肝癌靶向基因治疗载体研究进展

<正>目前对于肝癌治疗的研究已经进入分子水平,随着分子生物学的快速发展和基因工程技术的日臻成熟,肝癌的基因治疗已经迅速发展成为继手术切除、放化疗和介入治疗之后一个新的治疗模式。虽然已有许多将目的基因转入活细胞的方法,但仍存在转移效率不高、靶向性不高的问题。因此寻求一种高靶向性、高转染率的方法已成为研究肝癌靶向基因治疗的热点。在肝癌靶向基因治疗过程中,目前常用的治疗基因转移方法主要包括病毒载体和非     

目的基因NCAM1在人神经管缺陷中的差异表达的研究

目的探究NCAM1在人类神经管畸形胚胎中的作用机制。方法提取NTDs组以及同周对照组胚胎脑组织，应用人类基因组U133Plus2．0芯片杂交，比较得出差异表达谱。所有差异表达基因按照功能分类。检测目的基因NCAM1的差异表达，并应用半定量RT—PCR方法以及免疫组化验证其mRNA及蛋白的改变。结果芯片显示出NTDs较正常对照组基因谱有较大的差异改变，总共检测到22209条基因的改变，其中2倍以上增高表达的74条，2倍以上降低表达的387条，分属于物质代谢、基因表达调控、信号转导、凋亡等途径。NCAM1呈21．8倍高表达。RT—PCR以及免疫组化也验证其mRNA及蛋白呈现高表达结果（P〈0．01）。结论人类神经管畸形是不同阶段发展的复杂事件，作为细胞表面粘附分子的NCAM1在神经管畸形的发生发展过程中起了重要的作用。     

靶向药物联合应用对肝癌细胞SK-Hep-1增殖的影响及其机制

目的 探讨靶向药物联合应用对多驱动基因调控增殖的肝癌细胞SK-Hep-1的影响及作用机制。方法 利用对肝癌细胞SK-Hep-1敏感的靶向药物（HG6-64-1、dasatinib、crizotinib、sunitinib）绘制单靶点动力学分析曲线和双相分析曲线,对SK-Hep-1细胞进行动力学分析;Western blot法检测这些靶向药物对SK-Hep-1细胞关键信号通路的影响;MTT法检测这些药物单用和联合应用对SK-Hep-1细胞增殖的影响。结果 与单靶点动力学分析曲线比较,双相分析曲线可更好拟合靶向药物对肝癌细胞SK-Hep-1的影响,并且预测出HG6-64-1、dasatinib和MK-2206三药联合应用能有效抑制SK-Hep-1细胞增殖。结论 双相动力学分析可以更好地定量描述多驱动增殖的肝癌细胞SK-Hep-1对靶向治疗的反应,联合使用HG6-64-1、dasatinib和MK-2206是治疗肝癌潜在的药物组合。     

维生素E对L-NAME致大鼠高血压的影响

目的:观察维生素E对L-NAME所致大鼠高血压模型的降压作用。方法:用L-NAME复制稳定SD大鼠高血压模型。建模成功后,将大鼠随机分为空白对照组、低剂量组(维生素E 400mg.kg-1.d-1)和高剂量组(维生素E 1 200mg.kg-1.d-1)。大鼠每日口服维生素E,每2周以尾动脉测压法测量血压,统计数据采用重复测量的方差分析。结果:L-NAME复制高血压模型稳定可行,服用维生素E后,三组大鼠血压都有下降。下降程度:对照组<低剂量组<高剂量组(P<0.001)。结论:维生素E可降低L-NAME致大鼠高血压模型的血压。     

几种脂质体对Li-7肝癌细胞株的转染效率研究

目的比较Lipofectamine2000、lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体对Li-7肝癌细胞的转染效率。方法构建普通阳离子脂质体lipoplexes和载脂蛋白apoE修饰脂质体apoE-lipoplexes;使用Lipofectamine2000,lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体运载以EGFP为报告基因的pGenesil-1质粒转染Li-7肝癌细胞,通过荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达,流式细胞术检测三种脂质体的转染效率。结果 Lipofectamine2000、lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体转染效率分别为(18.63±0.57)%,(24.07±0.91)%,(28.93±0.50)%,3组间两两比较均有显著性差异(P<0.01)。结论 Li-7肝癌细胞的转染效率与脂质体的结构有关,提示脂质体结构改造可能成为提高转染效率的新策略。     

人胰岛素突变体基因的融合表达

目的　以 pTXB1作为融合表达载体 ,构建人胰岛素突变体 (M insulin)的基因表达克隆 ,表达及纯化。 方法　基因合成胰岛素突变体的cDNA序列 ,酶切后装入融合表达质粒 pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,初步纯化。结果　融合蛋白的分子量约为 330 0 0 ,表达量占菌体总蛋白的 5 0 %以上。融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,洗涤包涵体后融合蛋白的纯度达到 85 %以上。Western blot表明表达蛋白具有胰岛素抗原活性。活性测定显示 ,每升诱导培养后的菌液表达产物中 ,具有的放射免疫活性为 0 .5U。结论　成功地构建了人胰岛素突变体的融合表达体系 ,为进一步的研究奠定了基础。     

构建靶向性载脂蛋白E修饰脂质体介导的HSVtk/丙氧鸟苷系统

背景：自杀基因系统无选择性,不仅能杀伤癌细胞,对正常细胞也有同样作用,所以构建靶向性基因治疗载体成为迫切需要解决的问题。 目的：评价载脂蛋白E修饰脂质体(apoE-lipoplexes)介导TK/丙氧鸟苷自杀基因质粒转染对Li-7肝癌细胞的杀伤效果。 方法：apoE-lipoplexes包裹pAFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒转染Li-7细胞,筛选HSVtk稳定表达细胞克隆(Li-7-tk),荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达,Western blotting检测HSVtk基因表达,MTT法评价HSVtk/丙氧鸟苷系统对Li-7肝癌细胞的杀伤作用。 结果与结论：自杀基因质粒转染Li-7细胞经筛选得到稳定克隆(Li-7-tk),HSVtk/丙氧鸟苷系统作用于Li-7细胞后,细胞凋亡明显增加(P < 0.01)。在甲胎蛋白阳性的Li-7肝癌细胞中,自杀基因载体稳定表达并有效杀灭癌细胞。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

关于生物化学与分子生物学教学改革的实施与思考

生物化学内容涉及面广，理论性和实践性强，教学难度较大。本着边研究、边实践、边提高的原则，从理论教学和实验教学两方面，对教学手段、课程体系、教学内容等方面进行了改革和尝试。理论教学方面，增加了课后串讲，要求学生撰写辅导性论文，开设了专题讨论课，并申报省级精品课程；实验教学方面，设立了生物化学开放实验室，增加了综合性、设计性实验，并在实验内容中加强了分子生物学实验，取得了较好的效果。