“双一流”建设背景下地方高校研究生培养模式探索

一流的研究生教育是“双一流”建设的重要基础。从健全导师责权机制、深化课程体系改革、强化共享平台建设、完善培养质量评价机制等方面，探讨我校在“双一流”建设中研究生教育改革与创新的具体举措，展示了研究生培养模式改革的初步成效，为地方高校推进“双一流”建设提供有益借鉴。     

金黄色葡萄球菌脑膜炎误诊一例

【病例】女，6岁。因发热、咳嗽10天伴嗜睡1天入院。10天前因受凉后发热，体温39．5℃，无寒战及抽搐，伴咳嗽、无痰，有时夜间盗汗，在院外输液治疗数日(具体用药不详)，体温无变化．1天前出现嗜睡。查体：体温39℃．脉搏120／min，呼吸32／min。体重16kg，体型消瘦。呼吸平稳，嗜睡状态，颈抵抗( )．双肺听诊呼吸音粗，未闻及干湿性啰音，心脏听诊未闻及     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5生物学特性初步研究

目的 分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨其生物学特征.方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建pORF5原核表达重组体并诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性;分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布及表达模式特征.采用ELISA分析pORF5质粒蛋白在自然感染状态下的表达情况及免疫原性.结果 pORF5主要分布于宿主细胞质,但也少量分布在原体(EB)和网状体(RB)上,在细胞质中的分布模式与衣原体分泌蛋白酶样活性因子(CPAF)基本相似,激光共聚焦结果显示两者并不重叠;pORF5能与Ct生殖道感染患者血清发生强烈的免疫应答.结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性;在自然感染状态下,pORF5质粒蛋白基因被激活产生内源性靶蛋白.

Abstract：

Objective To localize and characterize the plasmid protein pORF5 in the Chlamydia trachomatis(Ct) infected cells. Methods The open reading frame encoding for pORF5 protein from the Ct plasmid was amplified and cloned into the pGEX-6p vector. The recombinant plasmid pGEX-pORF5 was transformed into XL1-blue E. coli to express fusion protein with the glutathione-s-transferase (GST). After purified with Glutathione Sepharose 4B beads, the pORF5 fusion protein was used to immunize mice to make monoclonal and polyclonal antibody. The antibodies were used to localize the endogenous pORF5 protein and detect the expression pattern in Chlamydia-infected cells using an indirect immunofluorescence assay (IFA). At the same time, ELISA was used to determine whether pORF5 plasmid protein was expressed and immunogenic during Ct infection in humans. Results pORF5 was detected a dominant signal in the cytosol of the Chlamydia-infected cells with a pattern similar to that of anti-CPAF. pORF5 also appeared in the RBs and EBs in small quantity. Athough pattern was similarly, pORF5 did not overlap with CPAF. pORF5 protein was strongly recognized antiserum in an ELISA. Conclusion The pORF5 plasmid protein was identified as a secreted protein with good immunogenicity, pORF5 gene was to express the endogenous target protein during human infection.     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.     

质粒蛋白pORF5在沙眼衣原体感染细胞中的定位及免疫原性研究(英文)

目的分析沙眼衣原体隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨免疫原性特征。方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体转化大肠杆菌XL1-blue中诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性,并分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布特征。采用ELISA方法分析pORF5质粒蛋白的免疫原性。结果 pORF5原核表达重组体成功构建,融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达;pORF5主要分布于宿主细胞胞浆,但也少量分布在EB、RB上;pORF5能与衣原体患者血清及鼠免疫血清发生强烈地免疫反应。结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性。     

STD患者性病病原体感染状况的调查研究

用聚合酶链反应及培养法对３４０例性病门诊患者进行了淋球菌（Ｇｃ）、衣原体（Ｃt） 、解脲支原体（Ｕu）、人型支原体（Ｍh）、乳头状瘤病毒（Ｈｐｖ）等５种常见病原体的检测。结果明显：单纯性感染中Ｃｃ、Ｃｔ、Ｕｕ、Ｍｈ、Ｈｐｖ分别为１５．８８％、７．３５％、１７．９４％、５．５９％、４．４１％，Ｕu检出率最高；多种病原体混合感 染分别为５．５８％、４．４１％、１．１８％、２．０６％、１．７６％、２０．２９％     

SiO2-Pickering乳液佐剂增强沙眼衣原体Pgp3蛋白免疫效果

目的优化二氧化硅(SiO₂)Pickering(SPE)乳液佐剂,研究其对沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的免疫增强效应,为预防Ct感染性疾病提供实验依据。 方法优化SiO₂质量浓度、水油比及超声功率,超声乳化制备SPE佐剂。30只小鼠均分为SPE+Pgp3组(Pgp3蛋白和SPE混合免疫)、Pgp3组(Pgp3蛋白单独免疫)和PBS组。ELISA检测各组小鼠血清抗体水平和脾细胞上清细胞因子水平,流式细胞术检测脾细胞γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。 结果SPE最优制备条件为超声功率337 W、水油比10∶2、SiO₂质量浓度1 g/L,最优条件下SPE直径为(300.12±44.26) nm,聚合物分散性指数为0.33±0.12。除PBS组外,其他组均检测到了特异性抗体,SPE+Pgp3组总抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a抗体水平高于Pgp3组,且以IgG2a升高为主(P＜0.05)。SPE+Pgp3组、Pgp3组脾细胞IFN-γ和刺激指数高于PBS组,且SPE+Pgp3组高于Pgp3组(P＜0.05)；IFN-γ主要由CD4＋T细胞和CD8＋T细胞分泌。各组IL-4含量均较低。 结论SPE乳液佐剂具有良好的佐剂效应,能有效增强Pgp3蛋白体液免疫和细胞免疫,且可优势诱导Th1型免疫反应。     

思想政治教育对基础医学研究生培养作用的思考

基础医学研究生教育肩负着医学发展的重任。随着我国医学模式的转变,基础医学研究生的思想和行为都受到了极大的影响。因此加强此类研究生的思想政治教育,不但能提高研究生的思想道德素质和价值导向,同时也能正确引导研究生在今后的医疗卫生事业以及科研工作的实践活动,从而有利于医学事业的健康发展。     

沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定

目的构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定。方法PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达。结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件。     

医学微生物学教学改革探讨

医学微生物学是联系基础与临床的重要桥梁课程.在传统教学中,学生被动学习,兴趣不大,教学效果不佳.为提高医学微生物学的教学质量,尝试在教学理念和方法等方面进行了一些改革,在一定程度上克服了医学微生物学传统教学模式的弊端,调动了学生的积极性,增强了学生的实践技能和综合素质,取得了良好的教学效果.