竹红菌乙素对视网膜和脉络膜光动力学治疗系统生物学效应的评定作用

背景:光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)治疗老年性黄斑变性(senilemaculardegeneration,SMD)的光敏剂苯并卟啉衍生物单酸A环(benzoporphyrinderivativemonoacidAring,BPD-MA)价格昂贵,在国内不能普及。评定国产光敏剂竹红菌乙素(hypocrellinB,HB)对视网膜和脉络膜光动力学治疗系统生物学效应,以探讨是否有价值进一步研究HB治疗SMD的前景。目的:建立视网膜和脉络膜光动力治疗的照射系统、光敏剂体外光敏性检测方法和体内观察光敏剂PDT疗效的方法。设计:开放性实验。地点、材料和干预:实验地点为解放军总医院激光科。建立照射系统:在裂隙灯显微镜开创激光窗口,使用光纤连接激光器和裂隙灯显微镜,使激光和裂隙灯照明同光路到达眼底,作为照射系统;通过四甲偶氮唑盐法检测光敏剂体外光敏性,和BPD-MA相比,初步判断其光敏性。以青紫蓝兔为实验对象,用光敏剂HB进行PDT治疗,通过眼底观察、荧光眼底造影、光镜和电镜检查照光部位的生物学效应,检测建立的实验系统的实用性和可靠性。主要观察指标:裂隙灯显微镜和激光器的耦合效率,光敏剂体外光敏性以及照光部位的生物学效应。结果:照射系统输出稳定,由激光器发出的功率和裂隙灯显微镜的激光窗口末端的输出的功率的耦合率为60%。国产HB体外光敏性和BPD-MA相似,HB     

激光共聚焦显微成像技术对亚细胞位点光动力损伤的动态观察

目的探讨应用激光共聚焦显微成像技术对光动力效应所致亚细胞位点损伤进行动态观察的可行性。方法实验分为HMME＋Rhodamine-123组、单加HMME组、单加Rhodamine-123组和单纯细胞组，后3组作为对照组。传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞，将血卟啉单甲醚（HMME）与内皮细胞共同孵育24h后，加入细胞探针Rhodamine-123对线粒体进行染色。应用激光共聚焦显微镜并采用细胞器-细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位，随后采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列。结果HMME＋Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像在光照过程中逐渐发生变化：典型的线粒体形态特征逐渐消失，并伴有荧光强度下降，荧光在胞浆内趋于弥散分布，细胞核内出现Rhodamine-123的荧光；而单加Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像未发生明显变化。结论应用激光共聚焦显微成像技术能实现亚细胞水平光敏损伤位点的动态光学检测，线粒体和核膜可能是HMME介导的光动力损伤亚细胞位点。     

光敏剂亚细胞定位研究方法的应用比较

目的 探讨不同光敏剂亚细胞定位方法的应用特点。方法 应用电感耦合器材（CCD）荧光显微成像系统，选择细胞器荧光探针BODIPY标记细胞内高尔基体。分别采用直接观察法、伪彩色融合法、波形比较法、相关系数法及细胞器一细胞荧光强度比值法，对光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）进行细胞内分布的定性与定量研究。结果 采用直接观察法比较光敏剂和细胞器探针荧光图像，发现HMME和BODIPY的荧光分布模式有相似之处，采用伪彩色融合法得到的二者融合图像，显示存在黄色的空间重叠区域。应用波形比较法发现，直线路径上所有像素在HMME荧光图像与BODIPY荧光图像中的灰度值相对空间坐标的曲线波形相似。应用相关系数法得出，各像素的HMME荧光灰度值与细胞器探针荧光灰度值之间的相关系数值为0．6024。采用细胞器一细胞荧光强度比值法发现，随着参数m的增大，即细胞器聚集程度的降低，高尔基体聚集区域的平均荧光强度比值（J1／J2）呈下降趋势，二者具有明显的相关性（P〈0．05）。结论 通过直接观察、伪彩色融合及波形比较的方法，基本可以判定HMME在高尔基体聚集区域有分布；采用相关系数法．尤其是细胞器一细胞荧光强度比值法能得到更为精确的量化结果，以弥补定性方法的不足。     

两种荧光显微成像系统亚细胞定位的对比

目的:应用高分辨率荧光显微成像系统采集细胞器探针图像,并与激光共聚焦显微成像系统进行对比。方法:实验于2003-05/2004-01在解放军总医院完成。①实验材料:鼠肺毛细血管内皮细胞株(1H11)由上海复旦张江生物公司提供;荧光探针Rhodamine-123,Lucifer Yellow,DiOC6[3],BODIPY(美国Sigma公司)。②细胞培养及荧光探针染色:细胞培养采用含体积分数为0.2胎牛血清的低糖DMEM培养基,密度5×107L-1。选择Rhodamine-123作为细胞线粒体特异性荧光探针,选择DiOC6[3]作为细胞内质网特异性荧光探针,选择BODIPY作为细胞高尔基体特异性荧光探针,选择Lucifer Yellow作为细胞溶酶体探针。前3个探针在完全避光条件下与培养的细胞共同孵育0.5h,后者则共同孵育15h。③高分辨率荧光成像系统的图像采集:线粒体荧光图像采集,选取经Rhodamine-123共孵育完成的细胞,选择激发滤色镜为BP460-490,吸收滤色镜为BA515,分光镜为DM500,另加一绿通道液晶滤光片,激发出Rhodamine-123的荧光。电荷耦合器件采集图像并送入计算机。重复上述步骤,采用DiOC6[3]标记内质网,BODIPY标记高尔基体,Lucifer Yellow标记细胞溶酶体,激发条件同Rhodamine-123。分别采集同一视野靶细胞DiOC6[3]、BODIPY或Lucifer Yellow的荧光图像,完成全部图像采集并储存在计算机中。④激光共聚焦显微成像系统的图像采集:选择经4种探针染色的靶细胞,使用氩离子激光器在488nm激发Rhodamine-123,Rhodamine-123荧光通过配置有530/60-G发射滤光片的通道1探测。重复上述步骤,在488nm激发DiOC6[3]和BODIPY,在457nm激发Lucifer yellow,3种荧光均由通道1探测,后2个探针的发射滤光片的配置为515/30-G,DiOC6[3]选择530/60-G。由光电倍增管接收信号并传输入计算机成像。结果:①高分辨率荧光成像系统所采集图像,靶细胞中由荧光探针Rhodamine-123染色的线粒体呈多个典型的小棒状或卵圆状,聚集在核周;Lucifer yellow染色的溶酶体呈多个非对称球型,在胞浆内随机分布,颗粒尺寸通常大于线粒体;荧光探针DiOC6[3]着色的内质网占据胞浆的很大空间,以囊状聚集为特征;BODIPY特异性地结合在高尔基体上,荧光图像显示围绕在细胞核周围呈条索状。②与高分辨率荧光成像系统比较,激光共聚焦显微成像系统所采集的图像其荧光强度基本相同,但分辨率低、细节显示模糊、胞浆中细胞器的准确分布信息和形态特征显示效果欠佳。结论:两种荧光显微成像系统均可采集到细胞器探针的荧光图像。但高分辨率荧光成像系统采集的荧光图像具有细节清晰、分辨度高、准确显示胞浆中细胞器的分布信息和形态特征等优点。     

杂合性白血病的临床特征:5例报导

杂合性白血病一词乃指有淋巴及粒细胞两者特征起源于单克隆白血病原始细胞的急性白血病。Gale及Ben-Bassat建议杂合性白血病分为“双表型”白血病及“双系”型白血病。前者指10％以上的原始细胞有淋巴及粒细胞的双重标记。后者指同时存在有淋巴细胞特征及只有粒细胞特征的不同族的原始细胞群体,但不同于有着各自克隆起源的两种截然不同白血病细胞群体的“双克隆性”白血病。“双系型”白血病应该同时或随后发生。且时间必须限于六个月内,以除外治疗诱发的白血病及“双克隆性”白血病。     

飞秒激光晶状体切割术中激光能量分布测量

目的:从眼内激光能量分布角度评估飞秒激光晶状体切割术的可行性与安全性。方法:以中心波长800nm、脉宽35fs、重复频率1kHz的钛宝石激光器为核心器件搭建手术光路,取新鲜猪眼球54只(猪龄8～12个月),按不同手术激光能量随机将猪眼分为9组(激光能量范围0.8～6μJ)。在猪眼球中央后壁除去直径约7mm的圆孔,其后放置功率计测量晶状体切割手术     

不同给药条件下光动力疗法对兔骨骼肌损伤效应的影响

目的：为探索心脏肿瘤的光动力疗法(photodynamic therapy，PDT)治疗方案，建立兔骨骼肌在体灌注模型，观察不同给药条件下PDT对兔骨骼肌损伤效应的影响。方法：实验于2004—01／06在解放军总医院激光科实验室完成，建立兔骨骼肌在体灌注模型。分组：局部灌注组，光敏剂PSD-007为120，240mg／L两种浓度；全身给药组，耳缘静脉，5mg／kg。选择632．8nm和532nm两种波长激光。照光剂量为180J／cm^2。并设单纯照光组为对照组。照后即刻及3d，数码相机采集大体观改变，光学显微镜检测组织病理变化。结果：照光后即刻各局部灌注组的肌肉组织无明显颜色改变；3d后主要为轻中度改变，呈点状、小片状坏死，其中532nm激光组的损伤程度要重于632．8nm激光组。不同浓度的光敏剂对PDT损伤程度没有显著影响。而全身给药组即刻可见照光部分红色略微加重，3d后两种波长激光照射部位均呈瓷白色凝固性坏死改变，有的周边有一圈暗红色改变，为重度损伤。照光后即刻和3d，单纯照光组的大体观或光镜下均无明显改变。结论：该模型可以模拟在体循环条件下心肌肿瘤经停跳液灌注后的PDT治疗，停搏液灌注后明显减弱PDT的疗效，缺氧可能是该模型中制约PDT效应的主要因素。     

影响飞行员航空生理训练的因素及应对措施

航空生理训练(以下简称航训)是飞行员在疗养期间的一项常规训练，主要项目有加压供氧、高空缺氧、定向障碍、抗荷生理。它对飞行员正确应对高空飞行中突发环境恶化问题，确保飞行安全意义重大。但是，在多年的航训中，我们发现，由于受施训者、训练对象双方主、客观因素影响，制约了航训工作效能的发挥，现就这一问题分析如下：     

肿瘤患者葡萄球菌感染的分布及其耐药性分析

葡萄球菌广泛分布于自然界．在空气、土壤和水中广泛存在，在人体、毛囊、皮脂腺管、鼻腔和肠道中也有本菌存在．医护人员中鼻腔带菌率达80～100％，而且常为耐药菌株。尤其作为肿瘤医院．患者均自身免疫力低下，又进行放、化疗，再加上手术、静脉插管等侵入性操作．易发生感染。因而密切分析和监测葡萄球菌的耐药性非常重要。为此我们对2006年6月～2007年12月分离的61株葡萄球菌分离菌株的耐药性进行分析。     

578.2 nm激光对不同黑色素含量兔视网膜损伤的比较

目的比较脉宽20～40 ns、频率6 kHz的578.2 nm脉冲铜蒸气激光照射后不同黑色素含量兔视网膜的损伤阈值。方法以青紫蓝灰兔(16只,32只眼),新西兰大耳白兔(13只,26只眼)为实验对象,应用波长578.2mm,脉宽20～40ns的脉冲铜蒸气激光照射兔眼底视乳头下方的后极部,按照眼底功率密度将两组实验对象各分为五组,灰兔435 mW/cm~2、869 mW/cm~2、1 304 mW/cm~2、1948 mW/cm~2、2 898 mW/cm~2组和白兔869 mW/cm~2、1304 mW/cm~2、1593 mW/cm~2、2 174 mW/cm~2、3 043 mW/cm~2组。照光时间100 s,眼底光斑直径2 mm。照光后24 h检眼镜检查视网膜上的曝光点,眼底照相机检查和记录,组织病理学检查兔视网膜的损伤。结果波长578.2 nm,频率为6 kHz的铜蒸气激光,在眼底光斑直径为2 mm,照光时间为100 s的照光条件下,相同功率密度下灰兔视网膜损伤重于白兔。结论在照光时间相同和光斑大小不变的条件下,眼底色素含量是影响激光生物学效应的重要因素。