幽门螺杆菌感染与血液病

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是1983年澳大利亚学者Warren和Marshall首次从胃黏膜组织中分离出的一种螺旋样细菌,自此揭开了人类研究Hp与胃肠疾病关系的序幕,彻底改变了很多胃肠道疾病的理论.     

抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用

慢性粒细胞白血病 (ＣＧＬ)来源的树突细胞 (ＤＣ)在体外能较强地激发特异性细胞毒Ｔ细胞产生 ,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1 ] 。我们探讨ＣＧＬ细胞冻融抗原(ＣＬＡ)负载的ＤＣ与细胞因子诱导的杀伤细胞 (ＣＩＫ)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒Ｔ细胞的杀伤活性。材料和方法1　细胞来源　 12例外周血样本采自ＣＧＬ慢性期初诊患者(ＷＢＣ >5 0× 10 9) ,冻存后作为靶细胞及制备ＣＬＡ。采缓解后患者外周血进行ＤＣ及ＣＩＫ细胞培养。2　主要试剂　ｒｈＩＬ 4 (比活性 13Ｕ ｎｇ)、ｒｈＴＮＦα(比活性 36Ｕ ｎｇ)购自Ｐｒｏ…     

米托蒽醌、阿糖胞苷、粒细胞集落刺激因子的动员方案及大容量采集自体外周血干细胞

背景:外周血干细胞移植成功的首要条件是干细胞的有效动员和采集,选择高效低毒的动员方案,掌握动员和采集时机与动员效果密切相关。目的:探讨米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后,单用粒细胞集落刺激因子或粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用对恶性血液病和实体瘤患者自体外周血干细胞的动员效果。设计:观察对比实验。单位:徐州医学院附属医院血液科。对象:选择1998-09/2006-12在徐州医学院附属医院血液科收治的42例恶性血液病和实体瘤患者,诊断符合国际白血病分型及世界卫生组织新分类标准。男25例,女17例,年龄7～54岁,平均29岁,体质量(52±18)kg。其中急性髓细胞白血病12例,急性淋巴细胞白血病6例,慢性粒细胞白血病慢性期1例,非霍奇金淋巴瘤15例,霍奇金淋巴瘤4例,多发性骨髓瘤2例,晚期乳癌2例。患者均经常规化疗达到或接近完全缓解,骨髓细胞学检查无肿瘤细胞浸润。心、肺、肝、肾等主要脏器功能正常。动员前化疗疗程平均8次,所有患者均对治疗项目知情同意。方法:患者均采用米托蒽醌10mg/(m2·d)静脉滴注第2～3d后,阿糖胞苷2g/m2静脉滴注第1～2d,1次/12h。当白细胞计数下降至最低点开始回升时,20例患者使用粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),连用3～5d,22例患者早6:00给予粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),晚6:00给予粒-巨噬细胞集落刺激因子5～7μg/(kg·d)。白细胞计数>2.5×109 L-1,CD34 细胞≥1%时,用CS3000plus血细胞分离机连续2d采集自体外周血干细胞,检测CD34 细胞含量和T淋巴细胞亚群。①单个核细胞与FITC标记的CD34 、CD3和CD8单抗及与CD4PE标记的CD4单抗4℃混合30min,采用流式细胞仪检测CD34 细胞和T细胞亚群,分析5×105个细胞,得出CD3、CD34 细胞含量及CD4/CD8比值。用甲基纤维素法测定粒-巨噬细胞集落形成单位。②观察术后相关不良反应。③针对不同类型疾病给予相应预处理36～48h后回输自体外周血干细胞,并行单个核细胞计数及台盼蓝染色,解冻后检测粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34 细胞。主要观察指标:①动员前后CD34 细胞和T细胞亚群变化。②术后相关不良反应。③自体外周血干细胞回输量(单个核细胞计数、粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34 细胞数)。结果:纳入患者42例,均进入结果分析。①动员前后CD34 细胞和T细胞亚群变化:患者应用粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子动员后外周血CD34 细胞明显增加[(0.054±0.032)%,(1.82±0.76)%,P<0.01]。22例联合应用粒细胞集落刺激因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子动员患者CD34 细胞和粒-巨噬细胞集落形成单位分别为(8.76±3.39)×106/kg,(3.52±1.33)×105/kg,明显高于单用粒细胞集落刺激因子的20例患者[(6.12±2.11)×106/kg,(2.03±1.07)×105/kg,P<0.05]。单独应用粒细胞集落刺激因子及粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用后随CD34 细胞增加,T淋巴细胞亚群变化不明显(P>0.05)。②外周血干细胞动员相关不良反应:全部病例出现Ⅱ～Ⅲ度脱发,血小板均有不同程度的下降,为(54.43±26.14)×109 L-1,21例患者出现感染性发热(37.8～41.0℃),经抗生素治疗感染均在短期内得到控制。13例患者在白细胞快速上升时出现骨骼疼痛(腰骶部为主)。③自体外周血干细胞回输量:自体外周血干细胞非程控冷冻-80℃保存2.0～6.5个月,细胞回收率(88.7±7.4)%,台盼蓝拒染率(92.1±5.5)%,回输的单个核细胞(5.21±2.44)×108/kg,CD34 细胞(6.89±3.55)×106/kg,粒-巨噬细胞集落形成单位(2.58±2.33)×105/kg。④循环血量每次10～16L(终点分血量均在3个TBV上)。无严重毒副反应。26例接受自体外周血干细胞移植者造血功能均获得满意重建。结论:米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后单用粒细胞集落刺激因子及粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用均能安全、有效动员自体外周血干细胞,但以合用更为有效。大容量采集是提高干细胞产率,减少采集次数的重要手段。     

全反式维A酸治疗急性早幼粒细胞白血病相关副反应的临床观察

全反式维A酸 (ATRA)自从应用于诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)以来 ,因其疗效好 ,完全缓解 (CR)率高 ,且具有治疗中不诱发弥漫性血管内凝血 (DIC)及无骨髓抑制等优点 ,目前已成为诱导缓解APL的首选药物之一[1] 。但随着ATRA临床应用的不断扩大 ,其副反应也渐被重视 ,特别是它的一些严重副反应如高白细胞综合征、维A酸综合征 (RAS)和高颅压综合征等若处理不当常危及患者生命。为加深对ATRA治疗相关副反应的认识 ,减少其在临床上的发生 ,进一步改善APL预后 ,我们对我院 36例初诊APL患者在服用ATRA诱导分化治疗过程中…     

血小板输注治疗急性白血病患者55例应用分析

目的　探讨急性白血病 (AL)患者血小板输注的指征及去白细胞血小板输注减少输血反应的有效性。方法　采用去白细胞血小板输注 ,输注前及输注后 1 8～ 2 4h测定血小板计数 (Plt) ,计算其增值及回收率 ,并观察临床出血控制情况。结果　Plt 1 0× 1 0 9/L作为输注指征是安全的 ;发热可影响输注效果去白细胞血小板输注效果好 ,副作用少。结论　AL化疗后骨髓抑制阶段及时输注去白细胞血小板可有效防止出血 ,减少因白细胞引起的同种免疫反应和发热反应     

烷化剂为主的预处理方案在造血干细胞移植中近期和远期毒性

背景:造血干细胞移植成功的主要障碍是移植后的各种并发症,早期并发症主要与预处理有关。找出合理的剂量和新的高效低毒的预处理方案是提高造血干细胞移植成功率的关键。目的:了解以烷化剂为主的联合化疗作预处理,进行造血干细胞移植治疗恶性血液病的相关毒性和移植效果。设计:观察对比实验。地点:徐州医学院附属医院血液科。对象:选择1997-07/2006-02在徐州医学院附属医院住院的45例白血病及淋巴瘤患者,男31例,女14例,年龄7～52岁,中位年龄31岁。移植时病程5～17个月,平均8个月。方法:对45例白血病及淋巴瘤缓解期患者进行骨髓及外周血干细胞移植,预处理方案为以烷化剂为主的联合化疗,髓外毒性分级采用Bearman等制订的标准,预处理相关毒性分5个级别,即由无毒性(0级)至致死性毒性(Ⅳ级)。统计分析完全缓解率、完全缓解时间、复发率和无病生存期。主要观察指标:各脏器预处理相关毒性发生情况。结果:①5例无任何毒性发生,最大毒性为Ⅲ级者占13%(6/45)。各脏器预处理相关毒性大多数为Ⅰ～Ⅱ级,严重的预处理相关毒性Ⅲ级不多见。在Ⅰ～Ⅱ级预处理相关毒性中口腔黏膜溃疡和胃肠道毒性发生率较高,分别为73%(33/45)和51%(23/45),经治疗后短期内恢复;心脏毒性发生率低,均为Ⅰ级,多为心动过速和ST-T改变;肝脏预处理相关毒性,除2例肝静脉闭塞病外,多表现为转氨酶增高,4例出血性膀胱炎,其中1例为迟发性出血性膀胱炎。肾、肺和中枢神经系统预处理相关毒性少见。②移植后43例患者造血功能获得重建,植入失败死亡2例(4%)。中位随访时间37(8～102)个月,复发10例及移植相关并发症死亡5例,28例仍长期无病生存(62.2%)。100d内移植相关死亡原因主要为急性移植物抗宿主病,巨细胞病毒性间质性肺炎,侵袭性感染,多脏器功能衰竭和早期复发。结论:烷化剂为主的预处理方案进行造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤相关毒性轻,患者耐受好。     

慢病毒介导可溶性肿瘤坏死因子受体1在小鼠骨髓未成熟树突状细胞中的表达(英文)

背景:肿瘤坏死因子α是介导树突状细胞成熟的重要细胞因子之一,可溶性肿瘤坏死因子受体1与其结合可阻断肿瘤坏死因子α的作用,维持树突状细胞于不成熟状态,诱导免疫耐受.目的:构建含有人sTNFR1的慢病毒表达载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达.方法:以人外周血单个核细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出sTNFR1基因片段,亚克隆至慢病毒转移质粒pXZ208,通过IRES连接eGFP报告基因,建立双顺反子慢病毒转移质粒,命名为pXZ9-sTNFR1,DNA测序鉴定.采用脂质体转染293 FT细胞,根据报告基因eGFP测定病毒滴度.采用小剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4体外培养扩增C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞.培养第5天,以pXZ9-sTNFRl重组慢病毒上清感染未成熟树突状细胞,RT-PCR检测感染后sTNFRl转录,Westernblot法检测sTNFR1蛋白表达,观察sTNFR1基因修饰及脂多糖刺激后树突状细胞的表型特征.结果与结论:成功构建重组质粒pXZ9-sTNFR1,转染293 FT细胞24 h后观察到eGFP表达,病毒滴度在10~6U/L以上.RT-PCR显示pXZ9-sTNFR1感染的未成熟树突状细胞sTNFR1呈阳性表达,Western blot检测到sTNFR1蛋白存在于感染后未成熟树突状细胞和培养上清中.培养第5天的树突状细胞低表达CD40、CD86、CD80和MHCⅡ类分子,脂多糖刺激后,高表达MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子,显示出成熟型树突状细胞表型特征,sTNFR修饰的树突状细胞MHC Ⅱ类分子和CD40、CD80、CD86分子表达水平无变化.提示:①成功构建了负载sTNFR1基因片段及含eGFP报告基因的慢病毒载体,获得了高滴度的重组慢病毒颗粒.②经慢病毒高效转导的未成熟树突状细胞sTNFR1 mRNA及蛋白稳定地表达,可以保护未成熟树突状细胞不被外源性脂多糖刺激活化,维持树突状细胞于非成熟状态.     

实验诊断学教学中医学生临床思维能力培养的探索

通过在实验诊断学教学中实行“典型病例实验诊断分析”,使学生学会通过检查项目的选择、检查结果的分析,掌握疾病的诊断、鉴别诊断、疗效及判断预后,培养系统而全面的临床思维能力。     

物理诊断学教学实践与体会

针对物理诊断学特点,结合实际工作,通过改进教学方法、改革考试方式等加强学生技能训练及临床思维培养,提高物理诊断学教学质量.     

慢病毒介导的sTNFR1在小鼠骨髓未成熟树突状细胞的表达

摘要 背景：未成熟树突状细胞 (imDC) 能够诱导免疫耐受,如何维持DC在未成熟状态是关键,TNF-α是介导DC成熟的重要细胞因子之一,可溶性肿瘤坏死因子受体1 (sTNFR1) 与TNF-α结合可阻断TNF-α的作用,维持DC于不成熟状态。 目的：构建含有人sTNFR1的慢病毒表达载体,观察其在imDC中的表达,为进一步研究imDC在骨髓移植免疫耐受中的作用奠定基础。 设计、时间及地点：开放性实验于 2007-12/2009-06 在徐州医学院附属医院血液病研究室完成。 材料：293FT包装细胞株、包装质粒ΔNRF、被膜蛋白质粒pVSVG、pXZ208由本实验室构建保存。克隆载体pCR2.1为美国Invitrogen公司产品。DC培养的各种单克隆抗体等。成年雄性C57BL/6小鼠购自徐州医学院实验动物中心。 方法：1. 以人外周血MNC总RNA为模板,RT-PCR扩增出sTNFR1基因片段,亚克隆至慢病毒转移质粒pXZ208,通过IRES连接EGFP报告基因,建立双顺反子慢病毒转移质粒,命名为pXZ9-sTNFR1,DNA测序鉴定。采用脂质体转染293 FT细胞,根据报告基因EGFP测定病毒滴度。 2.采用小剂量GM-CSF + IL-4体外扩增培养C57BL/6小鼠骨髓来源的DC,于培养第5 d,用pXZ9- sTNFR1重组慢病毒上清感染imDC,同时以pXZ9病毒作为对照,流式细胞术评估感染效率,RT-PCR检测感染后imDC中sTNFR1的转录,Western blot法检测 sTNFR1蛋白在imDC细胞和培养上清中的表达。观察骨髓来源的DC成熟过程中的表型变化,以及sTNFR1基因修饰DC及外源性脂多糖 (LPS) 刺激后的表型特征。 主要观察指标：重组表达载体pXZ 9-sTNFR1的酶切鉴定。慢病毒的包装及病毒滴度测定。sTNFR1基因转染imDC后sTNFR1的表达及sTNFR1基因修饰DC的表型特征。 结果：1. 成功构建重组质粒 pXZ9-sTNFR1,转染293 FT细胞12 h后在荧光显微镜下观察到EGFP表达,48 h、72 h 和96 h收集病毒上清,病毒滴度为106 U/L以上,获得携带sTNFR1基因的重组慢病毒 pXZ9-sTNFR1。2. 流式细胞术检测病毒上清对imDC感染效率达 (61.37±5.48) %。RT-PCR检测到sTNFR1的表达,Western blot法检测到sTNFR1蛋白存在于感染后imDC细胞的培养上清中,而对照组未检测到sTNFR1的转录和表达。3. 小鼠骨髓MNC在培养4 d 左右出现半黏附细胞集落,集落逐渐增多、变大,第5 d的DC低表达CD40、CD86、CD80和MHCⅡ类分子,第8 d时高水平表达MHCⅡ类分子和CD40、CD86、CD80分子,在LPS的刺激下,Day-7-DC或pXZ-DC 表达高水平MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子,显示出成熟型DC 的表型特征,而sTNFR-DC 的MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86 分子的表达水平变化不明显。 结论：1. 成功构建了负载sTNFR1基因片段及含EGFP报告基因的慢病毒载体,获得了高滴度的重组慢病毒颗粒。2. 经慢病毒高效转导imDC后sTNFR1的mRNA及蛋白稳定地表达,sTNFR1可以保护imDC不被外源性LPS 刺激所活化,维持DC于非成熟型状态。