三乙醇胺对碱性磷酸酶活性的影响

为了测定三乙醇胺对碱性磷酸酶活性的影响 ,采用经典酶学方法观察了三乙醇胺对溶液 AL P的抑制类型 ,并将 ALP用 Sepharose4B-CNBr固定化 ,再测定其抑制作用。结果显示 ,三乙醇胺对溶液 AL P的抑制作用属混合型抑制作用 ,其 Ki=0 .0 2 4mmol/l;Ki =0 .0 0 6 5 mmol/l ;对固定化酶仍起抑制作用 ,其表观 Kmapp为 3.13mmol/l,高于无抑制剂的 Kmapp2 .6 3mmol/l     

人尿rGT的初步研究

用r—谷氨酰—α—萘胺做底物,在有或没有受体甘氨酰甘氨酸时,直接对正常人尿r—谷氨酰转移酶(rGT或rGTP EC2·3·2·2)作了一些动力学数据的测定。在PH 6.0～11.3的范围内,测定了水解酶与转移酶的活性比,在接近正常生理PH时,rGT主要发挥转移酶作用。在PH<7·0·水解作用可能是此酶的限速过程。测定了16种氨基酸作为受体的可能性,观察到有的氨基酸起激活作用。有的起抑制作用。直接用尿做SePadeXG—200,凝胶过滤,rGT呈单—峰值,Cl~-对rGT的作用属直接激活。直接用尿做COnA—SePharcse柱亲和层析表明,52％以上的侧链属糖型。绝大部分酶可被吸附。这有可能被用来预测肾脏等器官肿瘤的发生,更为制备rGT提供了工具。初步实验表明,尿rGT的性质与其它器官相似,且活性高,酶稳定,尿中尿素等物质对其性质无影响。本文认为,由尿素备rGT可能是条经济方便的途径。     

甲壳糖固定血管紧张素转换酶的制备及其性质

目的 将血管紧张素转换酶(ACE)固定化并测定其动力学性质。方法 以甲壳糖为载体，碳二亚胺(EDC)为交联剂，与分离纯化的ACE混合,使ACE固定化；并以马尿酰甘氯酰甘氨酸(HCG)为底物，分别测定了其游离酶和固定化酶的动力学性质。结果 固定化酶活力110u／g湿重，固定化率为22％，与游离酶比较，固定化酶稳定且具良好的耐热性，在50—80℃固定化酶较游离酶稳定。在pH7．1的底物缓冲体系中，37℃，游离酶Km=0.026mol／L；在间歇振摇下固定化酶的表现Km=0．040mol／L。游离酶最适pH为、8.0固定化酶最适pH为9．0。结论 用甲壳糖固定ACE方法简便可行，且固定后的甲壳糖性能稳定，有广阔的应用前景。     

激活剂与不同类型抑制剂同时存在对血管紧张素转化酶催化反应影响的探讨

推导了血管紧张素转化酶在激活剂、不同类型抑制剂同时存在条件下的速度方程式 ,并试图表达该酶在天然条件下的催化反应     

亲和色谱法从猪骨胶原蛋白酶解物中分离纯化血管紧张素转换酶抑制剂

目的从猪骨胶原蛋白酶解物中分离出高纯度的血管紧张素转换酶抑制剂。方法将胶原蛋白酶解物用双蒸水溶解 ,先上SephadexG 2 5柱 ,用含有 10mmol/L吡啶的 0 .6mol/L醋酸溶液洗脱 ,收集对血管紧张素转换酶有抑制作用的峰值部分冻干 ;再上血管紧张素转换酶抑制剂亲和柱洗脱 ,测定各收集管洗脱液的比抑制活力 ,收集峰值部分冻干。结果亲和色谱柱洗脱液峰值管比抑制活力达 14 5 0u/mg,为粗提液的 90 6倍 ,活力回收率为 12 .1%。结论利用亲和色谱法 ,能够从猪骨胶原蛋白酶解物中分离出高纯度的血管紧张素转换酶抑制剂。     

猪肺血管紧张素转换酶的提纯

目的：探讨纯化猪肺血管紧张素转换酶（ACE）的一个简便方法。方法：将新鲜猪肺匀浆,上清液通过（NH4）2SO4分级沉淀,SephadexG-200凝胶过滤,DEAE－Sephacel以及羟基磷灰石柱层析。结果：由251g猪肺制备出8．18mg酶蛋白,活力回收为33％,比活力936．43U/mg蛋白,较上清液提纯233倍。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PH8．5）显示一条带。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测知,相对分子质量为190000。结论：该方法简便,活力回收高,比活力显著高于同类研究报道的15．6U/mg蛋白。     

固定无花果蛋白酶制备可溶性肽的研究

将 Sephadex G-200与β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)首先醚化制备对氨基苯砜乙基交联葡聚糖(ABSE-Sephadex G-200),然后经重氮化固定无花果蛋白酶。固定化酶的活力回收达69%。苯甲酰-DL-精氨酰-β-蓁胺(BANA)对该酶固定化过程中的活性变化有保护作用。天然酶与固定化酶都具有良好的耐热性,在59～60℃,80min,活性均无明显下降;在69～70℃,80min 固定化酶较天然酶更稳定。用 BANA 为底物,在半胱氨酸存在下,测定了两种形式酶的动力学性质。在 pH7.7的磷酸盐缓冲系统中,37℃天然无花果蛋白酶的 Km=0.32m-mol/L;在间歇振摇下固定化酶的表观 Km′=1.02mmol/L。最适 pH 无明显改变,均为7.7。     

猪肺血管紧张素转换酶的制备

目的利用猪肺制备血管紧张素转换酶 (ACE)。方法将新鲜猪肺匀浆 ,6 0 0 0×g离心 30min后 ,经 1 .6～ 2 .6mol/L (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,SephadexG 2 0 0 ,QHyperD离子交换色谱 ,得到经SDS PAGE显示一条带的ACE纯品。结果猪肺 30 0g可制备出ACE 1 1 .2 5mg,活力回收率为 2 0 .70 % ,比活力为 1 4 80 .0u/mg,较组织匀浆上清提纯提高 42 8.99倍。结论此法结果较理想 ,可用于较大规模制备ACE     

三乙醇胺染毒大鼠对碱性磷酸酶的抑制类型的作用

目的　实验测定三乙醇胺对大鼠碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法　按照经典酶学方法 ,观察不同浓度三乙醇胺对大鼠血清ALP的抑制作用 ,探讨三乙醇胺对溶液ALP的抑制类型 ,用Dixon和Cronish Bowden作图法分别求出Ki与Ki’。结果　三乙醇胺对溶液ALP的抑制作用属混合型抑制作用 ,其Ki=0 .0 2 4mmol L ;Ki’ =0 .0 0 65mmol L。结论　三乙醇胺对大鼠血清ALP有混合型抑制作用。     

胶原蛋白酶解物的降压作用及生物学特征

目的 研究胶原蛋白酶解物（CEH）对大鼠血压、豚鼠肠平滑肌及猪肺ACE的作用。方法 选用正常麻醉大鼠、SHR及肾性高血压大鼠，采用颈动脉插管法检测CEH对血压的影响；CEH对离体豚鼠回肠平滑肌的作用。结果 CEH对猪肺血管紧张素转换酶（ACE）的IC50为26μmol/L。1.5g/kg静脉注射能降低正常麻醉大鼠和SHR大鼠的血压，1.0g/kg静脉注射对肾性高血压大鼠也引起降压效应。单次口服2g/kg CEH，正常及SHR大鼠血压无明显变化，连续应用（2g/kg)15d,SHR大鼠则呈现弱的降压效应。7.5g/I CEH对离体豚鼠回肠平滑肌产生兴奋收缩效应。结论 CEH的降压作用和兴奋鼠平滑肌的作用可能与抑制ACE有关。