人热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的原核表达载体,诱导其表达并纯化.方法:应用PCR技术从人胆管癌组织中扩增出HSP 70基因片段,经T-A克隆连接到末端经平滑处理后的pMD18-T Simple质粒并测序.利用双酶切技术构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-HSP 70,并转化大肠杆菌JM 109,经IPTG诱导后表达得到HSP70融合蛋白.应用Glutathione-Sepharose4B亲和层析柱提纯融合蛋白,用生物素化凝血酶分离并纯化目的蛋白,最后行Wsetern blot鉴定.结果:PCR扩增结果与预计目的基因大小一致;序列分析与GeneBank中收录完全一致;重组表达载体pGEX-4T-1-HSP 70构建成功;Western blot结果显示目的蛋白可以与兔抗人的HSP70单克隆抗体特异性结合.结论:HSP 70编码序列已经成功克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,并在大肠杆菌JM 109中获得表达.     

枸杞多糖通过诱导巨噬细胞极化抗胰腺癌的研究

目的 探讨枸杞多糖 （LBP） 通过诱导巨噬细胞极化成一型巨噬细胞 （M1） 抗小鼠胰腺癌细胞 LTPA 的功效。方法 构建小鼠 CB-17SCID 皮下 LTPA 成瘤模型, 随机分为荷瘤模型组 （10 只） 及 LBP 治疗组 （10 只）, LBP 治疗组每日 10 mg/kg LBP 灌胃, 荷瘤模型组每日同等剂量的生理盐水灌胃。将含有相同数量的小鼠巨噬细胞 Raw264.7 随机分为不同 LBP 浓度的实验组和对照组, MTT 法检测各实验组与对照组中 Raw264.7 的光密度 （OD） 值; ELISA 法检测 LBP 质量浓度为 100 mg/L 的实验组与对照组中 Raw264.7 分泌白细胞介素 （IL） -12 及 IL-10 的水平; 流式细胞仪检测 LBP 质量浓度为 100 mg/L 的实验组与对照组中 Raw264.7 表面蛋白 CD16/32 及 CD206 的水平。小鼠荷瘤 3 周后剖瘤称质量并计算瘤体体积, 检测 LBP 对皮下肿瘤生长的影响, HE 染色和 KI-67 免疫组化法检测 LBP 对瘤组织镜下的改变及对 LTPA 增殖的影响。结果 100 mg/L LBP 对 Raw264.7 的生长有明显促进作用（P < 0.01）, 并使Raw264.7 高表达 CD16/32, 低表达 CD206; 高分泌 IL-12、 低分泌 IL-10。LBP 治疗组瘤块质量、 体积及 KI-67 的表达量显著低于荷瘤模型组 （P < 0.01）, 镜下肿瘤坏死区范围明显大于荷瘤模型组。结论 LBP 能够通过诱导巨噬细胞极化成 M1状态达到抗 LTPA 的作用。     

沉默CENP－N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响，并分析其可能机制。方法 利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平；以收集的143例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803及人胃黏膜细胞GES1为研究对象，qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平，Western blot检测CENP-N蛋白表达；体外培养胃癌SNU-1细胞株，分为空白对照组、siRNA-NC组(阴性对照组)、CENP-N-siRNA组(沉默CENP-N表达组)、通路激活剂组(CENP-N-siRNA+740Y-P组)。qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平；CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况；免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果 ...     

门脉高压症脾大部切除手术前后血流变指标观察

门脉高压症血液动力学研究显示：肝硬化时门脉压力升高是克服门脉压力重要的代偿机制，并与血液成分的改变以及它们之间的相互作用密切相关（１）．现代外科主要通过降低门脉压力达到治疗或预防静脉曲张、出血的问题。我院在动物实验成功的基础上设计了一种新的术式──脾大部切除肺包脾并大网膜包肺术。自旧８５年以来已收治肝硬化门肺高压症 １０３例，效果满意。现将其中资料较完整的 ２２ 例手术前后血液流变学检测结果分析如下：     

神经鞘瘤和神经纤维瘤的显微外科治疗

我们自1980～1989年采用显微外科方法切除神经鞘瘤和神经纤维瘤16例,获得满意疗效。1.临床资料:男12例,女4例;年龄12～66岁,平均34岁。病程半年～10年。神经瘤部位:臂丛神经2例、正中神经4例、桡神经     

高凝状态在断指再植中的系列研究

目的探讨高凝状态对断指再植后成活的影响。方法对４４８例断指再植进行血小板检测；在此基础上又对１０２例断指再植进行了血液凝固与抗凝固两个系统的生物化学测定及血液流变学检测。结果血小板增高与断指再植失败呈平行关系，血小板＞３００×１０９／Ｌ时，再植失败率高达５３．３％。当血小板计数及血小板粘附性升高，纤溶酶元及抗凝血酶活性明显下降，血液粘度增高，血液的凝血与抗凝血系统失衡时则处于高凝状态，断指再植失败率明显升高。结论高凝状态是断指再植失败的重要原因     

断指(肢)再植后血小板增多症

作者通过376例断指(肢)再植后血小板常规检测,发现有12例血小板>300×10~9/L,其发生率为3%。临床观察,血小板增多者极易发生吻合口血栓,其再植失败率明显高于血小板正常组。作者建议将血小板检测列入再植术后的常规检查,以指导断指再植术后的抗凝治疗。     

一种新的断指再植、皮瓣移植术后保温垫

断指再植和各种游离、岛状皮瓣转移术后,在室温低于25℃和肢体局部温度低的情况下,极易发生血管痉挛,导致手术失败。作者于1991年始研制了FS—Ⅰ型断指再植和FS—Ⅱ型皮瓣术后保温垫。经临床应用50例断指再植;20例皮瓣观察,该保温垫能使肢体局部温度均匀恒定在 38.5℃±1℃,有效地防止了血管痉挛的发生,现报告如下:     

断指患者手术前后血液流变学观察分析

断指再植的成功虽然与高水平的血管吻合密切相关。但血液的粘滞性是一个不可忽视的影响因素。为此我们对３０例断指患者手术前后血液流变学指标进行了对比观察。以探讨断指患者因疼痛、出血、微血管损伤及术中输液对血液的流动、凝固和粘滞性的影响。临床资料一般资料：３０例全系男性，年龄为１９—３０岁２４例，３０—３９岁６例，均为完全断离，其中１例为一手５指断离，２２例为一手２～３指断离，３例为一手１指断离。受伤情况：刀切伤２４例，电锯伤４例，铡刀伤２例。手术情况：手术时间最短３小时，最长１６小时，在臂丛麻醉下行断…     

浅谈眼痛与肝的辨证论治

眼痛是眼科常见的一种病证,其原因很多,如屈光不正、青光眼、虹膜睫状体炎、角膜炎等。但也有些原因不明的疼痛,如久视后眼球胀痛,甚至前额疼痛,产后眼球酸涩疼痛等不能解释其发病机理的治疗效果很差。中医所谓的“眼球疼痛”“球酸目涩”等均属此类。2年来,我们采用中医中药对20例患者进行了治疗,疗效显著,现报道如下。肝血不足型《素问·五藏生成篇》中说:“肝得血而能视”。故肝血畅旺,则眼目精明,若肝血不足,不能养目,则眼干涩疼,不能久视。常伴全身乏力,五心烦热,口干舌红少苔等。如陈某,男,46岁。1989年1月4日诊。久视后眼酸痛,前额痛,休息后稍好转。用维生素类药物治疗不见好转。眼部检查:右眼视力1.5,左眼视力1.2,外眼正常,眼底正常,未