沉默血管生成素-2表达对人肺腺癌细胞生物学特性的影响

背景与目的促血管生成素-2(Ang-2)是一类调节血管生成的重要细胞因子,与肿瘤的发生发展有密切的联系.本研究通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制肺腺癌细胞A549Ang-2的表达,观察其对癌细胞生物学特性的影响.方法构建H1启动子驱动的表达针对Ang-2的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(AAV-Ang-2shRNA),转染A549细胞,同时以正常A549细胞及其转染空病毒(AAV-Null)的A549细胞作为对照,观察RNAi沉默Ang-2表达在体外及体内对A549细胞生长、致瘤、增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响.结果体外实验结果表明重组腺相关病毒转染A549细胞48 h后Ang-2蛋白表达比对照组明显降低(P＜0.001);细胞生长明显减慢(P＜0.001).RNA干扰后A549细胞细胞周期分析结果提示A549细胞对照组、AAV-Null对照组和AAV-Ang-2thRNA验组的增殖指数(proliferation index,PI)分别为0.51±0.43、0.48±0.29和0.26±0.31.AAV-Ang-2shRNA验组与对照组比较,PI明显减少(P=0.001).体内实验结果表明,AAV-Ang-2shRNA实验组在胸腺缺陷小鼠成瘤体积、瘤质量均明显低于两对照组(P＜0.01).各组微血管密度分析结果分别为46.4+13.1、44.2+13.6和34.9±12.8;AAV-Ang-2shRNA实验组肿瘤组织内新生血管数目明显低于对照组(P＜0.001).各组凋亡指数(apoptosisindex,AI)分别为(5.98±3.11)％、(7.51±4.42)％及(17.06±7.43)％.AAV-Ang-2shRNA组比PBS组、AAV-Null组凋亡百分率明显增高(P=0.005,P=0.007).各组细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性表达率分别为(92.75+9.7)％、(85.8±11.8)％、(69.8+16.5)％;AAV-Ang-2shRNA组PCNA指数低于两对照组(P=0.014,P=0.021).结论腺相关病毒介导的siRNA表达能明显抑制A549细胞中Ang-2的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

运动联合穴位按摩治疗糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症的效果

目的:探讨运动联合穴位按摩治疗社区糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症患者的效果.方法:选择伴有下肢动脉硬化闭塞症的糖尿病患者150例,随机分为社区管理组和运动干预组各75例.社区管理组进行常规糖尿病管理,运动干预组在社区管理基础上进行运动联合穴位按摩干预.分别比较两组在干预前和干预9、18个月后的跛行距离、动脉硬化指数(AI)、踝肱指数(ABI)、血管多普勒超声表现.结果:干预9个月时,运动干预组患者的跛行距离大于干预前和社区管理组(P＜0.05);AI小于干预前(4.82±1.61比5.28±1.30,P＜0.05).干预18个月时,运动干预组患者的跛行距离为(697±199)m,ABI为0.87±0.19,均大于社区管理组的(635±241)m和0.78±0.22 (P＜ 0.05);AI、腘动脉内膜中层厚度均小于社区管理组(P＜0.05).干预前后社区管理组的跛行距离、ABI、内膜中层厚度比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:对于糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞患者应在常规社区管理基础上联合运动和穴位按摩进行干预,对患者症状改善和病情控制有积极意义.     

血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死再灌注后心肌及内皮素-1、一氧化氮／一氧化氮合酶体系影响的实验研究

目的：观察血府逐瘀胶囊对急性心肌梗死（acute myocardial infarction．AMI）再灌注后心肌组织及一氧化氮（nitric oxide,NO）／一氧化氮合酶（nitric oxide synthase．NOS）体系和内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的影响，探讨其改善血管内皮功能的机制。 方法：Yorkshire猪45只，随机分成假手术组、模型对照组和血府逐瘀胶囊治疗组。开胸结扎左冠状动脉前降支90min后，松解2h制备AMI再灌注模型。测定造模前后和再灌注后血清ET-1和NO的含量；冠状动脉造影观察心肌血流恢复情况；Western blot分析心肌组织内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）和ET—1蛋白表达；病理学分析心肌组织形态变化。 结果：血府逐瘀胶囊组造模后和再灌注后血ET-1水平低于模型组（P〈0．01），而NO表达水平明显高于模型组（P〈0．01）。冠状动脉造影提示治疗组冠状动脉血流通畅情况优于对照组，但结果没有统计学意义（P=0．253）。Western blot显示血府逐瘀胶囊组eNOS蛋白表达较模型组有所提高。ET-1蛋白表达则有所下降（P〈0．01）。HE染色及微血管密度分析显示与模型对照组相比，血府逐瘀胶囊组毛细血管扩张程度明显减轻。心肌组织损伤明显改善，微血管密度明显增加。 结论：内皮细胞受损可能是无再流现象发生的重要机制之一．血府逐瘀胶囊可能通过调控NO和ET-1基因表达来达到对AMI的治疗作用。     

沉默血管内皮生长因子及促血管生成素-2基因抑制裸鼠人肺腺癌移植瘤生长的实验研究

目的研究沉默血管内皮生长因子(VEGF)及促血管生成素-2(Ang-2)基因表达对裸鼠人肺腺癌移植瘤生物学特性的影响。方法利用基因重组技术构建H1启动子驱动表达针对VEGF及Ang-2siRNA的重组腺病毒Ad-VEGFshRNA及Ad-Ang-2shRNA。制备裸鼠人肺腺癌A549细胞移植瘤模型,观察RNA干扰后(RNAi)对肿瘤生物学特性的影响。结果重组腺病毒接种裸鼠30d后,Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组与对照组比较,肿瘤体积及重量均明显减小,差异均有统计学意义(P<0.01),并且Ad-VEGFshRNA及Ad-Ang-2shRNA联合干扰组与Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组比较能够更有效地抑制肿瘤细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05);而Ad-VEGFshRNA组与Ad-Ang-2shRNA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色显示:Ad-VEGFshRNA、Ad-Ang-2shRNA干扰组细胞增殖减慢,凋亡增加,微血管密度明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。并且Ad-VEGF shRNA及Ad-Ang-2shRNA联合干扰组与单基因干扰比较,能够更有效地抑制肿瘤细胞增殖,促进凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF及Ang-2基因靶向RNA干扰在体内有明显抑制肺腺癌细胞生长的作用,联合抑制VEGF及Ang-2基因的表达能够更有效地抑制肺腺癌的生长。     

血管内皮细胞生长因子RNA干扰真核表达载体的构建

目的构建特异性的人血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因siRNA真核细胞表达载体，为探索RNA干扰（RNM）分子靶向治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的作用奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的VEGF基因核苷酸序列，按照Keynolds设计原则，针对VEGF的序列及二级结构选择靶序列，设计双链小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA），再转化为能表达其小发卡结构RNA（Small hairpin RNAs，shRNA）的DNA序列，并与pRNAi-H1质粒定向连接，构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子Hl的真核表达载体pRNAi-H1VEGF siRNA，经限制性内切酶酶切、PCK和DNA测序进行鉴定。结果构建针对人VEGF的RNM真核细胞表达载体经限制性内切酶酶切、PCK和DNA测序证实与设计完全一致。结论针对人VEGF的RNM真核细胞表达载体构建成功。     

厄贝沙坦在持续性房颤复律后心律的临床观察

目的观察厄贝沙坦在房颤复律后联合应用胺碘酮维持窦性心律的疗效。方法房颤持续时间〉30d的住院患者147例,恢复窦性心律后随机分为胺碘酮组（72例）和厄贝沙坦＋胺碘酮组（75例）,胺碘酮组治疗方案：恢复窦性心律后,给予胺碘酮0.2g/d一次口服;厄贝沙坦＋胺碘酮组在上述方案基础上加服厄贝沙坦150mg/d,复律后随访观察22个月。结果用药后厄贝沙坦＋胺碘酮组窦性心律维持率明显高于单用胺碘酮组,差异有统计学意义（58.7%vs.41.7%,P〈0.05）,厄贝沙坦＋胺碘酮组左房内径明显小于单用胺碘酮组,差异有统计学意义（P〈0.01）,随访中无不良反应发生。结论长期服用厄贝沙坦可逆转左心房扩大,预防心房的电重构,可更有效地维持窦性心律。     

联合应用伊布利特与普罗帕酮转复持续性心房颤动的临床研究

目的观察伊布利特和普罗帕酮联合应用转复持续性心房颤动的有效性和安全性。方法选择房颤持续时间在1个月~1年之间的患者共47例,随机分为伊布利特和普罗帕酮联合治疗组及单独伊布利特治疗组。联合治疗组先口服普罗帕酮600 mg,20分钟后首次给予伊布利特1 mg/次静推;如用药后10分钟仍为房颤,再次静脉给1 mg/次。中途转复则立即停用。单独伊布利特治疗组伊布利特给药方法同上。结果伊布利特和普罗帕酮联合治疗组房颤的转复率明显高于单独伊布利特组(P<0.01)。两组平均转复时间比较,单独伊布利特组短于联合治疗组(P<0.01)。两组用药后QTc均明显延长,但两组比较无差异(P>0.05)。随访2~15个月,无患者房颤复发。结论伊布利特和普罗帕酮联合应用对持续性房颤的转复作用是安全有效的,其疗效优于单独应用伊布利特。     

胺碘酮在治疗冠状动脉架桥术后围术期新发快速房颤中的应用

目的 研究静脉用胺碘酮治疗CABG术后围术期新发快速房颤的有效性和安全性。方法 218例冠状动脉架桥术后患者（术前均为窦性心律）其中39例发生房颤，占17．89％，均采用胺碘酮经静脉治疗（静推3mg／kg。随后600-1200mg／d静脉持续泵入2～5d）。观察其转复窦性心律的效果及其不良反应。结果 36例患者成功转复为窦性心律，总有效率为92．31％。发生不良反应共4例，占术后房颤患者总人数10．25％。心房纤颤转复为窦性心律前后动脉收缩压、舒张压、Q—T—c间期无统计学差异（P〉0．05），心室率变化有显著统计学意义（P〈0．01）。结论 静脉应用胺碘酮治疗并发于冠状动脉架桥术后围术期新发快速房颤是有效且较安全的方法。     

RNA干扰血管内皮生长因子受体表达对人肺腺癌细胞的抑制作用

目的:观察人血管内皮生长因子受体(VEGFR)RNA干扰重组腺病毒(Ad-VEGFRshRNA)对人肺腺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:制备携带人VEGFR的RNA干扰重组腺病毒,转染A549细胞,通过荧光显微镜观察转染效率.应用Western印迹法检测A549细胞VEGFR蛋白的表达,MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线,细胞周期及集落形成试验测定细胞生长抑制情况.同时,制备裸鼠A549细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果:Western印迹法显示RNA干扰组VEGFR表达水平明显降低;细胞生长曲线表明,RNA干扰后细胞生长明显减缓;细胞周期及集落形成试验提示RNA干扰后肿瘤细胞生长受到明显抑制.裸鼠皮下移植瘤生长情况提示RNA干扰可以显著抑制肿瘤生长.结论:RNA干扰重组腺病毒Ad-VEGFRshRNA能有效抑制A549细胞中VEGFR的表达,并能抑制肿瘤生长.     

重组腺相关病毒介导的RNA干扰抑制血管生长素表达对肺腺癌细胞成瘤能力的影响

目的 通过腺相关病毒(AAV)介导的RNA干扰(RNAi)抑制肺腺癌细胞A549血管生长素(ANG)表达,观察其对癌细胞生长和成瘤能力的影响.方法 构建H1启动子驱动的表达针对ANG的小干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(AAV-shANG),转染A549细胞,同时以正常A549细胞以及转染AAV-Null的A549细胞作为对照,观察重组腺相关病毒介导的RNAi抑制ANG表达对A549细胞生长、致瘤、肿瘤细胞增殖、凋亡及肿瘤微血管密度的影响.用t检验分析各组间差别,所有数据均用x±s表示.结果 体外实验结果表明重组腺相关病毒AAV-shANG成功构建,重组腺相关病毒转染A549细胞72 h后ANG蛋白表达水平明显低于A549细胞组及AAV-Null组;转基因A549细胞细胞周期分析结果提示,正常A549细胞、AAV-Null转染细胞和AAV-shANG转染细胞的增殖指数(PI)分别为0.32±0.29、0.35±0.38和0.31±0.43,差异不明显.体内实验结果表明,AAV-shANG转染细胞组胸腺缺陷小鼠的成瘤体积、瘤质最均明显低于两对照组.各组微血管密度分别为9.4±1.5、9.8±2.1和5.7±1.9,提示AAV-shANG转染细胞组与正常A549细胞和AAV-Null转染细胞组有明显差异.各组凋亡细胞的百分率分别为(7.7±3.1)%、(8.5±5.4)%和(17.1±8.6)%.AAV-shANG转染细胞组凋亡细胞的百分率明显高于正常A549细胞组和AAV-Null转染细胞组,各组细胞增殖核抗原(PCNA)阳性表达率分别为(84.8±9.7)%、(85.8±9.8)%、(70.4±10.1)%,AAV-shANG转染细胞组PCNA表达率低于两对照组.结论 AVV-siRNA表达能显著抑制肿瘤细胞ANG表达及肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.