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1.
猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的 构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的 蛋白,进行生物学活性检测.方法 提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果 重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的 片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论 成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.  相似文献
2.
肠道病毒71型感染研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3  
陈伟  王明丽 《中国热带医学》2009,9(2):370-372,388
肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)属于小RNA病毒科(Picomaradae)肠道病毒属(Enterovirus),同一属的病毒还有脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒和埃可病毒等。这类病毒通过在人体的消化道组织中侵袭与繁殖,后经过血液循环传播,而最终导致多种临床病征。EV71最初于1969年由Schmidt等从美国加利福尼亚州1名9个月大的脑炎患儿的脑脊液中分离出,1972年定出血清型,并于1974年首次报道。其后,在全世界发现各种各样的临床表现和很多致命性感染与EV71相关。  相似文献
3.
目的分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和透射电镜3种细胞凋亡检测方法的优缺点。方法在已建立的HCMV先天性感染小鼠中枢神经系统模型基础上,选用鼠龄为24个月模型鼠进行试验。试验分为3组(每组6只)HCMV先天性潜伏感染老年小鼠组(A组)、HCMV先天性潜伏再激活感染老年小鼠组(B组)和正常对照老年小鼠组(C组)。采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况,采用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化。结果TUNEL法和流式细胞术检测发现C组凋亡细胞最少,A组凋亡细胞比率较C组有所升高,而B组凋亡细胞最多;检测结果经T检验分析发现A组、B组与C组各组间凋亡率差异均有显著性。透射电镜检测发现,同C组比较,A组和B组部分神经元细胞核染色体固缩,核物质碎片化,凋亡小体形成等特征性凋亡改变。结论HCMV先天性感染可致老年小鼠大脑皮质细胞凋亡。TUNEL法和流式细胞术可用于凋亡的定量检测,但TUNEL法易受主观因素的影响,而透射电镜是凋亡定性检测的可靠方法。  相似文献
4.
运用试卷分析加强医学微生物学题库建设的初探   总被引:2,自引:1,他引:1  
为了评估自建医学微生物学题库质量,运用现代考试分析方法对本校2006级临床医学专业医学微生物学考试成绩进行分析,结果表明题库试卷组成和信度均较好,建立了初步的题库质量评估体系,为改进教学质量和完善题库提供了参考.  相似文献
5.
核黄素光化学法灭活红细胞悬液巨细胞病毒的初步探讨   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的探讨核黄素光化学法对红细胞悬液中病毒灭活效果。方法以人巨细胞病毒(HCMV)作为指示病毒,在红细胞悬液中分别加入不同浓度的核黄素,结合照度为40000 Lux的可见光(λ(600nm),处理后加入单层人胚成纤维细胞(HF)中培养,观察细胞病变效应并测定病毒滴度,用PCR检测病毒核酸的变化。结果红细胞悬液中的核黄素浓度为50、100、150、200μmol/L时,结合照度为40000 Lux的可见光分别照射40、30、20、20min时,可将滴度为7.65log TCID50的HCMV灭活至<0.50log TCID50;PCR法未能检测出病毒核酸。结论核黄素光化学法能有效灭活红细胞悬液中的HCMV。  相似文献
6.
核黄素光化学法灭活单采血小板细菌的效果评价   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的探讨核黄素光化学法灭活单采血小板细菌的效果及血小板一系列生化和生理学指标的改变。方法将28ml浓度为500μmol/L核黄素加到250ml的单采血小板悬液中,再将一定浓度的G 菌(表皮葡萄球菌ATCC12228)和G-菌(大肠埃希菌ATCC25922)分别注入上述混悬液中,经265~370nm广谱紫外光6.2J/ml照射8~10min后,测定其浓度,并检测血小板体外参数的变化情况。结果经浓度50μmol/L的核黄素结合强度为6.2J/ml紫外光照射8~10min,可将一定浓度的模型菌灭活至<1.22logCFU/ml。结论核黄素结合紫外光照射可以有效灭活细菌,而单采血小板的各项生化、生理学指标和阴性对照比较均差异无显著性。  相似文献
7.
双黄连抗柯萨奇B3型病毒感染大鼠原代心肌细胞的效应   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的观察双黄连抗柯萨奇B3病毒感染原代大鼠心肌细胞的作用,并初步探讨其机制.方法选用出生1~3天的Sprague-Dawley大鼠,取其心室肌组织,制备原代大鼠心肌细胞,培养72 h后,用不同浓度的双黄连对抗100TCID50柯萨奇B3型病毒感染细胞,观察细胞病变,测定感染36 h后细胞上清液中的病毒滴度及肌酸磷酸激酶.结果 0.5、 0.25、0.125 g/L双黄连均可明显减轻心肌细胞病变,降低细胞上清液的病毒滴度, 减少感染心肌细胞肌酸磷酸激酶的释放(分别和病毒对照组相比,P<0.01).结论双黄连对柯萨奇病毒感染的新生大鼠原代心肌细胞有保护作用.  相似文献
8.
临终关怀的发展形式   总被引:1,自引:0,他引:1  
临终关怀是近代医学领域中新兴的一门边缘性交叉学科,是社会的需求和人类文明发展的标志。从其内容和形式上看,其发展主要经历了三种方式即家庭关怀、宗教关怀及现代的社会关怀。  相似文献
9.
目的 在人巨细胞病毒(HCMV) 感染的BALB/c小鼠模型基础上,研究小鼠细胞免疫应答状态.方法 建立先天性潜伏感染的老龄小鼠(平均月龄≥18个月)模型,分别为HCMV先天性潜伏感染组(A)、先天性潜伏感染再激活组(B)及正常对照组(C),每组小鼠数均为6只.分别取各组小鼠外周血白细胞进行病毒分离、PCR和RT-PCR检测HCMV UL83基因DNA和相应mRNA来验证模型小鼠感染状态.采用流式细胞术对小鼠外周血T细胞亚群进行检测.结果 A组和B组小鼠病毒分离出HCMV,C组为阴性.A组小鼠可以用PCR检测出HCMV UL83 DNA,但RT-PCR检测不出相应的mRNA;B组小鼠用PCR、RT-PCR均可检测出相应产物;而C组均为阴性.A、B、C三组小鼠外周血中CD3+细胞构成比值分别为0.3305、0.0658和0.4318,组间差异有显著性(P<0.01);A、B、C三组中CD4+细胞的构成比值依次为0.6608、0.5998、0.6578,B组与A组及C组差异均有显著性(P<0.01),而在A组和C组间差异无显著意义(P>0.05);CD8+细胞比在A、B、C三组中的构成比值依次为0.2327、0.1150、0.1862,组间差异均有显著性(P<0.01);CD4+CD8+细胞在A、B、C三组中的比值依次为0.0990、0.1682、0.1192,组间差异有显著性(P<0.05).结论 HCMV先天性潜伏感染及 HCMV先天性潜伏感染再激活均可使老龄小鼠的细胞免疫功能降低,尤以后者显著.表明HCMV对先天性潜伏感染再激活老龄小鼠的细胞免疫状态有明显的抑制作用.  相似文献
10.
目的 体外诱导人外周血单个核细胞成为破骨样细胞.方法 从人外周血以密度梯度离心法分离出单个核细胞贴壁培养后分为3组.A组:使用核因子NF-κB受体激活剂配体(RANKL)联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)进行诱导;B组:仅使用M-CSF进行诱导;C组:仅使用RANKL进行诱导.14 d后使用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法以及扫描电镜观察骨片以鉴定细胞是否具有破骨细胞的特征.结果 A组14 d时出现较多的多核TRAP染色阳性的细胞,数量为(476±47)个,较B组(54±18)个明显增加(P<0.05),C组不能诱导出TRAP染色阳性细胞.A组诱导生成的细胞具有在骨片上形成骨吸收陷窝的能力,B组骨片上均没有发现明显的骨吸收陷窝.结论 从人外周血单个核细胞中可以诱导出破骨样细胞,RANKL和M-CSF是诱导过程中所需要的两个重要因子.  相似文献
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