OLFM4GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达分析

目的检测OLFM4^GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达,并探讨与肿瘤细胞凋亡与周期的关系。方法利用RT-PCR半定量的方法检测GW112、GRIM19与PIN1三种基因在人12种肿瘤细胞株中转录水平。结果RT-PCR结果显示：12种人肿瘤细胞株中GW112、GRIM19与PIN1三种基因均有表达,未出现转录缺失。其中胃癌细胞SGC-7901与脑胶质瘤细胞CHG-5中的GW112表达明显强于GRIM19,而在其余十种细胞株中GW112表达却明显低于GRIM19。实验组细胞中,PIN1基因只在SGC-7901株与CHG-5株中表达较弱,其余表达均较强。结论GW112、GRIM19与PIN1在这些肿瘤细胞中的表达状况很可能与它们的周期调控和细胞凋亡有关,对三种基因的表达研究可进一步对分析三种基因的功能提供依据。     

对氧磷酸酯酶1的研究进展

对氧磷酸酯酶 1( paraoxonase 1,PON1)是由肝脏合成的 44kD糖蛋白 ,与apoAⅠ紧密结合并固定于HDL颗粒上 ,是一种钙离子依赖性磷酸酯酶。PON1能够阻止脂质过氧化物的生成 ,抑制LDL氧化 ,并能水解氧化性LDL(ox LDL)。PON1酶活性在氧化性脂蛋白增多性疾病如冠心病 (CHD)、2型糖尿病并发大血管病变等疾病中显著下降。PON1基因在 5 4位出现M /L和 192位出现A/B等位基因多态性 ,其B等位基因与L等位基因可能是冠心病及 2型糖尿病并发大血管病变独立的高度危险因素     

GW112基因siRNA对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响

目的 构建靶向GW112 siRNA逆转录病毒载体并筛选特异高效的RNAi靶点,研究GW112基因沉默后对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响.方法 应用逆转录病毒载体psilencer 5.1-H1 Retro 构建针对GW112基因3个不同靶点的RNAi干扰载体-pSiRNA-GW112 (pSi405-GW112, pSi1066-GW112, pSi1480-GW112),将脂质体法转染PT67细胞包装的病毒感染SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳定克隆,RT-PCR鉴定病毒整合,Real-time PCR筛选高效抑制靶点,CCK-8法检测对细胞体外增殖的影响.Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 测序结果证实各干扰靶点的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112构建正确.RT-PCR结果显示除亲本细胞外,经各靶点病毒上清感染的细胞均能扩增出510 bp的Puro抗性基因片段.Real-Time PCR分析表明与SGC-7901亲本细胞组相比,7901-Si405,7901-Si1066及7901-Si1480组GW112的转录水平分别只有SGC-7901组的(15.50±0.01)%,(32.40±0.01)% 与(57.00±0.02)%.而7901-Sc组GW112表达基本无变化.Si405, Si1066与 Si1480 靶点的抑制率分别为84.5%,67.6%及43.0%.沉默GW112后导致SGC-7901细胞体外增殖能力显著抑制(P<0.05),并伴随PCNA蛋白表达下调.结论 构建的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112能显著抑制SGC-7901细胞的体外增殖能力,且这种增殖抑制与下调的PCNA表达有关.     

用积分法测定血清芳香酯酶活性

目的以血清芳香酯酶(ArE)为模型,用模拟和实验考察积分法测定酶活性的可靠性.方法用酚乙酸酯测定ArE反应曲线.按ArE的积分速度方程In(S0/Si) (S0-Si)/Km=(Vm/Km)×ti计算无误差反应曲线,叠加随机误差得模拟曲线.以底物浓度(S0)为参数用Equ①非线性拟合测定Vm/Km,换算得Vm.结果模拟表明积分法测定酶活性与S0无关,升高S0可提高测定上限.实验表明S0低于Km的20%时Vm/Km无变化;重复性5.8%(ν= 6);本底和反应起点延迟无干扰;升高S0可提高上限.此积分法用20% Km的S0测定86份血清,ArE活性Vm呈正态分布,与据初速度按米氏方程计算的Vm无差异.结论此积分法能可靠测定酶活性Vm/Km或Vm.     

Amadori糖化白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油--蛋白激酶C级联的影响

目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (2 0mmol/L)培养液中作用于新鲜牛视网膜血管。采用薄层层析和放射自显影法测定DAG含量和PKC活性 ;并检测d -α-生育酚预处理后DAG、PKC改变。结果 :在生理葡萄糖浓度下 ,牛视网膜血管暴露于AGSA2 4h或 72h后细胞内DAG含量、PKC活性均较对照组显著增加 ,当AGSA和高葡萄糖同时作用于牛视网膜血管时 ,DAG -PKC级联显著激活 ,分别为正常葡萄糖组的 3.4 7倍和 4 .5 4倍 ;在正常血清培养液中 ,与 5 .5mmol/L的葡萄糖相比 ,2 0mmol/L高糖在 2 4h时并不刺激DAG含量增加 (P >0 .0 5 ) ,而 72h时则较对照组增加 4 5 % ,PKC活性较对照增加 5 6 % ,而d -α -生育酚可逆转上述生化改变。结论 :Amadori糖化血清白蛋白可在生理葡萄糖浓度下刺激DAG -PKC途径活化 ,从而影响血管一系列生理功能 ,而d -α-生育酚对血管生化改变有保护作用。     

构建基础学科的探究性实验教学体系

高等教育的实验教学应注重培养学生的科学素质。探究性实验教学体系的教学研究对象、研究方案等由教师指导学生确定。在医药生物化学等基础学科的实验教学中，选用和临床或生物技术药物等有联系的对象为实验教学研究主题，用本学科常用研究策略，常见和新的技术建立研究方案构成具有探索性且开放的实验教学体系，可用于高层次医药人才的实验教学，这有利于促进培养学生的创造意识和科学素质。     

非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的临床意义

目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中ｐ＾１６基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板ＤＮＡ量的银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测４０例非小细胞肺癌手术切除标本中ｐ＾１６基因第２外显子。结果 ４０例中有１３例发生纯合缺失,３例发生突变,缺失及突变率为４０％,其缺失及突变率与肺癌的临床病理分期有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ＾１６基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要     

缺失型血管紧张素转化酶基因与陈旧性心肌梗死患者胰岛素抵抗的关系

为探讨缺失型血管紧张素转化酶基因与陈旧性肌梗死患者胰岛素抵抗水平间的关系,本文选择５５例陈旧性心肌梗死患者和４７例普外科住院病人为对照组。用血浆空腹血糖浓度×血浆空腹胰岛素浓度÷２２．５计算胰岛素抵抗。用聚合酶链反应技术检测血管紧张素转化酶基因缺失／插入多态性。结果发现,陈旧性心肌梗死患者胰岛素抵抗水平和缺失型血管紧张素转化酶基因频率较对照组无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。陈旧性心肌梗死患者血管紧张素转化酶缺失纯合型、杂合型及插入纯合型基因型之间的胰岛素抵抗水平无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示,缺失型血管紧张素转化酶基因和胰岛素抵抗与冠心病无联系,且它们之间不存在协同作用。     

GW112基因逆转录病毒载体的构建及在胃癌SGC-7901细胞的表达研究

目的 构建人GW112基因的逆转录病毒载体,并通过病毒介导其在人胃癌SGC-7901细胞的稳定表达.方法 采用DNA 重组技术构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-GW112;以脂质体PT67细胞包装病毒,经病毒感染的SGC-7901细胞通过G418筛选及荧光定量 PCR 鉴定,建立GW112稳定过表达SGC-7901细胞株.结果 成功构建了pLEGFP-N1-GW112逆转录病毒表达载体,经病毒包装的重组转录病毒成功感染SGC-7901细胞,Real-Time PCR结果显示实验组中GW112基因是对照组细胞中的4.2倍.结论 逆转录病毒介导的GW112基因在胃癌SGC-7901细胞获得了稳定过表达,为进一步研究GW112在胃癌中的功能奠定了良好基础.     

Alzheimer Disease病因研究现状

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)亦称老年性痴呆症.是老年人中最常见的神经退行性疾病之一.其主要病理学特征是老年斑、神经元纤维缠结和基底前脑胆碱能神经元蜕变[1].关于AD的病因与疾病的发生发展机制各国学者先后提出多种假说,但还没有一种能够圆满的解释所有AD病理现象及发生发展过程.因此,目前对AD还没有有效的防治措施.参考近几年的研究资料,我们将对目前该病的研究现状及在此领域影响较大的假说做一综合叙述.