人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系DNA polβ的表达

目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系，测定耐药细胞系DNA聚合酶β（DNA polβ基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药．人肺腺癌细胞系（A549）为诱导对象，逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导，建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A549／TXL20。采用MTT法检测A549／TXL20耐药指数，同时对顺铂、长春新碱、5氟脲嘧啶、丝裂霉素和羟基尿素五种药物进行交叉耐药检测。RC—PCR法和Western blotting法分别测定细胞内DNApolβ表达水平。结果A549／TXL20对紫杉醇及其他五种抗癌药物均有不同程度的耐药性。A549／TXL20细胞中DNA polβ mRNA及蛋白的表达水平均高于A549细胞（P〈0．05）。结论A549／TXL20具有多药耐药表型，耐药性产生可能与细胞内DNA polβ表达增高有关。     

经阴道子宫肌瘤剔除与经腹子宫肌瘤剔除的对比分析

目的探究经阴道子宫肌瘤剔除术的临床疗效。方法收集127例子宫肌瘤患者,按治疗方法分为两组,对照组行经腹子宫肌瘤剔除术,观察组行经阴道子宫肌瘤剔除术,比较两组患者手术时间、手术出血量、术后肛门排气时间、住院时间以及术后患者疼痛程度。结果两组患者的手术时间、手术出血量组间比较无显著差异,P>0.05;观察组患者肛门排气时间和住院时间均少于对照组,P<0.05;观察组患者术后重度疼痛比例低于对照组,P<0.05。结论经阴道子宫肌瘤剔除术创伤小、恢复快、术后痛苦轻、腹部无瘢痕,安全性高,临床治疗效果显著。     

神经肽Y对成年大鼠睡眠的影响

目的 :探讨神经肽Y(NPY)与睡眠 -觉醒周期的关系。方法 :4 4只成年雌性SD大鼠 ,随机分为 6组 ,分别为侧脑室微量 (5 μl)注射NPY(1g/L)、α - 1受体阻断剂育亨宾 (30 μmol/L) ,育亨宾 +NPY ,α - 2受体阻断剂哌唑嗪 (30 μmol/L) ,哌唑嗪 +NPY及生理盐水 (对照组 )。采用多导描记技术观察大鼠在清醒状态下 ,统计给药后各组大鼠 6h的慢波睡眠 (SWS)、快眼动睡眠 (REMS)及总睡眠 (TS)时间。结果 :单独注射NPY可以促进大鼠的SWS ;先给予育亨宾再给予NPY ,大鼠SWS、REMS及TS时间较生理盐水对照组显著降低 (P <0 .0 1 )。单独给予育亨宾、哌唑嗪或哌唑嗪 +NPY ,对大鼠睡眠无明显影响。结论 :NPY具有一定的促眠作用 ,且与α- 2受体有关     

海嘧啶对小鼠S180和EAC肿瘤细胞 P53蛋白表达的影响

目的观察海嘧啶对小白鼠S180肿瘤和EAC肿瘤细胞P53蛋白表达的影响.方法将含有传代后的小鼠S180肿瘤细胞和EAC肿瘤细胞的培养瓶各分为A,B1,B2,B3,B4 5组,B1～ B4组分别加入海嘧啶,使培养液中药物的终浓度分别为50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L,A组加入等体积的培养液(对照组).用Western blot法测定瘤细胞P53蛋白表达.结果S180肿瘤细胞和EAC肿瘤细胞P53蛋白表达率分别是100%和90%;海嘧啶100～400 mg/L时能抑制肿瘤细胞P53蛋白的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞突变型P53蛋白表达有关.     

海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549/T及其亲代细胞的作用观察和机制的初步研究

目的:探讨海嘧啶对肺腺癌多药耐药细胞A549/T及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法:应用(mincroculturetetrazolium assay,MTT)比色法和光镜观察等方法,观察A549/T及其亲代细胞在海嘧啶作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化。结果:MTT比色结果表明,海嘧啶对A549/T细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用,并且在10~100μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A549/T细胞在海嘧啶作用12~24 h较亲代细胞敏感(P<0.01),在48 h开始表现出其药物耐受性(P<0.01),在72 h则与亲代细胞间无显著性差异(P>0.05);光镜观察结果发现,A549/T细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多,出现细胞核固缩,或碎裂形成大小不等的核碎片,最后可见细胞死亡后的残骸。结论:海嘧啶对肺腺癌多药物耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用,并可能通过透导肿瘤细胞坏死,从而发挥其细胞毒作用。     

西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐(glucosinolates,GS)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法:不同浓度GS处理肝癌HepG2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察GS对HepG2细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡的影响。结果:GS可抑制HepG2细胞的增殖,其GI50为318.4μg·mL-1;300μg·mL-1的GS作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期凋亡的形态;300、600μg·mL-1的GS对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;100、200、300μg·mL-1的GS作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2 浓度显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:GS能够诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与GS升高细胞内Ca2 浓度有关。     

人CD154基因真核表达载体的构建及在Eca109细胞中的表达

目的：构建人CD154基因真核表达质粒pcDNA3．1-CD154，初步观察转染该质粒后Eca109细胞的细胞生物学特性。方法：人外周血单个核细胞体外经PHA激活后提取总RNA，用RT—PCR技术扩增人CD154cDNA全长并构建真核表达质粒pcDNA3.1—CD154，用Lipofectamine^TM 2000介导pcDNA3．1-cDl54质粒转染食管癌Eca109细胞株，RT—PCR检测转染细胞中CD154 mRNA的表达，观察细胞生长特征。结果：用T7／SP6通用引物测序证实重组质粒中插入片段为正向插入的人CD154基因。pcDNA3．1-CD154转染Eca109细胞后细胞异型性明显改善，生长速率减慢。结论：pcDNA3．1-CD154构建成功；转染该质粒的Eca109细胞生物学特性发生改变。     

食管癌组织中线粒体DNA突变检测

目的：检测食管癌组织中线粒体DNA(mtDNA)的突变。方法：提取8例食管癌组织的mtDNA；PCR扩增mtDNA的控制区，纯化PCR产物、与T载体连接，转化人肠杆菌，筛选出阳性克隆，用引物T7／SP6做PCR鉴定后测序，与GenRank序列对比。结果：8例标奉mtDNA的控制区共有36个位点发生突变，其中转换32个，颠换4个；同义突变13个，错义突变23个。结论：mtDNA突变很可能在食管癌的发生中发挥一定作用。     

南瓜荞麦混合喂饲对糖尿病大鼠降糖作用的观察

目的:观察南瓜、荞麦混合喂饲对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法:将成年健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病模型组、南瓜对照组和南瓜荞麦治疗组。采用腹腔注射四氧嘧啶法制备大鼠糖尿病模型,采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度,观察各组大鼠饮水量、摄食量、体重和血糖的变化。结果:南瓜荞麦治疗组和南瓜对照组大鼠饮水量[(64.3±7.9)ml、(81.7±10.5)ml]、摄食量[(32.1±2.7)g、(38.8±5.4)g]、血糖[(8.33±1.85)mmol/L、(11.92±2.83)mmol/L],均较模型组[(151.4±9.8)ml、(45.3±3.2)g、(24.78±3.51)mmol/L]有显著降低。南瓜荞麦治疗组和南瓜对照组大鼠体重[(224.6±7.5)g、(221.0±10.3)g],较模型组[(194.0±11.2)g]有显著提高。南瓜荞麦治疗组的饮水量、摄食量及血糖均较南瓜对照组有显著减少,其体重较南瓜对照组有显著增加。结论:南瓜荞麦混合饲养对糖尿病大鼠具有一定的治疗作用,且疗效较南瓜单独饲养明显增加。     

DNA聚合酶β靶向siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的：构建DNA聚合酶β（polβ）靶向的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体。方法：根据GenBank中人DNApolβ基因（M13140）的全长序列,利用设计分析软件设计2个DNApolβ靶向发卡样siRNA结构,退火后形成双链,克隆入表达载体pslience2.0-GFP,得到重组质粒pslience2.0-GFP-sipolβ1和pslience2.0-GFP-sipolβ2。通过限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定。结果：经酶切鉴定寡核苷酸已成功插入表达载体pslience2.0-GFP,DNA序列分析表明插入片段序列与合成的siRNA序列相同。结论：成功构建了靶向DNApolβsiRNA真核表达载体。