经皮肾镜取石术治疗肾结石出血风险因素分析

目的 探讨影响PCNL出血的风险因素. 方法 回顾性分析2008年1月至2011年1月218例肾结石患者的临床资料.男131例,女87例.年龄19 ～70岁,平均48岁.其中鹿角形结石146例.7例有开放或PCNL手术史.合并糖尿病41例,高血压病89例.本组手术均由同一术者完成.对患者的性别、年龄、体质量指数、伴随疾病、结石类型、穿刺肾盏、通道数量、通道大小、手术时间及术者经验等相关因素进行单变量及多变量回归分析. 结果 207例手术获得成功,11例因通道建立失败改开放或终止手术.采用单通道碎石176例,多通道碎石31例.采用18 F通道163例,24 F通道44例.平均手术时间78.4 min.输血16例,输血率为7.7％,1例行选择性肾动脉栓塞,1例行肾脏切除.单变量分析中,鹿角形结石(P =0.034)、合并糖尿病(P =0.030)、通道数量(P=0.019)、通道大小(P =0.008)及手术时间(P=0.001)是影响输血率的主要因素.平均血红蛋白下降11.2 g/L.其中鹿角形结石患者平均血红蛋白下降(12.4±4.6)g/L,非鹿角形结石患者(8.3±3.3)g/L;单通道碎石(10.8±3.2)g/L,多通道碎石(13.2±3.5)g/L;18F通道碎石(10.5±2.5)g/L,24 F通道碎石(13.2±4.4) g/L;糖尿病患者(12.7±5.3) g/L,非糖尿病患者(10.8±4.1)g/L.鹿角形结石(P ＜0.001)、合并糖尿病(P =0.015)、通道数量(P =0.016)、通道大小(P ＜0.001)及手术时间(P ＜0.001)是影响血红蛋白下降的主要因素.年龄、性别、体质量指数、合并高血压、穿刺位置、既往手术史及术者经验不是影响出血的主要因素.多变量回归分析中,鹿角形结石( OR=1.92)、合并糖尿病(OR=1.75)、多通道(OR =2.45)、大通道(OR=1.32)及手术时间过长(OR=1.66)显著增加出血的风险. 结论 鹿角形结石、多通道、大通道、合并糖尿病及手术时间过长可显著增加PCNL出血的风险.     

超声引导下经皮输尿管镜钬激光碎石术治疗老年和青年肾结石患者的临床对比

对于老年肾结石患者,体外震波碎石和药物保守治疗通常被认为是有效的治疗方法,而经皮输尿管镜手术或经皮肾镜取石手术(PCNL)则被认为是有着较高的风险〔1〕。然而,对于较大的和复杂的老年肾结石,经皮输尿管镜手术或PCNL有时是必需的选择。但由于老年患者心肺储备功能较差,使得其耐受     

RNA干扰Twist基因真核表达载体的构建与筛选

目的： 构建编码Twist mRNA 的短发卡样RNA （shRNA ）质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA 质粒表达载体。方法： 以Twist mRNA 编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA 质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,构建后通过PCR 酶切电泳和质粒测序进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达Twist基因的膀胱癌T24细胞,RT-PCR 和Western blotting 分别从mRNA 和蛋白质水平检测抑制效果。结果： 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出400 bp的目的条带,插入片段测序结果与合成的shRNA 结果一致。靶向Twist基因的shRNA 对膀胱癌T24细胞中Twist基因mRNA 抑制率为90%,蛋白质抑制率为86%,两种干扰质粒中shRNA1干扰效果最明显。结论： 成功构建了靶向Twist 基因的shRNA 质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA 质粒表达载体为pGenesil-shRNA1 质粒。     

RNA干扰Twist基因对人膀胱癌T24细胞化疗敏感性的影响

目的 构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA ( shRNA) 质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性.方法 体外构建Twist基因shRNA的表达质粒,脂质体法介导将其转染入T24细胞.实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组.采用RT-PCR法和Western印迹法检测转染后Twist mRNA 及蛋白的表达.使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及流式细胞术(FCM)测定Twist shRNA 转染T24细胞后细胞对HCPT敏感性的改变.结果 Twist shRNA 转染组细胞Twist mRNA和蛋白的表达与其他两组相比明显下调(P＜0.05);HCPT敏感性与正常对照组相比明显提高(P＜0.05).结论 靶向Twist 基因的序列特异性shRNA 可增强T24细胞对HCPT的敏感性.     

抑癌基因TIP30真核表达载体的构建和序列测定

目的 构建抑癌基因TIP30的真核表达载体并进行序列测定.方法 从人正常肾组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增TIP30的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并进行序列测定.结果 提取人正常肾组织总RNA并经RT-PCR扩增后,产生特异性条带,位置在800 bp左右,与预期相符;pcDNA3.1-TIP30用BamH I和EcoR I双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;TIP30基因编码区序列与GenBank登录号AF039103文献报道的序列同源性为100%,目的 基因与载体正确连接.结论 成功克隆了抑癌基因TIP30的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,为后续转染和表达的实验研究奠定了基础.     

RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的 研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响.方法 体外构建Twist基因的shBNA表达载体,Li-pefectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变.结果 Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),s期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05).结论 Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖.     

后腹腔镜肾部分切除术治疗肾脏小肿瘤的疗效及安全性评价

目的 探讨后腹腔镜肾部分切除术治疗肾脏小肿瘤的有效性和安全性.方法 回顾性分析28例后腹腔镜肾部分切除术及24例同期行开放性肾部分切除术患者的临床资料,比较两种术式在手术时间、术中估计出血量、术后镇痛药物使用剂量、胃肠道功能恢复时间、术后住院时间、并发症发生率及肿瘤学效果等方面的差异.结果 后腹腔镜组与开放手术组患者在性别、年龄、肿瘤位置及肿瘤大小上的差别无统计学意义.后腹腔镜组1例因动脉分支出血中转开放手术,其他手术均获成功.后腹腔镜组平均手术时间118.4±16.2 min较开放组手术时间102.3±22.4 min长,但二者之间差异无统计学意义.开放组术中估计出血量142±12 ml,后腹腔镜组估计出血量126±14 ml,二者差异无统计学意义.后腹腔镜组热缺血时间26.6±4.2 min,开放组16.5±1.8 min,组间差异显著.后腹腔镜组在镇痛药用量、胃肠道功能恢复时间、及术后住院日等方面明显均优于开放组(P<0.05).所有患者术后血肌酐均在正常水平.两组患者术后并发症的发生率相当(25.9%vs 16.7%),无术后大出血、尿瘘等严重并发症出现.平均随访时间17(1～30)个月,两组患者均未见肿瘤复发及转移.结论 与传统开放手术相比,后腹腔镜下肾部分切除术具有一定的技术难度,但仍是一种安全、有效的手术方式,而且具有创伤小、患者痛苦少、恢复快、住院时间短等优点.     

肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义

目的 探讨肾细胞癌组织中Tat结合蛋白(TIP30)的表达及其临床意义.方法 采用S-P免疫组织化学染色法对65例肾细胞癌组织及其癌旁组织中TIP30蛋白表达进行检测.同时采用Western印迹方法检测22例肾细胞癌及其癌旁新鲜标本中TIP30蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示,TIP30蛋白阴性表达率在肾癌组中为49.2%(32/65),显著高于癌旁组织[10.8% (7/65)](P＜0.01)差异有统计学意义;TIP30蛋白的阴性表达在肾癌各病理类型中差异无统计学意义(P＞0.05);TIP30蛋白在肾细胞癌中的阴性表达与浸润程度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.05)以及肾静脉癌栓有关(P＜0.05).Western印迹结果显示在77.3%(17/22)的肾细胞癌组织中有TIP30蛋白低表达.结论 TIP30蛋白的阴性表达与肾细胞癌发生、发展有关;作为抑癌基因产物,TIP30蛋白可在蛋白质水平为临床估计病情及预后提供一个有意义的客观指标.     

抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用

目的：筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法：采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。 结果：与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G₀-G₁期细胞比例显著增加,S和G₂-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论: 786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。     

精浆抗精子抗体对男性不育者精液参数和精子顶体酶活性的影响

目的:探讨精浆抗精子抗体(AsAb)对男性不育者精液参数和精子顶体酶活性的影响。方法:用间接血凝法检测2367例男性不育患者精浆AsAb,比色法测定精子顶体酶活性。结果:2367例不育者精浆AsAb阳性率为8.9%,精液AsAb阳性组中精液量,精子密度,精子活率,a、b级活力精子率,畸形精子率与AsAb阴性组相比差异有显著性(P<0.001、P<0.05)。随精子密度、精子活率a、,b级活力精子率、精液量的减少,精液粘度的增高和精液液化时间的延长,精浆AsAb阳性率增高,差异有显著性(P<0.001、P<0.05),精浆AsAb阳性组与阴性组顶体酶活性,顶体酶活性正常组与异常组精浆AsAb阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论:精浆AsAb对男性不育者精液参数有影响,对精子顶体酶活性没有影响。