小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型的建立

目的：体外建立小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型,为体外研究中药抗炎机制提供实验模型。方法分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞;形态学观察巨噬细胞的生长;流式细胞术鉴定所分离细胞的纯度;以不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/mL)的脂多糖(LPS)作用细胞24 h及1μg/mL的LPS作用细胞不同时间(0、4、8、16、24、48 h),荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结果获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态特征,纯度为84.55%;在一定范围内,LPS以浓度依赖和时间依赖的方式上调IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结论1μg/mL的LPS作用细胞24 h能建立较为合理的炎症模型。     

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响

 目的: 研究阻断Sonic Hedgehog (Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法: RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot 检测凋亡相关蛋白表达。结果: Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched (Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G₀/G₁期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论: 阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G₀/G₁期,并诱导肝癌细胞凋亡。