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1.
生物化学实验教学改革初探   总被引:5,自引:3,他引:2  
对近年来国内生物化学实验教学改革的现状进行了回顾,并以此为基础,结合生物化学实验教学中存在的问题,对生物化学实验教学的内容、实验考核办法等进行了初步改革和小范围试点,取得了良好的效果,为进一步建立更为完善的面向21世纪的医学生物化学实验教学新体系奠定了良好的基础。  相似文献
2.
目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。  相似文献
3.
为了对硒抗肿瘤作用途径进行探索,在给稳定性亚硒酸钠2μgSe/g体重的抑瘤剂量时,对接种艾氏腹水实体瘤小鼠的~(75)Se(亚硒酸钠)组织分布进行了观察  相似文献
4.
肝性昏迷是肝功能衰竭时出现的严重中枢神经系统功能紊乱,是临床上的危重症,常导致死亡。有必要对肝性昏迷的发病机理进行深入的研究,以便找到使病人度过昏迷期而恢复的方法。就已积累的资料看,肝昏迷的确切发病机理仍是一个有待阐明的问题,但现有肝昏迷发病机理的假说约有以下几种:(一)肝昏迷是肝功能衰竭时体内集蓄的毒物的协同作用和逐渐加重的代谢紊乱的结果。所谓毒物包括氨,巯基化合物,短链脂肪酸以及酚等。它们的协同作用能引起实验动物的昏迷,但缺少神经生物学上的说明。(二)假递质和氨基酸不平衡假说。血  相似文献
5.
1969年Heubner和Todaro提出了癌基因的假说.1970年mantin首先观察到癌基因的作用.癌基因是能转化正常细胞而诱发肿瘤的病毒或肿瘤细胞的DNA.在正常动物细胞中存在着癌基因的付本,即原癌基因.在适当的条件下原癌基因被激活、导致出现某些与肿瘤细胞有关的表型,引起肿瘤.八十年代另一类与肿瘤有关的基因已被发现,它们的产物有控制细胞增殖的功能.失去这类基因的功能可能和正常细胞  相似文献
6.
7.
目的 构建靶向GW112 siRNA逆转录病毒载体并筛选特异高效的RNAi靶点,研究GW112基因沉默后对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响.方法 应用逆转录病毒载体psilencer 5.1-H1 Retro 构建针对GW112基因3个不同靶点的RNAi干扰载体-pSiRNA-GW112 (pSi405-GW112, pSi1066-GW112, pSi1480-GW112),将脂质体法转染PT67细胞包装的病毒感染SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳定克隆,RT-PCR鉴定病毒整合,Real-time PCR筛选高效抑制靶点,CCK-8法检测对细胞体外增殖的影响.Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 测序结果证实各干扰靶点的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112构建正确.RT-PCR结果显示除亲本细胞外,经各靶点病毒上清感染的细胞均能扩增出510 bp的Puro抗性基因片段.Real-Time PCR分析表明与SGC-7901亲本细胞组相比,7901-Si405,7901-Si1066及7901-Si1480组GW112的转录水平分别只有SGC-7901组的(15.50±0.01)%,(32.40±0.01)% 与(57.00±0.02)%.而7901-Sc组GW112表达基本无变化.Si405, Si1066与 Si1480 靶点的抑制率分别为84.5%,67.6%及43.0%.沉默GW112后导致SGC-7901细胞体外增殖能力显著抑制(P<0.05),并伴随PCNA蛋白表达下调.结论 构建的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112能显著抑制SGC-7901细胞的体外增殖能力,且这种增殖抑制与下调的PCNA表达有关.  相似文献
8.
目的 克隆人组蛋白乙酰基转移酶TIP60β基因,应用酵母双杂交技术研究筛选与TIP60β发生相互作用的蛋白.方法 运用RT-PCR 方法从人脑组织克隆TIP60β cDNA,构建酵母双杂交BD诱饵载体pGBKT7- TIP60β,以其为诱饵从成人肝cDNA文库中筛选与之相互作用的阳性克隆,并对阳性克隆进行序列测定和相关生物学分析.结果 诱饵载体pGBKT7-TIP60β经双酶切可释放出1 443 bp DNA片段,与理论值大小一致,测序比对分析表明序列正确.以其为诱饵经酵母双杂交筛选共获得32个克隆,进一步验证与测序分析,最终确认HDAC7A、DMD2、CREB1、BD73、PHF17、AR等 9个克隆基因. 结论 以TIP60β为诱饵利用酵母双杂交系统获得9个基因编码的蛋白,它们很可能与TIP60β转录活性调节功能有关.  相似文献
9.
目的 构建人GW112基因的逆转录病毒载体,并通过病毒介导其在人胃癌SGC-7901细胞的稳定表达.方法 采用DNA 重组技术构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-GW112;以脂质体PT67细胞包装病毒,经病毒感染的SGC-7901细胞通过G418筛选及荧光定量 PCR 鉴定,建立GW112稳定过表达SGC-7901细胞株.结果 成功构建了pLEGFP-N1-GW112逆转录病毒表达载体,经病毒包装的重组转录病毒成功感染SGC-7901细胞,Real-Time PCR结果显示实验组中GW112基因是对照组细胞中的4.2倍.结论 逆转录病毒介导的GW112基因在胃癌SGC-7901细胞获得了稳定过表达,为进一步研究GW112在胃癌中的功能奠定了良好基础.  相似文献
10.
目的:克隆人ICAT的cDNA,在肿瘤细胞中表达,了解其对肿瘤细胞的抑制作用.方法:RT-PCR获得ICAT的cDNA,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ICAT,脂质体法转染MCF-7和MDA-MB231乳腺癌细胞,MTT法检测肿瘤细胞的增殖情况.结果:RT-PCR产物大小约为260bp.测序结果与文献报道一致.pcDNA3.1-ICAT转染MCF-7和MDA-MB231肿瘤细胞的效率约为26%,肿瘤细胞增殖的抑制率为18.1%和16.2%.结论:克隆了人ICAT并构建其真核表达质粒,转染肿瘤细胞后对其增殖有一定的抑制作用.  相似文献
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