红芪活性组分抗骨质疏松作用的谱效关系研究

目的研究红芪抗骨质疏松药效与HPLC指纹图谱的相关性。方法建立去卵巢大鼠所致骨质疏松模型,红芪(S1)的不同提取部位ig给药,选择红芪抗骨质疏松活性最强的提取部位。采用HPLC法建立10批不同产地红芪乙醇提取部位指纹图谱,获取相应的药效数据,运用偏最小二乘法,进行相关性分析。将筛选出的活性物质单体作用于成骨细胞,验证其抗骨质疏松活性。结果红芪乙醇提取部位抗骨质疏松药效最强。经过相关性分析,该组分指纹图谱共确定9个共有峰,鉴定出的3种化合物中,腺苷、毛蕊异黄酮与药效呈正相关,芒柄花苷与药效呈负相关。体外验证实验结果表明毛蕊异黄酮可以提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。结论红芪抗骨质疏松作用是其所含各种成分共同作用的结果,腺苷、毛蕊异黄酮对药效有一定的贡献,且毛蕊异黄酮有促进成骨细胞分化的作用。     

补肾健骨方含药血清对ROBs和rBMSCs增殖、分化和矿化的影响

目的观察补肾健骨方含药血清对大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,r BMSCs)细胞活性及分化、矿化的影响。方法制备补肾健骨方含药血清,将ROBs和r BMSCs分为5%、10%、15%、20%、25%浓度含药血清组、无药血清组及传统诱导组,分别对各组ROBs和r BMSCs进行成骨诱导。MTT法检测ROBs和r BMSCs细胞的增殖情况;用试剂盒检测ROBs和r BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果不同浓度含药血清组与空白无药血清组、传统诱导组相比,均不同程度地促进ROBs和r BMSCs的增殖,使ALP活性提高,增加钙化结节数量和面积。其中含药血清浓度为20%时促进ROBs增殖分化作用最佳,浓度为10%时促进r BMSCs增殖分化效果最为显著。结论不同浓度补肾健骨方含药血清均能够促进ROBs和r BMSCs的成骨增殖、分化和矿化,分别在浓度为20%和10%时最佳。     

红芪中5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞和成骨细胞成骨分化的影响

目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离法培养rBMSCs;酶消解法分离培养ROBs;MTT法检测rBMSCs和ROBs细胞的增殖情况;试剂盒检测rBMSCs和ROBs的碱性磷酸酶(ALP)活性和Ca~(2+)含量;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果 5种成分均能不同程度促进rBMSCs和ROBs的增殖,提高ALP活性,增加Ca~(2+)含量,增加钙化结节面积和数量(P0.05)。其中毛蕊异黄酮促进rBMSCs的成骨分化作用最佳,美迪紫檀素促进ROBs的成骨分化作用最佳,毛蕊异黄酮次之。结论这5种黄酮类成分对rBMSCs和ROBs的成骨功能均有一定程度地改善作用,而毛蕊异黄酮对2种细胞表现的成骨活性均较佳,可发展作为良好的骨诱导活性因子。     

siRNA沉默ERK5基因对MC 3 T3-E1成骨细胞增殖及 BMP2/BMP7的影响

目的观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖,及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术(siRNA)沉默ERK5基因,分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞,筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度。噻唑蓝实验(MTT)检测转染后12 h、24 h、36 h和48 h细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测ERK5、BMP2和BMP7 mRNA的表达。Westernblot检测不同干预组BMP2及BMP7蛋白的表达变化。结果当ERK5siRNA浓度为60 nmol/L时,MC3T3-E1成骨细胞的ERK5 mRNA的表达下降最为显著,沉默率为76.8±2.2%(P0.01)。ERK5 siRNA转染后12 h、24 h、36 h,成骨细胞的增殖受到明显抑制(P0.05),但48 h转染组未发现明显变化(P0.05)。ERK5 siRNA转染24 h后,实时荧光定量PCR结果显示:空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7 mRNA变化水平无显著性差异(P0.05),但ERK5 siRNA转染组的BMP2/BMP7 mRNA明显降低(P0.05);Westernblot结果显示,空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7蛋白未发现明显变化(P0.05),但转染组成骨细胞的BMP2/BMP7显著降低(P0.05)。结论 ERK5 siRNA对MC3T3-E1成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显抑制作用。     

红芪多糖3中4个组分的单糖组成分析及多糖含量测定

 目的 对红芪多糖3（HPS-3）进行分离纯化,研究红芪多糖3中4个组分单糖组成以及多糖含量测定。方法 红芪多糖经水提醇沉,Sevag法脱蛋白,H₂O₂脱色,醇沉,透析,再经DEAE-cellulose 52和 Sephadex G-100柱色谱纯化,得到HPS-3-A、HPS-3-B、HPS-3-C、HPS-3-D 4个组分;HPGPC法分析, 4个组分均为单一组分; TLC法与GC法分析4个组分单糖组成;改良苯酚硫酸法测定4个组分中多糖含量。结果 HPS-3-A主要由葡萄糖组成,多糖含量为99.2%;而HPS-3-B、HPS-3-C、HPS-3-D主要由阿拉伯糖与半乳糖组成。多糖含量依次为96.5%,95.3%,95.2%。结论 本实验为红芪多糖3构效关系研究提供基础。
     

周期性和持续性流体剪切力对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的影响

目的:观察两种不同加载模式的流体剪切力(周期性或持续性)对MC3T3-E1成骨细胞增殖以及骨保护素(OPG)、细胞核因子k B受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的影响,同时探讨影响成骨细胞功能的最佳流体剪切力加载模式。方法:对MC3T3-E1成骨细胞分别加载生理强度为12 dyn/cm2的周期性流体剪切力或持续性流体剪切力。其中,持续性模式采用12 dyn/cm2的流体剪切力,加载成骨细胞2 h,静息2 h;周期性流体剪切力采用12 dyn/cm2流体剪切力加载成骨细胞30 min,然后静息3 0min,如此往复循环4次,总的加力时间为2 h。最后,MTT法检测不同加载模式下成骨细胞的增殖情况,Westernblot检测两组成骨细胞OPG、RANKL蛋白的表达影响。结果:MTT结果显示,两种加载模式的流体剪切力均能够显著促进成骨细胞的增殖(P<0.05),与持续性流体剪切力相比,周期性流体剪切力更能有效的促进成骨细胞的增殖(P<0.05)。另外,两种模式的流体剪切力均能有效地调控MC3T3-E1成骨细胞OPG、RANKL的表达(P<0.05)。但与持续性流体剪切力相比,周期性流体剪切力对成骨细胞OPG蛋白的促进作用更为显著(41.34%±5.37%vs 80.42%±4.19%,P<0.05);对成骨细胞RANKL蛋白的抑制作用更为明显[(24.17±5.92)%vs(8.45±2.18)%,P<0.05]。结论:与持续流体剪切力相比,周期性流体剪切力对成骨细胞增殖以及OPG、RANKL蛋白有更显著的调节作用。     

红芪多糖的复合酶联合超声提取工艺、理化特性及抗氧化活性的研究

利用复合酶联合超声波提取技术(MC),以红芪多糖得率和含量为综合指标,通过单因素和正交试验,筛选最优提取组合,并分析了复合酶联合超声提取多糖(HPS-MC)的不同组分和热水浸提多糖(HPS-R)的物理化学特性及体外抗氧化活性。结果表明,复合酶配比对红芪多糖得率和含量影响均达到显著效应,而超声功率能显著提高红芪多糖含量;最佳工艺参数为复合酶配比1∶1、超声功率105 W、超声时间60 min、酶解p H 5,多糖得率和质量分数分别为(14.01±0.64)%,(92.45±1.47)%;与HPS-R相比,HPS-MC的相对分子质量、绝对黏度和蛋白质含量均降低,而糖醛酸含量增加;抗氧化体系中,多糖质量浓度在1~7 g·L~(-1)时,HPS-MC比HPS-R的抗氧化活性高,且相对分子质量最低的HPS-MC(80%)随试验浓度的增大呈显著量效关系。综上所述,MC是一种简单方便、经济环保的提取技术,该法提取的HPS具有明显的抗氧化活性。     

氟比洛芬酯复合丙泊酚用于无痛结肠镜的观察

目的:研究氟比洛芬酯复合丙泊酚麻醉在无痛结肠镜检查中的临床观察。方法:60例行无痛结肠镜检查的患者随机分为A组(采用丙泊酚麻醉)和B组(静脉滴注氟比洛芬酯50 mg后采用丙泊酚麻醉)。观察给药结束至睫毛反射消失时间、手术持续时间、术毕清醒时间、全程丙泊酚用量;麻醉期间及麻醉后舌后坠、呼吸暂停、苏醒期兴奋躁动、术后恶心、呕吐、头晕等的发生率以及检查后镇痛效果。结果:B组SpO2明显高于A组;苏醒时B组HR仍慢于A组和麻醉前;B组麻醉中出现舌后坠、呼吸暂停,苏醒期兴奋躁动及术后恶心、呕吐明显低于A组;B组术后镇痛优者多于A组。结论:氟比洛芬酯复合丙泊酚用于无痛结肠镜检查麻醉,效果确切,不良反应少,术后疼痛较轻,无中枢抑制,留观时间短。     

二十五昧松石丸的质量标准研究

藏医药是中国民族医药中重要的组成部分,许多具有非常显著的疗效,尤其对于疑难杂症更有一些其它药物所无法比拟的治疗效果.但由于基础研究较为薄弱,缺乏现代质量控制方法,极大地制约了藏医药的发展.因此研究藏药质量标准,制定科学可控质量标准,对于推动藏医药的发展具有重要的意义.