CYP2C19基因多态性在中草药物代谢性质筛选中的初步研究

目的：体外测定三个CYP2C19基因型（CYP2C19＊1、CYP2C19＊2、CYP2C19＊3）酶动力学常数和药物抑制常数,研究CYP2C19基因多态性对药物代谢的影响。方法：以CEC（3-cynao-7-ethoxycoumarin）作为CYP2C19特异性荧光底物进行酶学反应,检测CYP2C19三个多态性酶的活性,使用非线性回归方法计算酶促反应动力学参数Km值,Vmax值和内在清除率Clint值（Vmax/Km）。通过将特异性荧光底物CEC,待检测中草药物以及其他用来模拟体内环境的相关实验条件相组合进行体外酶抑制反应,分析待检测的19种中草药物对CYP2C19基因多态性的抑制效应,并计算其IC50值。结果：抑制筛选实验表明：2C19参与代谢的底物和已知抑制剂均对其有抑制作用,多数中草药物对CYP2C19抑制作用微弱或者无抑制作用;化学结构或治疗作用类似的同类药品对CYP2C19的抑制情况不一;不同基因型被同一种药物抑制程度也不尽相同,甚至差别较大。结论：建立了高效、稳定、简便的荧光高通量药物筛选平台,为后期研究CYP2C19应用于创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测奠定了基础,为临床潜在药物相互作用提供前期实验依据。     

草酰乙酸对锂-匹罗卡品癫痫大鼠的神经保护作用

目的观察静脉注射草酰乙酸(oxaloacetate,OxAc)对氯化锂-匹罗卡品癫痫(lithium-pilocarpine seizures,LPS)模型大鼠的神经保护作用。方法 30只6～8周龄、体质量180～220 g的Sprague-Dawley雄性大鼠按随机数字表法分为5组:生理盐水对照组(用0.9%生理盐水代替匹罗卡品)、LPS模型对照组、LPS+OxAc组(癫痫持续状态终止时注射OxAc 3.5 mg/100 g)、LPS+OxAc+谷草转氨酶(glutamate-oxaloacetate transminase,GOT)组(癫痫持续状态终止时注射OxAc 3.5 mg/100 g+GOT 3.5μg/100 g)及LPS+OxAc+马来酸盐(Maleate)组(癫痫持续状态终止时注射OxAc3.5 mg/100 g+Maleate 6.3 mg/100 g)(n=6)。用氯化锂和匹罗卡品制备癫痫动物模型,诱发癫痫持续状态(status epi-lepticus,SE)60 min后注射安定终止发作。分别检测SE终止后不同时间点各实验组大鼠脑脊液与血液中的谷氨酸浓度、脑电图表现及神经元脱失情况。结果 LPS模型对照组大鼠SE终止后脑脊液与血液中的谷氨酸浓度显著升高,8 h左右达到最高峰,与生理盐水对照组相比,分别升高了约88%和54%,随后开始缓慢下降。在SE终止后静脉注射OxAc可以在8 h内明显降低癫痫大鼠脑脊液中的谷氨酸浓度(P<0.05),8 h后其作用基本消失;OxAc对癫痫大鼠血液中谷氨酸浓度的降低作用可以持续至注射后12 h(P<0.05)。OxAc对癫痫大鼠脑电图表现及海马、齿状回门区神经元脱失现象也有明显改善作用。在应用OxAc的同时,静脉注射GOT可以增强OxAc对LPS大鼠的神经保护作用,而同时应用GOT特异性抑制剂Maleate可以减弱OxAc的上述作用效果。结论静脉注射OxAc可通过促使血液中谷氨酸浓度下降而对氯化锂-匹罗卡品癫痫模型大鼠的神经起到保护作用。     

基于生物信息学技术挖掘番茄红素对前列腺癌细胞的作用靶点

目的：前列腺癌是泌尿系统中发病率最高的肿瘤,番茄和其他含番茄红素的食物对预防前列腺癌和减缓其发展进程有效,但是番茄红素作用于前列腺癌的机制尚不明确。本研究利用生物信息学方法深入挖掘番茄红素作用于前列腺癌的潜在靶点,有利于进一步阐明其在前列腺保护中的分子机制以及潜在的其它应用。方法：从GEO数据库检索并下载番茄红素补充和安慰剂对照的列腺癌患者前后的癌组织表达组基因芯片数据集,并利用加权基因共表达网络分析,构建基因共表达模块,并对性状高关联模块进行GO及KEGG聚类分析和节点基因筛选。结果：利用数据集GSE27140中114例样本,共构建了16个共表达模块,其中2个模块与性状关联度较高,参与上皮细胞-间充质细胞转变、姐妹染色单体分离、细胞衰老等信号通路。进一步对模块基因连通性分析发现2个节点基因。结论：本研究筛选出番茄红素治疗前列腺癌的潜在作用靶点,为阐明番茄红素的作用机制提供了有意义的线索。     

基于基因芯片整合分析筛选及验证BeWo细胞合体化相关调控因子

目的：合体滋养层细胞（syncytiotrophoblast,STB）是一类多核化上皮细胞位于人类胎盘最外层,由单核滋养细胞（cy－totrophoblast,CTB）分化、融合而来,肩负妊娠维持关键激素的分泌和母胎间营养交换的重要职责,也是母胎屏障重要组成部分之一。然而,目前关于胎盘滋养细胞的合体化过程的调控机制仍不明确。本研究即利用生物信息学的方法筛选并初步验证潜在调控绒毛膜癌BeWo细胞合体化调控的关键基因。方法：从GEO数据库检索并下载BeWo细胞合体化前后的基因芯片数据集,并利用生物信息学分析方法对所有相关数据集进行综合分析,筛选出差异表达基因并进行GO及KEGG聚类分析,进一步通过PPI蛋白互作网络寻找节点基因,最后利用qRT-PCR验证候选基因在合体化前后的差异表达。结果：从2组数据中共筛选出137个差异表达基因,其中25个差异基因为2组数据集共有,参与细胞迁移、细胞黏附、激素代谢、MAPK信号通路等。进一步借助蛋白质互作网络分析,得到3个候选基因并通过qRT-PCR验证,结果与信息分析结果一致。结论：本研究为滋养细胞合体化研究提供了潜在靶基因,也为解析其分子调控机制提供了线索。     

β-异硫氰酸苯乙酯多靶向抗肿瘤作用机制研究进展

全球癌症的发病率逐年攀升,癌症治疗已成为科学界和医学界的重要研究课题。β-异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)来源于十字花科植物,是广泛被研究的异硫氰酸酯(isothiocyanate,ITC)家族成员之一。越来越多流行病学和病理学研究证实PEITC可以诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡。PEITC通过调节多种分子机制实现其抗肿瘤作用。本文对这些相关文献进行分析整理,对PEITC药物多靶向抗肿瘤作用机制和潜在的分子靶点进行简要综述。     

DNA甲基化数据分析方法和软件应用

目的分析DNA甲基化芯片实验过程质量控制方法、数据统计分析要点及实验结果的验证和数据的可视化处理。方法利用文献、DNA甲基化实验数据探讨DNA甲基化研究中的方法学。结果 DNA甲基化芯片初筛异常过程应多在步骤质量控制工作中,包括DNA片段化、免疫共沉淀阳性对照的选择、去除原始扫描噪音信号和数据均一化处理。DNA甲基化芯片的结果可采用常用的甲基化特异性PCR(MSP)和甲基化测序PCR(BSP),引物设计软件包括Methprimer和Methyl Primer Ex-press。DNA甲基化芯片分析数据的可视软件为Signal map;BSP结果的可视化可采用Windows系统下的执行软件QUMA和BISMA。结论 DNA甲基化研究,应从多角度控制实验的设计和数据的产生及结果的分析。     

应用数码技术提高药用植物学野外实习教学质量

野外实习是中药学专业基础课程药用植物学内容体系中不可或缺的重要一环。药用植物学野外实习时间短内容相对复杂,且在开放的野外教学环境里组织教学难度大。在实际教学中应用数码技术是提高教学质量和丰富教学资源的重要方法。     

药用植物学野外实习教学中存在的问题及对策

药用植物学是一门实践性很强的课程,必须树立实践育人的观念。其实验教学包括课堂实验和野外实习2部分,课堂实验是理论教学的补充,但课堂实验并不能完全解决理论教学难以解决的问题,而野外实习正是课堂实验的一种有效补充,可培养学生严谨的学习态度、独立解决问题能力。它不仅可以帮助学生把理论知识和实际结合起来,学习药用植物野外资源调查的基本技能,还可以激发学生的专业兴趣,提高学生的综合素质。