小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定

目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。     

胃黏膜癌变过程中hTERT和相关基因表达的变化及其临床意义

目的探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜（normal mucosa，NM）、肠化（intestinal metaplasia，IM）、异型增生（dysplasia，DYS）、早期胃癌（early gastric cancer，EGC）和进展期胃癌（advanced gastric cancer，AGC）中的表达水平、相互联系及其临床意义。方法经手术或胃镜病理证实的不同病变胃黏膜组织132例为研究对象（其中NM20例、IM30例、DYS15例、EGC24例、AGC43例），采用免疫组化SP法分别检测其hTERT、c-myc、bcl-2、NF-κB的表达水平，并对各指标阳性表达率、相关性及临床病理联系进行比较分析。结果在胃黏膜癌变过程中，除bcl-2外，hTERT、c-myc、NF-κB的表达随着胃黏膜病变程度的加重而逐渐增加，各组间比较差异显著；进一步分析表明hTERT与c-myc在IN、DYS、AGC等3组中具有显著的相关性（P〈0．05），而hTERT与bcl-2、NF-κB在IM、DYS、EGC、AGC等各组中均无显著的相关性（P〉0．05）；临床病理分析表明，hTERT在低分化及未分化中的表达显著高于高、中等程度分化（P〈0．05），而与性别、年龄、肿瘤大小等无关。结论hTERT随着胃黏膜病变程度的加重，其阳性表达率逐渐增高，提示hTERT可能在胃黏膜癌变过程中具有重要意义，是胃黏膜癌变的早期事件；c-myc过表达可能是激活hTERT过表达的重要调节因素；hTERT不仅可以作为胃黏膜癌变的早期诊断指标，而且有可能成为胃癌或其他肿瘤基因治疗或免疫治疗的良好靶位。     

HCCR-2反义核酸对肝癌HepG2细胞的作用

Objective To investigate the effects of antisense recombinant euraryotic expression vector of HCCR-2 on the proliferation and apoptosis of HepG2. Methods The antisense recombinant eukaryotic expression vector of HCCR-2 was constructed. The vector was stably transfected to the HepG2 cells, and positive clones were selected by G418 (antiseuse vector group), pIRES2-EGFP vector was transfected into the HepG2 cells in the same way (pIRES2-EGFP group). The conditions of the nontransfected HepG2 cells were used as control (HepG2 group). Changes in cell growth curve, cell cycle, cell apoptosis and morphology of HepG2 cells after the transfec-tion were detected by MTT method, flow cytometry and transmission electron microscopy, respectively. All the data were analyzed by one-way ANOVA and chi-square test. Results The expression level of HCCR-2 mRNA was down-regulated to 0.39±0.04 in antisense vector group, and the expression level of HCCR-2 mRNA in pIRES2-EGFP group and HepG2 group were 0.62±0.06 and 0.72±0.03, respectively, with significant difference among the 3 groups (F=43.701, P<0.05). The apoptotic rate of HepG2 cells in antisense vector group, pIRES2-EGFP grop and HepG2 group were 13.30%, 2.51% and 2.07%, respectively, with significant difference among the 3 group (χ2=6.793, 8.721, P<0.05). The growth of HepG2 cells in antisense vector group was retarded, and was blocked in G0/G1 stage. Conclusions The HCCR-2 antisense recombinant eukaryotic expression vector can inhibit the mRNA expression of HCCR-2 and promote the apoptosis of cells. HCCR-2 may be involved in cell regulation and the proliferation of hepatocellular carcinoma cells.     

HCCR-2反义核酸对肝癌HepG2细胞的作用

Objective To investigate the effects of antisense recombinant euraryotic expression vector of HCCR-2 on the proliferation and apoptosis of HepG2. Methods The antisense recombinant eukaryotic expression vector of HCCR-2 was constructed. The vector was stably transfected to the HepG2 cells, and positive clones were selected by G418 (antiseuse vector group), pIRES2-EGFP vector was transfected into the HepG2 cells in the same way (pIRES2-EGFP group). The conditions of the nontransfected HepG2 cells were used as control (HepG2 group). Changes in cell growth curve, cell cycle, cell apoptosis and morphology of HepG2 cells after the transfec-tion were detected by MTT method, flow cytometry and transmission electron microscopy, respectively. All the data were analyzed by one-way ANOVA and chi-square test. Results The expression level of HCCR-2 mRNA was down-regulated to 0.39±0.04 in antisense vector group, and the expression level of HCCR-2 mRNA in pIRES2-EGFP group and HepG2 group were 0.62±0.06 and 0.72±0.03, respectively, with significant difference among the 3 groups (F=43.701, P<0.05). The apoptotic rate of HepG2 cells in antisense vector group, pIRES2-EGFP grop and HepG2 group were 13.30%, 2.51% and 2.07%, respectively, with significant difference among the 3 group (χ2=6.793, 8.721, P<0.05). The growth of HepG2 cells in antisense vector group was retarded, and was blocked in G0/G1 stage. Conclusions The HCCR-2 antisense recombinant eukaryotic expression vector can inhibit the mRNA expression of HCCR-2 and promote the apoptosis of cells. HCCR-2 may be involved in cell regulation and the proliferation of hepatocellular carcinoma cells.     

胃肠道间质瘤的螺旋CT诊断价值

目的：探讨螺旋CT平扫和增强扫描对胃肠道间质瘤（GISTs）的诊断价值。方法：回顾性分析33例经手术、病理及免疫组化证实的GISTs患者螺旋CT表现。结果：平扫33例中，瘤体呈均匀等密度10例，肿块周边呈等密度中间略低或不均匀低密度23例。增强扫描16例中，病灶区呈中度或明显均匀强化9例，不均匀强化并可见囊状改变4例，病灶中央大片状坏死伴周边部明显强化3例。33例中良性9例，肿块直径多小于5cm，且呈圆形、类圆形，规则，边界尚清楚；恶性24例，直径多大于5cm，多数向腔外生长，边界不清楚，5例肿块中有坏死出血，4例发现转移灶。结论：螺旋CT检查对GISTs诊断虽无特异性，但可以准确定位，发现转移灶，显著提高GISTs的检出率，弥补常规胃肠道造影和内窥镜检查的不足，对GISTs术前定位和鉴别诊断均有重要价值。     

格列美脲治疗新诊断2型糖尿病的临床疗效分析

目的:分析格列美脲治疗新诊断2型糖尿病的临床疗效.方法:我院2014年5月至2016年5月收治的80例新诊断2型糖尿病患者随机分为两组,A组和B组患者各40例,A组患者给予格列本脲,B组患者给予格列美脲,比较两组患者的空腹血糖、餐后2h血糖、不良反应及临床疗效.结果:A组和B组总有效率为72.5%和90.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)(P<0.05);两组治疗后空腹血糖和餐后2h血糖的对比具有统计学差异(P<0.05);A组和B组不良反应发生率为20.0%和17.5%,差异具有统计学意义(P>0.05).结论:格列美脲治疗新诊断2型糖尿病的效果显著,值得临床推广和使用.     

卡培他滨或贝伐单抗用于结直肠癌维持治疗的回顾性分析

目的 分析卡培他滨或贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗的疗效和安全性.方法 回顾性分析2012年1月至2016年5月在我院病理诊断为“任何原发肿瘤”(primary tumor,T)、“任何区域淋巴结”(regional lymph nodes,N)、“远处转移”(distant metastasis,M)1期(TXNXM1)的结直肠癌接受维持治疗的患者病例资料.予以一线标准方案化疗,待病情缓解或稳定后,按照维持治疗方案的不同分为卡培他滨维持治疗组和贝伐单抗维持治疗组,评价两组患者维持治疗的疗效及不良事件.结果 本研究共纳入病例66例,卡培他滨组41例,贝伐单抗组25例.卡培他滨维持化疗组中位无疾病进展生存时间(progression-free survival,PFS)为5.6个月,贝伐单抗维持治疗组中位PFS为7.7个月,两组比较无统计学差异(HR:1.171,95％ CI:0.701 ～1.966P＞0.05).卡培他滨维持治疗组中位总生存时间(overall survival,OS)为28.2个月,贝伐单抗维持治疗组中位OS为31.9个月,两组比较无统计学差异(HR:1.143,95％ CI:0.602 ～2.180,P＞0.05).两组均无Ⅳ级不良事件发生,卡培他滨维持治疗组手足综合征发生率较高(P＜0.05),贝伐单抗维持治疗组出血发生率较高(P＜0.05),其他不良反应差异无统计学意义(P＞0.05).结论 贝伐单抗用于转移性结直肠癌维持治疗相较卡培他滨显示出更长的疾病控制时间和总生存时间,但无统计学差异;有出血风险的患者建议选择卡培他滨进行维持化疗.     

动物活体光学成像的应用进展

随着对亚细胞结构和功能、分子生理和病理、细胞间和细胞内信号通路研究的深入,人类对疾病和对生命本质的认识不断被追朔到蛋白质、基因水平.在上个世纪发展起来的CT、MRI、PFT、超声等宏观影像技术已经远不能满足对活体环境内细微生命过程的探询.组织切片和免疫染色能够部分解释一些生物现象,但是需要研究对象与活体组织的分离,所得结果与其在活体内机制难免有所偏离,甚至完全相反.荧光染料(fluorescent dye)能对多种细胞共价标记并进行活体显像,但多被限制于体外培养的细胞.     

人肝素酶蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的构建人肝素酶蛋白的原核表达载体,表达并纯化重组人肝素酶蛋白和制备其单克隆抗体。方法将人肝素酶cDNA克隆至原核表达载体pET30a(+),经大肠杆菌表达、纯化后,获得的肝素酶纯化蛋白免疫小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,制备能产生肝素酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用Western blotting、ELISA等技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。结果原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达人肝素酶蛋白,并进一步从10株杂交瘤细胞中选取了3株能稳定分泌人肝素酶单抗的杂交瘤细胞株。结论成功制备了3株人肝素酶特异性单克隆抗体。     

端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNA hTERT的真核荧光质粒（pIRES2-EGFP—hTERT）转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westom Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G,期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT／U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从01期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强．