链状酰胺类化合物B07的体外杀精效果及其对精子质膜的影响

目的:研究一种链状酰胺类化合物(B07)的体外杀精作用及其对精子质膜的影响。方法:上游收集高活力人类精子分别与0μg/ml(对照组),5~640μg/ml B07作用30 min,随后用计算机辅助精液分析仪分析记录精子的活率及运动参数;用160μg/ml B07与精子作用,记录5 min、30 min、60 min和120 min时精子活动率;处理后的精子一部分经SYBR-14/PI双染后用荧光显微镜观察,另一部分通过电子显微镜来观察质膜的变化情况;并以壬苯醇醚(N9)作为阳性对照。结果:随着B07浓度的升高,精子活率和活力呈下降趋势,最低有效浓度(MEC)为640μg/ml;荧光显微镜下经B07处理的精子呈橙色,而N9处理的精子呈红色;电子显微镜显示B07组精子头部肿胀起泡,尾部针孔样损伤,N9组精子呈溶解性改变。结论:B07具有体外杀精作用,且该作用有时间和浓度依赖性,且其对精子质膜的影响小于N9。     

斑马鱼及其在环境毒理学中的应用

斑马鱼是一种热带淡水鱼,饲养简单,管理方便,易于获取.斑马鱼常年产卵,世代周期短,一般3～4个月就能达到性成熟.其胚胎透明,并且在体外发育,易于观察.长期以来斑马鱼一直被广泛地运用于发育生物学和毒理学的研究中.近年来,众多研究显示了斑马鱼应用于环境毒理学研究中有其独特的优势,并已逐渐成为环境毒理学家们的新宠.利用转基因斑马鱼对污染物进行快速监测已成为目前研究的热点.     

维甲酸诱导SD大鼠胚胎骨骼畸形的图像分析

[目的]运用维甲酸诱导大鼠胚胎畸形模型,探索维甲酸诱导大鼠胚胎畸形的剂量反应关系,为实验动物发育毒理学畸形解剖图像(DevTox)数据库补充大鼠胚胎骨骼畸形图片数据。[方法]将SD大鼠孕鼠随机分为4组,即对照组、50、100、150 mg/kg维甲酸组。各组在孕第10天灌胃给药1次,孕第20天处死孕鼠,取出胚胎,观察记录各组胚胎总数与发育情况。胚胎骨骼经茜素红染色,观察胚胎各部位骨骼畸形及发生率,并在解剖镜下摄取畸形图片。[结果] 50 mg/kg及以上剂量组的维甲酸可诱导SD大鼠胚胎骨骼出现明显的多发性畸形,致畸率可达100%,畸形主要表现为下颌骨缺失、上颌骨与颧弓融合;胸骨节缺失;第10~13节胸椎融合、缺失;腰椎融合、缺失;骨盆带骨骼与尾椎缺失等。维甲酸各组骨骼畸形的表型和畸形发生率呈现出高度的一致性和可重复性,三个剂量组间的胚胎畸形率均为100%,但畸形程度随剂量增高而加重。收集的正常与畸形的图片清晰,无气泡、反光干扰,且分辨率较高。[结论] 50 mg/kg及以上维甲酸在孕第10天灌胃给药,对SD大鼠胚胎骨骼有明显的致畸作用,致畸率高,且畸形类型多样。实验所得骨骼畸形图片可上传DevTox数据库,补充丰富该数据库内容。     

斑马鱼应用于毒理学研究的现况

斑马鱼是一种常见的热带淡水鱼,体型小,世代周期短,繁殖率高,饲养管理廉价方便,饲养成本低。其胚胎透明,且在体外受精和发育。这些生物学特性使其成为了毒理学家们的新宠,目前它已被广泛地用于胚胎发育毒理学、环境毒理学、病理毒理学、药物毒理学等毒理学领域的研究中,并展现出其特有的优势。     

dl-扁桃酸对人精子与阴道黏膜上皮VK2/E6E7细胞的毒性研究

目的探讨dl-扁桃酸对人阴道黏膜上皮细胞(VK2/E6E7)与精子的细胞毒性损伤。方法不同浓度的dl-扁桃酸处理高活力精子20 s,计算机辅助精子分析仪测定精子活率,扫描电子显微镜检测精子受损情况。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸和4.0 g·L?1壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)处理VK2/E6E7细胞,MTT法检测细胞活性,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,并用流式细胞法检测细胞凋亡率。结果 dl-扁桃酸抑制精子活率的半数有效浓度约为1.25 g·L?1,最低有效浓度约为2.5 g·L?1。扫描电镜结果显示,dl-扁桃酸处理组精子表面结构与对照组形态相似,无明显受损特征,N-9组精子严重受损。MTT实验结果表明,1.25 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率>95%,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率约为50%。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组LDH释放量只有微量检出,远低于N-9组。流式细胞检测表明,1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组中活细胞和晚期凋亡比例与对照组相近,早期凋亡细胞略少于对照组,死亡细胞稍多于对照组,N-9组大量细胞死亡。结论 dl-扁桃酸对VK2/E6E7细胞毒性远低于N-9,其对精子的抑制作用不是通过破坏精子质膜与鞭毛来实现。     

实验动物胚胎发育异常图像数据库的国际化合作建设

实验动物胚胎发育异常图像数据库（DevTox数据库）是面向全球的、非盈利性的、开放共享的发育毒理学资源库,配有数千张发育异常的图片、说明、术语和统一分类,极大地促进了发育毒理学研究中形态异常描述术语的统一和规范化。DevTox数据库集合了欧洲、美洲、亚洲发育毒理学界的研究成果,是一项国际化合作建设项目,需要各国科学家的共同努力,将其建设成为最为全面的发育毒理学图像资源库。DevTox数据库中文版已于2016年底正式上线,期待中国科学家为DevTox数据库的更新完善做出贡献。     

邻苯二甲酸二丁酯对F1代测交斑马鱼原始生殖细胞迁移和精巢毒性研究

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate, DBP)诱导雄性生殖功能异常的传代效应。方法对4～5月龄的成年雄性斑马鱼进行连续30 d的DBP的暴露实验,分别设置空白对照组,溶剂(丙酮0.01%)对照组,0.2、0.6和1.8 mg/L DBP暴露组;暴露后的雄性斑马鱼定义为F0代。各组随机选择20条F0代雄鱼与野生型雌性斑马鱼交配产卵(称F1代测交胚胎)进行实验。F1代受精后6、24、48和72 h(hour post fertilization, hpf),用显微镜观察F1代测交胚胎发育形态改变,测定24hpf自主运动次数和72hpf心率。采用胚胎整体原位杂交技术标记原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)迁移;组织病理学检测F1代测交成年斑马鱼精巢特征。结果成年F1代测交雄性斑马鱼精巢发育及功能被抑制,同时存在间质(Leydig)细胞增生与精子数量减少的病理损害特征。DBP(0.6和1.8 mg/L剂量组)暴露后F1代出现小头小眼畸形、弱色素沉着、心包及卵黄囊水肿和脊椎异常等;24hpf自主运动(抽动)减弱,且随DBP浓度增加呈现明显的剂量-效应关系(R~2=0.8929,P0.05);72hpf心率随着DBP暴露浓度增加逐渐降低,呈现明显的剂量-效应关系(R~2=0.8999,P0.05)。胚胎整体原位杂交结果显示, 1.8 mg/L DBP暴露组的F1代测交斑马鱼发育至24hpf时,PGCs分布异常,部分PGCs没有迁移到生殖脊部位。结论 DBP暴露导致成年雄性斑马鱼的生殖异常和胚胎的发育异常可以传递至F1代,可能通过PGCs的迁移异常干扰生殖发育。