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1.
目的:构建含鼠疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)胞外区和IgG2a Fc段重组表达质粒,真核表达HVEM-Ig融合蛋白,鉴定、纯化,并检测其生物学活性。方法:通过RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞总RNA中扩增HVEM胞外区片段,WT-1杂交瘤细胞总RNA中扩增鼠IgG2a Fc片段,克隆入真核分泌型表达载体pSecTag2A,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),表达产物用rProtein A凝胶进行亲和层析纯化,获得目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western印迹分析。在单向混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的HVEM-Ig融合蛋白作为处理组,同时以加入IgG蛋白的作为阴性对照和未处理的混合淋巴细胞作为空白对照,分别采用\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法观察淋巴细胞增殖程度和细胞因子分泌情况。结果:成功构建重组质粒pSecTag2A-HVEM-Ig,表达及纯化HVEM-Ig融合蛋白,并对蛋白的理化性质进行了鉴定。\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法结果显示:与对照组相比,该融合蛋白呈剂量依赖性抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建了HVEM-Ig融合蛋白真核表达体系,融合蛋白具有预期的抑制淋巴细胞活性及细胞因子分泌的功能,为后续研究该分子在自身免疫和移植免疫反应中的机制奠定了基础。  相似文献
2.
目的 探讨干、湿化学法两种生化分析系统检测结果的比对和修正方法, 使不同分析系统检测结果具有可比性。 方法 比对方法学参照EP9-A2文件, 并对数据进行偏倚分析, 计算修正参数, 重新设置实验检测系统后再做简单比对, 验证修正方案的可行性。 结果 10个比对项目中, 4个项目的结果比对偏倚超出规定误差范围, 以回归分析所获得的修正参数对干化学检测数据进行调整后, 新获得数据与对比仪器原始数据结果再次比对, 偏差落在规定误差范围内;以此修正系数进行仪器设定后进行简单比对, 结果可接受。 结论 不同原理检测系统参照本方案进行修正后, 仪器间的检测结果获得了可比性, 有利于临床工作中同一项目急诊(多为干化学法)与非急诊(多为湿化学法)检测结果之间变化的直接观察和分析。  相似文献
3.
目的分析人源可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)与鼠源不成熟树突状细胞(DCs)是否发生特异性结合及其一般生物学特性。方法通过流式细胞术结合特异性抗体检测了解ICOSIg与不成熟DCs的结合作用;以AnnexinⅤ/PI双染色、活细胞染料CSFE和CCK-8研究ICOSIg对DCs的细胞毒性作用;以[3 H]掺入法研究ICOSIg对于混合淋巴细胞反应的阻断作用。结果 ICOSIg可结合小鼠DCs表面的ICOSL,ICOSIg不引起DCs早期和晚期凋亡,不影响DCs细胞的增殖,可以抑制不同基因小鼠脾细胞的混合淋巴细胞反应。结论本实验室构建的体外表达的ICOSIg具有较强的生物学活性,对鼠DCs无明显的生物学毒性作用,首次从实验角度证实人源ICOSIg可以特异性结合小鼠不成熟DCs表面配体ICOSL,可以用于进一步探讨ICOSL/ICOS共刺激通路的免疫作用。  相似文献
4.
医学领域的快速发展对医学教育提出了更高的要求.获取更多、更新、更有价值的医学相关教学素材,对于丰富授课形式、提高教学效果、介绍最新研究成果具有重要的意义.文章结合细菌形态学备课过程,介绍利用互联网搜索引擎荻取更好的多样化教学素材,充实多媒体教学课件,提高教学授课效果的个人体会,供读者参考.  相似文献
5.
目的 探讨布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton,s tyrosine kinase,BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)和AVL-292单药及联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞系H929和RPMI8226的作用及其机制.方法 用不同浓度的依鲁替尼、AVL-292单药以及联合硼替佐米处理H929、RPMI8226细胞.采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测药物处理前后细胞内BTK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 依鲁替尼和AVL-292均可抑制H929、RPMI8226细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性,依鲁替尼对H929、RPMI8226细胞48 h的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)分别为(10.41±3.29) μmol/L和(51.65±13.58) μmol/L,AVL-292对H929、RPMI8226细胞48 h的IC50分别为(7.77±2.99) μmol/L和(6.44±1.06) μmol/L.不同浓度的依鲁替尼(5、10 μmol/L)和AVL-292(5、10 μmol/L)分别与不同浓度的硼替佐米(5、10、20、50 nmol/L)联合应用对H929、RPMI8226细胞增殖的抑制率均高于相应浓度单药组(P<0.05,P<0.01),不同组合的协同系数R均>1.0.10 μmol/L依鲁替尼、10 μmol/L AVL-292和20 nmol/L硼替佐米单独作用48 h后,H929细胞的凋亡率分别为(15.12±1.59)%、(18.23±6.38)%和(10.71±1.62)%,均高于对照组[(6.46±1.18)%;P<0.05,P<0.01];RPMI8226细胞的凋亡率分别为(9.29±1.44)%、(15.01±4.99)%和(7.58±1.13)%,10 μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292单药组与对照组[(5.54±1.61)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05);10μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292分别与20 nmol/L硼替佐米联合后,H929细胞凋亡率分别为(40.31±3.94)%和(51.55±6.39)%,RPMI8226细胞凋亡率分别为(31.86±1.93)%和(43.23±4.03)%,均高于相应单药组(P<0.01).10 μmol/L依鲁替尼单药和10 μmol/L AVL-292单药作用24 h后,H929细胞内BTK、NF-κB p65、Akt和ERK的磷酸化水平及Bcl-XL蛋白表达水平均较对照组降低(P<0.05),cleaved caspase-3表达水平均较对照组升高(P<0.01);两药分别联合20 nmol/L硼替佐米后,对上述蛋白的调节作用均较相应单药组增强(P<0.05,P<0.01).结论 BTK抑制剂依鲁替尼和AVL-292对多发性骨髓瘤细胞系H929、RPMI8226有增殖抑制和凋亡诱导作用,并与蛋白酶体抑制剂硼替佐米有协同作用,其机制可能与抑制细胞内BTK活性及下游NF-κB、Akt、ERK信号通路活性,下调抗凋亡蛋白Bcl-xL表达、激活caspase-3依赖的凋亡途径有关.  相似文献
6.
1病例资料女性,41岁,因“乏力20余天,头晕、头痛6d”于2015年6月11日入院.患者入院时无发热、咳嗽、腹痛、腹泻,无呕血黑便.体格检查示重度贫血貌,口唇、甲床苍白.全身皮肤黏膜无黄染,双下肢可见散在瘀斑.全身淋巴结无肿大,胸骨中下段压痛,肝脾肋下未触及.血常规:白细胞43.27×109/L,分类淋巴细胞占46%、中性粒细胞占2%,异常细胞占50%,血小板28×109/L,血红蛋白53 g/L.提示恶性血液病可能,于2015年6月11日在第二军医大学长海医院行骨髓穿刺检查.  相似文献
7.
8.
医学微生物学检验是一门医学基础课,实验性和应用性很强,学生的实习质量决定了整个教学质量.通过提高带教老师自身技术、技能;注重基本技能带教;结合临床开展科研,并通过科研实验促进学生实习热情,提高实习效果等措施,为培养合格的临床微生物检验人员贡献力量.  相似文献
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