表皮生长因子对大鼠肠缺血-再灌注所致肠黏膜通透性改变的影响

目的观察大鼠肠缺血再灌注后外源性表皮生长因子(EGF)对肠黏膜通透性和肠、肝、肾功能改变的影响 .方法80只3级雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(C)组、肠缺血(I)组、肠缺血再灌注(IR)组和EGF治疗组.IR组和EGF治疗组均用微血管夹夹闭肠系膜上动脉根部45分钟,之后放松血管夹形成再灌注.在再灌注即刻经颈静脉分别注入EGF 100 μg/kg或生理盐水,分别于伤后2、6、12和24小时将动物活杀.C组仅分离肠系膜上动脉根部而不夹闭,I组在缺血45分钟后即刻活杀.取血检测肝、肾功能, 血浆二胺氧化酶(DAO)活性和D乳酸浓度;取小肠、肝和肾组织进行形态学观察 .结果①与C组相比,各组动物血浆丙氨酸转氨酶(ALT) 和尿素氮(BUN)均明显升高,但EGF治疗组升高的幅度显著低于IR组(P <0.05).②EGF治疗组的血浆D乳酸浓度和DAO活性在伤后升高的幅度均明显低于IR组(P<0.01).③EGF治疗组肝、肾和小肠黏膜充血、水肿、炎细胞浸润及局灶性坏死的程度较IR组显著减轻 .结论伤后给予外源性EGF显著减轻了缺血再灌注所致肠、肝、肾功能的损伤,其主要作用环节是促进了EGF与受体的结合及随之发生的信号传导.     

增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶及其激酶基因表达的变化

目的：探讨细胞外信号调节激酶1/2（extracellular-signal regulated protein kinase，ERK1/2）及其上游信号分子MEK1/2在增生性瘢痕和正常皮肤中基因表达的变化。方法：提取8例增生性瘢痕和8例正常皮肤组织的总RNA后，分离mRNA，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律。结果：在正常皮肤组织中，MEK1、MEK2、ERK1和ERK2基因表达较弱；而在增生性瘢痕中，这4种基因表达明显增强，其mRNA量的灰度比分别为正常皮肤的1.1倍、1.2倍、2.2倍和2.5倍。结论：增生性瘢痕的发生可能与MEK1/2和ERK1/2基因表达升高有关。     

脐带间充质干细胞对重度烧伤大鼠肾脏保护作用的研究

目的：观察脐带间充质干细胞（UCMSCs）移植对大鼠严重烧伤后肾脏损伤的影响,为干细胞应用于烧伤后的脏器保护研究奠定基础。方法：获取并分离培养孕大鼠UCMSCs并用流式细胞技术鉴定细胞表面抗原。48只SD大鼠随机分为4组：正常对照组（n=12）、生理盐水组（n=12）、乌司他丁组（n=12）和UCMSCs组（n=12）。正常对照组不作任何处理,立即活杀取材;其余3组制备20％TBSAIII度烧伤模型（98℃,12s）,于伤后48h分别静脉注射生理盐水0．1ml／g（生理盐水组）、乌司他丁1．6×105U／kg（乌司他丁组）和UCMSCs106／k（uCMSCs组）,于给药后7、14d观察大鼠肾脏组织病理学,免疫组化法观察组织凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并进行血尿素氮（BUN）、肌酐（cr）水平的测定。结果：烧伤后7、14d的组织病理学观察显示,干细胞移植后的大鼠烧伤后肾脏组织充血、肿胀等病理学改变较乌司他丁组及生理盐水组有所减轻,随时间延长减轻更加明显;免疫组化观察显示UCMSCs组伤后7d和14d肾组织中Bcl-2的表达较乌司他丁组和生理盐水组明显增多,表明肾组织抗凋亡能力增强。大鼠烧伤后BUN和Cr均较正常对照组显著升高。乌司他丁治疗组除14dBUN较生理盐水组升高外,其余时间BUN和Cr均明显下降。UCMSCs组伤后7和14d两肾功能指标均明显下降,与生理盐水组和乌司他丁组比较差异均有显著性（P〈0．05）,显示干细胞治疗对肾功能有明显改善作用。结论：UC—MSCs移植可有效减轻重度烧伤后大鼠‘肾脏组织的损伤并改善肾脏功能。     

采用数字控温烫伤仪制备大鼠小面积烫伤模型

动物烫伤模型的制备方法有不少报道，但普遍存在重复性差、深度不易控制、面积不易恒定等问题。我们采用数字控温烫伤仪制备不同深度烫伤模型，方法简单、方便，组织学检查显示模型稳定，重复性好。现将方法介绍如下。     

肠缺血再灌注损伤后大鼠肝和肺组织bFGF和TGFβ基因表达的变化

目的观察大鼠肠缺血再灌注损伤后肝和肺的损伤程度与内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达量的变化规律，探讨两类生长因子在内脏损伤与修复中的作用．方法采用大鼠（ｎ＝１６）肠系膜上动脉夹闭模型，（缺血４５ｍｉｎ，再灌注６ｈ和２４ｈ）用原位杂交方法检测内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达水平．结果肠缺血４５ｍｉｎ再灌注６ｈ时，对肝、肺的损伤最严重，而此时内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达水平显著增高，达峰值；再灌注２４ｈ，肝，肺的损伤已基本恢复，内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达量也基本恢复至正常水平．结论内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达水平的变化与肝、肺的损伤程度呈正相关，表明这两类生长因子在内脏损伤后可能存在促进修复的作用．     

碱性成纤维细胞生长因子对肠道缺血所致肠道和肝损伤的影响

目的研究急性肠系膜上动脉夹闭后全身应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对肠道和肝的保护作用.方法采用夹闭大鼠肠系膜上动脉40 min 与再灌注72 h 动物模型.72只大鼠随机分成 bFGF 治疗组,肝素生理盐水对照治疗组以及假手术组.用肝功能指标,血浆 TNFa 含量,组织细菌学定量以及病理学方法评价伤后不同时间的治疗效果.结果经 bFGF 治疗的大鼠伤6 h 与24 h 的肝功能损伤较对照明显减轻,血浆 TNFa 含量显著减少.脏器细菌培养以现经bFGF 治疗的大鼠,其肠道细菌迁移至肝脾与淋巴结的发生率较对照治疗组明显下降.结论 bFGF 能显著减轻肠道缺血再灌注对肠道和肝形态与功能损伤.其作用机制可能与 bFGF 的促分裂效应与非促分裂激素样活性有关.     

速愈乐TM敷料促进小型猪感染创面愈合和抑菌作用的实验研究

目的:观察速愈乐TM创伤敷料对小型猪感染创面促进愈合和抑菌的作用.方法:以小型猪全层皮肤缺损创面为模型,每只动物用打孔器致伤10个创面,随机分为5组:空白对照组、种菌对照组、水凝胶组、银离子组和速愈乐TM组.除空白对照组外,其余各组创面于术后30 min接种1.5×108 CFU/ml金黄色葡萄球菌(金葡菌)0.1 m...     

分离培养汗腺导管部细胞的新方法

目的 探讨建立汗腺导管部细胞分离的新技术.方法 成人仞厚皮片和薄中厚皮片标本(n=10)剪碎后用Ⅱ型胶原酶消化12 h,吸取并转移汗腺导管到培养皿中贴壁培养.应用流式细胞仪、免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以及蛋白印迹(Western Blot)分析检测培养细胞的汗腺特异标志CEA、CK8、CK18、CK19抗原表达,并用膜片钳技术检测培养细胞膜上阿米洛利(amiloride)敏感Na~+离子通道,用t检验比较分析两组间实验数据.结果 汗腺导管贴壁48 h后,围绕汗腺导管出现单层扁平的上皮细胞,生长2～4周融合成片.流式细胞学检查示原代培养汗腺导管细胞与原代培养汗腺细胞在癌胚抗原(CEA)阳性率[(90.26±1.12)%vs.(89.70±1.43)%]和细胞角蛋白8(CK8)阳性率[(94.41±1.84)%vs.(93.65±1.63)%]上,差异无统计学意义(P>0.05).形态学染色汗腺导管细胞抗CEA、CK8、CK18、CK19染色均为阳性.RT-PCR表明原代培养汗腺导管细胞表达CEA、CK8、CK18、CK19基因,Western Blot清晰显示CEA条带,CK8、CK18、CK19蛋白条带.膜片钳检测表明原代培养汗腺导管细胞膜上存在amiloride敏感Na~+离子通道.无血清表皮细胞EpiLife培养基在汗腺导管细胞生长过程中抑制成纤维细胞生长.结论 从仞厚皮片和中厚皮片分离培养汗腺导管部细胞的方法较传统的分离方法具有简便快速的优点,EpiLife培养基可抑制培养过程中成纤维细胞的生长,可以在体外建立最佳汗腺导管细胞模型.     

表皮干细胞表型的成纤维样细胞在瘢痕中的表达

目的：探寻正常皮肤与增生性瘢痕中表皮干细胞标记物的表达,从组织学角度探讨表皮干细胞参与瘢痕增生的证据。方法：术中切取8例伤后6月增生性瘢痕患者的瘢痕组织及同例患者的正常皮肤,将其制备切片并分组,用E1iviSion二步法免疫组织化学检测表皮干细胞表面标志物β1整合素和CK19的表达,计数阳性细胞并进行统计学处理。结果：瘢痕组织真皮层中,表达阳性细胞数β1整合素和CK19较正常皮肤β1整合素和CK19明显增多（P〈0．05）,成纤维细胞数显著增多。结论：在病理性瘢痕的发生中,表皮干细胞可能在细胞因子作用下分化为成纤维细胞,从而参与瘢痕形成。