腔淋巴结检出率受临床与病理等多种因素的影响。盆腔淋巴结转移与临床分期 ,病理类型 ,病理分级 ,宫颈肿瘤大小 ,间质浸润深度 ,脉管侵犯及病人年龄密切正相关。 35岁以下年轻子宫颈癌患者中腺癌比例大 ,盆腔淋巴结转移率高     

环氧化酶-2蛋白在复发性原发上皮性卵巢癌中的表达

目的 :探讨环氧化酶 -2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )与上皮性卵巢癌化疗疗效 (耐药或敏感 )及临床病理的关系。方法 :1999年 1月～ 2 0 0 3年 6月 ,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中筛选出 60例原发上皮性卵巢癌 (primaryepitheliaovariancarcino ma ,PEOC)作为研究对象。另选取 6例宫颈癌切除术后病理证实双卵巢为正常组织的病例作为对照。根据临床诊断、初治后复发时间等因素将 60例卵巢癌患者分为化疗耐药组 ( 3 0例 )和化疗敏感组 ( 3 0例 )。与 6例正常人作为对照组全部 66例均有随访结果。用流式细胞术定量分析 66例标本组织中COX 2蛋白的表达量。结果 :COX 2蛋白的表达量化疗耐药组 >化疗敏感组 >正常卵巢组织 ,单向方差分析两两比较差异均有统计学意义 ,P <0 0 0 5。随临床分期、病理分级、化疗疗程数的增加及有淋巴结转移 ,COX 2蛋白的表达量也随之增加 ,但是差异无统计学意义 ,P >0 0 5。结论 :COX 2蛋白的表达量与上皮性卵巢癌的复发、发展及疗程有关 ,与化疗耐药呈正相关。     

宫腔镜治疗子宫黏膜下肌瘤及子宫内膜息肉的临床分析

〔摘 要〕 目的：分析宫腔镜治疗子宫黏膜下肌瘤及子宫内膜息肉的临床效果。方法：选取厦门医学院附属第二医 院 2020 年 1 月至 2021 年 6 月期间接受宫腔镜电切术的 80 例子宫黏膜下肌瘤及子宫内膜息肉患者并纳入观察组,另 选取厦门医学院附属第二医院 2005 年 6 月至 2006 年 12 月接受传统治疗的 60 例子宫黏膜下肌瘤及子宫内膜息肉患者 并纳入对照组,比较两组患者手术情况、术后恢复情况、并发症发生率与复发率。结果：观察组子宫黏膜下肌瘤患 者手术时长、术中失血量均少于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;观察组子宫内膜息肉患者术中失血量少 于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。观察组子宫黏膜下肌瘤患者术后首次排气时间、术后首次下床活动时 间、术后 12 h 的视觉模拟评分法（VAS）评分、出院时间、月经恢复正常时间均少于对照组,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）;观察组子宫内膜息肉患者术后 12 h 的 VAS 评分、月经恢复时间均少于对照组,术后首次下床时间长 于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。观察组子宫黏膜下肌瘤患者水中毒发生率高于对照组,贯穿子宫肌层 损伤发生率、并发症总发生率低于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;观察组子宫内膜息肉患者术后 1 年内 复发率低于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论：宫腔镜电切术有助于减少子宫黏膜下肌瘤及子宫内膜 息肉患者术中出血,缩短术后恢复时间,降低术后并发症与复发风险。