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1.
目的 探讨姜黄素(CCM)联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌BIU-87细胞中YAP、TEAD1表达及凋亡的作用.方法 CCM和HCPT分别单独与联合用药处理膀胱癌BIU-87细胞.免疫组织化学检测膀胱癌组织及癌旁组织中YAP和TEAD1表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western blot检测YAP及TEAD1基因的mRNA和蛋白的表达变化.结果 YAP和TEAD在膀胱癌组织及癌旁组织中均有阳性表达,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示CCM和HCPT均可有效诱导膀胱癌细胞BIU-87的凋亡.CCM组和HCPT组BIU-87细胞中YAP及TEAD1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),联合用药组YAP及TEAD1 mRNA和蛋白表达更低(P<0.05).结论 CCM和HCPT联合用药抗癌机制可能是通过抑制Hippo信号通路中YAP癌基因表达,下调TEAD1,并诱导膀胱癌细胞凋亡产生.  相似文献
2.
机能实验学在基础理论与临床实践之间起着重要的衔接作用,为培养高素质医学人才,各医学院校改进了机能实验教学方法,取得一定效果,但仍缺乏全面综合的考核体系。我校根据机能实验学教学基本要求,以2010级临床医学学生为考核对象,设计考核方法,制订考核内容及标准,采用平时成绩、技能操作考核、笔试并结合实验竞赛对学生进行综合评价。实践表明,该考核体系对提高实验教学质量、培养学生实践能力和综合素质具有一定意义。  相似文献
3.
目的:探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法:用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况;构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞。RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-O细胞前后 YAP mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期的变化。结果:786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核;shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4 d后,可明显下调786-O细胞YAP mRNA及蛋白表达水平(P=0.000),并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡(P=0.000);细胞周期紊乱,G1 期细胞明显增加,S期细胞明显降低(P=0.000)。结论:YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。  相似文献
4.
目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光(immunofluorescence,IF)表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phos-phatase,PAP)蛋白情况。结果:FCM检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后PAP分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;IF检测CD133+/CD44+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133+/CD44+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0,P=0.008)以及高于诱导后的CD133+/CD44+细胞(t=40.1,P=0.001);CD133+/CD44+细胞经过转化生长因子-β诱导后IHC和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133+/CD44+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133+/CD44+细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。  相似文献
5.
【摘要】 目的:通过磁珠细胞分选(Magnetic bead cell sorting, MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133 /CD44 干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化和Western blot检测诱导分化前后PAP蛋白情况。结果:流式细胞术检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33?0.05)%和(0.87?0.06)%,而MACS分选后分别为(84.82?0.07)%和(99.91?0.03)%;免疫荧光检测CD133 /CD44 细胞培养后继续呈阳性表达;CD133 /CD44 细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0, P=0.008)以及高于诱导后的CD133 /CD44 细胞(t=40.1, P=0.001);CD133 /CD44 细胞经过TGF-β诱导后免疫组化和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133 /CD44 细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133 /CD44 细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。  相似文献
6.
目的:探讨慢病毒介导sh RNA沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞增殖、凋亡及其雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响。方法:3条针对YAP基因的sh RNA慢病毒干扰载体感染LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系,real-time PCR、Western blot分别检测感染后各组细胞YAP、AR m RNA和蛋白水平;选取沉默效果最佳sh RNA慢病毒干扰载体组,以细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成实验(colony formation)检测LNCa P细胞增殖能力;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测LNCa P细胞凋亡改变。结果:重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后感染效率达95%以上,获得稳定沉默YAP基因LNCa P细胞系。与空白对照组和阴性对照组比较,感染sh RNA慢病毒干扰载体各组中YAP、AR m RNA及蛋白表达水平明显下调(P=0.000),细胞增殖受到明显抑制(P=0.000),细胞凋亡明显增加(P=0.000)。结论:慢病毒介导sh RNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCa P细胞中表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节。  相似文献
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