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目的 获得纯化的双磷酸化His-PZR蛋白.方法 本试验采用His-PZR与C-Src蕈组原核表达载体共同转化E-coli BL21菌株的方法,通过IFFG诱导表达,Ni-NTA纯化及HPIE分离纯化等技术,获得双磷酸化的His-PZR蛋白.结果 成功表达了 His-PZR蛋白,约占全菌体蛋白的8.5%,相对分子质量约为10 000;并分离纯化出双磷酸化的His-PZR蛋白.结论 舣磷酸化His-PZR蛋白的表达和纯化,为进一步研究His-PZR与SHP蛋白问的作用机制及其在信号转导过程中的功能奠定了基础. 相似文献
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目的 本实验通过比较T2DM猪、非T2DM猪的糖代谢及能量代谢等关键调控基因（PGC-1α、Glut-4、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因）,探讨这些基因在T2DM发生中所起到的作用。方法 以广西巴马小型猪T2DM模型建立的发病组和未发病组的背最长肌为实验材料,利用QRT-PCR实时荧光定量的方法对糖代谢及能量代谢相关基因mRNA和线粒体基因的表达情况进行检测。结果 在广西巴马小型猪背最长肌中,T2DM组PGC-1α、Glut-4、ERRα和NRF-1的相对表达量均显著高于非T2DM组,TFAM和线粒体基因的相对表达量则稍低于非T2DM组。结论 在T2DM巴马小型猪骨骼肌中,上调PGC-1α及其下游基因Glut-4、ERRα和NRF-1的表达水平,有利于改善葡萄糖代谢;而线粒体合成不足,致使ATP合成量不够,或引起胰岛素抵抗,进而导致2型糖尿病的发生。 相似文献
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目的 通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础.方法 根据NCBI上发布的猪α-1,3半乳糖转移酶基因cDNA序列(AF221508),设计合成一对含有 HindⅢ和BamHI酶切位点的特异性引物,以广西巴马小型猪肝脏组织总 RNA为模板进行RT-PCR,所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序;将目的基因与pEGFP-N 1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-GGTA1,通过测序,双酶切鉴定.结果 所克隆的广西巴马小型猪GGTA1基因存在缺失第五外显子(81-116) 的GGTA1序列,序列全长1 080 bp和未缺失第五外显子的GGTA1序列,全序列为1 116 bp.构建两个表达载体(缺失第五外显子 pEGFP-GGTA1-1、未缺失第五外显子pEGFP-GGTA1-2).结论 广西巴马小型猪GGTA1基因存在第五外显子缺失的现象,通过对GGTA1基因克隆序列进行分析以及构建两个真核表达载体,为后面在猪源PK-15细胞中对其进行表达鉴定以及巴马小型猪 α-1,3半乳糖转移酶基因的沉默实验奠定基础. 相似文献
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目的 克隆广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区（CDS）序列，利用RT-PCR和QRT-PCR方法分析PGC-1α mRNA组织表达情况。方法 本实验以广西巴马小型猪背最长肌cDNA为模版，PCR扩增PGC-1α基因CDS序列，将其连接至pEASY-T5载体，转染细菌、验证和序列测定；通过RT-PCR半定量和QRT-PCR实时荧光定量检测PGC-1α基因在小型猪多个组织中的表达情况。 结果 克隆获得广西巴马小型猪PGC-1α基因CDS序列，全长2391bp，编码796个氨基酸，与参考序列的同源性为99.9%，两处碱基发生同义突变，分别C-A1105和G-A1524；PGC-1α基因在广西巴马小型猪心脏和肾脏中的表达丰度最高，其次是肝脏、皮下脂肪和背最长肌，而在胰腺中未检测到其表达。 结论 成功克隆了广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区序列并进行了多种组织表达分析，为后续研究PGC-1α在小型猪2型糖尿病发生过程中作用途径打下基础。 相似文献
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三个品种猪α-Gal抗原表位的免疫组化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为进一步研究α-1,3半乳糖转移酶在机体中的功能情况,以及本地猪种编码序列的缺失可能造成的对酶活性的影响。本研究对三个品种猪机体中主动脉、前腔静脉、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、气管、胃等组织的α-1,3半乳糖转移酶催化产物α-Gal抗原表位进行免疫组织化学分析。结果表明:猪体内的α-1,3半乳糖转移酶在表达模式上是保守的,空间分布上是广泛的。若以巴马小型猪构建异种器官移植供体模型,从遗传上将GGTA1基因敲除仍是最为有效的途径。 相似文献
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