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1.
RT—PCR,ELISA和IFA技术应用于汉坦病毒检测的比较   总被引:5,自引:0,他引:5  
作报道反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),双单克隆抗体(McAb)夹心法酶联免疫吸附试验(Sandwich ELISA)和间接免疫荧光技术(IFA)三种方法对汉坦病毒76 ̄118株细胞培养物中病毒RNA及抗原的检测情况,并比较了三种方法的敏感性。结果表明:RT-PCR敏感性最高,种毒后24h内即可检出病毒RNA;其次为夹心法ELISA,种毒后48h可检出冻融细胞上清内的病毒抗原;IFA检出感染  相似文献
2.
人白细胞介素-18真核表达载体的构建及测序分析   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的:构建含有人白细胞介素—18(IL-18)基因的真核表达载体,并对其进行测序分析。方法:通过分子克隆技术,将IL-18基因插入真核表达载体pVAX1中,构建真核表达载体pVAXl—IL—18,并经BamHI/EcoRI双酶切及测序鉴定。利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中与重组质粒(pVAX1—IL—18)中编码IL-18基因同源的序列。结果:人IL—18基因成功地克隆至真核表达载体pVAX1中,pVAX1—IL—18中编码IL—18的序列与GenBank中所报道的IL-18编码序列完全—致。结论:成功地构建人IL—18基因真核表达载体,为其作为核酸疫苗的细胞因子佐剂奠定了基础。  相似文献
3.
人α防御素的稳定表达和活性鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHO-dhfr-,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩增, ELISA法、RT-PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果: α防御素1的表达量是18.85~47.46 mg/L*48 h*106个细胞; α防御素3的表达量是16.89~35.57 mg/L*48h*106 个细胞.用RT-PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303 bp的片段;IFA 显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K-B纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上形成了明显的抑菌圈.结论: 成功高效地表达了分泌型的α防御素1,3,并具有良好的生物学活性,为进一步探讨α防御素1,3对HIV-1的抑制作用提供了物质基础.  相似文献
4.
人中性粒细胞多肽1,3真核表达载体的构建与鉴定   总被引:3,自引:3,他引:0  
目的:扩增人中性粒细胞多肽1,3(HNP1,3)基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/HNP1,3。方法:从健康人中性粒细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出HNP1,3基因完整的cDNA片段,应用TA克隆插入pMD18-T载体,经酶切鉴定及序列分析确证后,将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中。结果:从人中性粒细胞中克隆出人HNPl1,3基因,经测序分析与GenBank公布的人HNP1,3核苷酸序列同源性为100%,成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/HNP1,3。结论:真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/HNP1,3的成功构建,为后续重组基因的真核/表达及其对HIV-1抑制作用的研究奠定了实验基础。  相似文献
5.
MAP30 抗乙型肝炎病毒的体外实验   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 :探讨MAP30 (momordicaanti HIV proteinof30ku)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用 .方法 :以HBVDNA转染的人肝癌细胞株 (HepG2 .2 .15 )为靶细胞 ,与MAP30共同温育 10d ,观察对细胞的毒性 ;用ELISA、荧光定量PCR和Southern印迹法分别检测培养上清中HBsAg ,HBVDNA和细胞内HBVDNA .结果 :MAP30能显著减少HepG2 .2 .15细胞培养上清液中HBsAg ,HBVDNA的分泌 ,在第 8日时 ,对HBsAg抑制率为 5 0 .4 9% ,HBVDNA定量 <1× 10 7拷贝·mL-1;Southern印迹法显示MAP30能抑制HBV复制中间体及共价环状闭合DNA .MAP30未发现对细胞有毒性作用 .结论 :MAP30具有较强的体外抗HBV作用 ,作为新的抗病毒植物蛋白 ,具有其临床应用价值  相似文献
6.
植物蛋白MAP30等药物抗HBV的体外实验   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 :体外观察植物蛋白MAP30 (Momordicaanti HIVproteinof 30ku)、α 干扰素 (α IFN)、无环鸟苷 (ACV)及叠氮胸苷 (AZT)的抗HBV作用 .方法 :以HepG2 .2 .15细胞为靶细胞 ,实验共进行 9d .采用ELISA法及荧光定量PCR法 ,测定药物对细胞培养上清HBsAg ,HBeAg及细胞内外HBVDNA的抑制作用 .结果 :MAP30具有明显抗HBV的作用 ,其抑制HBsAg,HBeAg及细胞内外HBVDNA的 5 0 %抑制浓度 (IC50 )分别为 0 .8,0 .6 ,0 .6及 0 .5 μmol·L-1,治疗指数 (TI) >4~ 7.α IFN也有抑制HBV的作用 ,但抑制作用较弱 ,而ACV及AZT对HBV无抑制作用 .结论 :抗HIV植物蛋白MAP30具有体外抑制HBV的作用  相似文献
7.
抗HIV植物蛋白MAP30等药物的体外抗单纯疱疹病毒作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 :研究抗人类免疫缺陷病毒 (HIV)植物蛋白MAP30、无环鸟苷 (ACV)、α 干扰素 (IFN α)及叠氮胸苷(AZT)等药物对单纯疱疹病毒 (HSV)的体外抑制作用。 方法 :以Vero细胞为靶细胞 ,观察药物作用 4 8h后对HSV致细胞病变的抑制作用 ,并采用ELISA法测定药物对培养上清HSV 1和HSV 2抗原分泌的抑制作用。 结果 :MAP30和ACV均可使HSV的致细胞病变效应减轻。MAP30对HSV 1和HSV 2抗原分泌的 5 0 %抑制浓度 (IC50 )分别是 0 .5 μmol L和 0 .4 μmol L ,ACV分别是 2 .8μmol L和 2 .2 μmol L ,而IFN α和AZT对HSV无明显抑制作用。 结论 :MAP30除具有抗HIV活性外 ,还具有抗HSV的作用。  相似文献
8.
教育国际化背景下的传染病学教育   总被引:2,自引:0,他引:2  
传染病学教育国际化已成为传染性疾病防控全球化发展的必然要求。面对新的形势,军队传染病学教育要立足军事医学发展,结合战时和平时传染病防控、救治需要,从本土重大传染病防治和教育出发,以核心传染病专科建设为载体,以培养适应国际化发展的传染病学专门人才为目标,坚持不懈走传染病学教育国际化发展道路。  相似文献
9.
目的:探讨中国人群人类免疫缺陷病毒-1B(HIV-1B亚型)Nef蛋白特异性CD8^+T细胞应答在B、C亚型间的交叉反应性。方法:选取51例HIV-1B亚型感染者,采取外周血单个核细胞(PBMC),用合成的54个HIV-1B、C亚型Nef全基因序列肽库作为抗原,酶联免疫斑点吸附试验(ELISpot)方法检测HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^+T细胞对B、C亚型抗原的应答反应。结果:在产生特异性应答效应的个体中,82.9%(29/35)感染个体同时识别B和C亚型肽段。感染个体在对两个亚型肽段的识别数量及应答强度上无显著差异(P=0.529和P=0.754)。HIV-1B亚型特异性CD8^+T细胞能针对70.4%无论B还是C亚型的Nef肽段产生应答反应。被特异性CD8^+T细胞同时识别的B、C亚型Nef肽段间氨基酸序列的同源性显著高于仅能被识别的B亚型或C亚型肽段的氨基酸序列(P=0.01)。结论:HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^+T细胞应答在B、C亚型间具有良好的交叉反应性,能产生交叉反应的氨基酸序列具有较高的亚型间同源性。  相似文献
10.
经口痰定量培养对确定下呼吸道感染病原菌的临床意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 :了解经口定量痰培养对确定下呼吸道感染病原菌临床意义的大小。方法 :回顾性调查了 12 5例“下呼吸道感染”的住院病人。结果 :致病菌阳性率 32 8% ,G-杆菌占 85 4 % ,肺炎双球菌仅占 7 3%。结论 :提示 :痰培养结果除了受细菌学的变迁影响外 ,还受其他许多客观因素的影响。因此 ,其对临床指导的可靠性、准确性亦受到影响。所以 ,有必要寻求和开展其它更准确、更可靠的方法 ,来指导临床治疗  相似文献
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