汉滩病毒体外诱导热休克蛋白70的表达

目的定量研究汉滩病毒（HTNV）体外诱导细胞热休克蛋白70（HSP70）及HSP70 mRNA的表达规律。方法以HTNV敏感细胞株Vero-E6为对象，体外实验性感染Hantaan 76—118。采用原位杂交、免疫细胞化学染色法及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察感染后72h内HSP70的表达并加以定量分析。结果与模拟感染组相比，Hantaan 76—118感染Vero-E6细胞后0．5h，HSP70 mRNA开始升高，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。Hantaan 76—118感染后2h可检测到HSP70蛋白表达增加，于感染后12h达高峰，并持续高表达至72h（P＜0．05）。结论体外感染HTNV可诱导Vero-E6细胞产生热休克反应并表达HSP70，这种快速、持久的应激反应，可能对HSP70持续发挥其细胞保护作用具有重要意义。     

先天性脊柱畸形手术治疗的总体疗效与并发症

目的:评估先天性脊柱畸形手术治疗的总体效果和并发症。方法 :回顾性分析2007年4月～2018年1月本团队手术治疗的431例先天性脊柱侧凸患者,其中男158例,女273例,平均年龄14.9±6.2岁。术前均行全脊柱CT平扫和全脊柱MRI,排查椎管内畸形情况;心脏彩超和腹部B超检查排除其他内脏畸形。手术方式包括:生长撑开型非融合矫形技术(包括生长棒和人工钛肋)治疗40例,后路半椎体切除短节段固定融合术48例,后路长节段矫形固定融合术(可含1、2级截骨)89例,后路截骨(3级及以上截骨)矫形长节段固定融合术254例。每位患者均于术后3个月、6个月、1年和2年及以上时间进行随访。术前、术后及随访时均拍摄站立位全脊柱正侧位X线片,测量脊柱侧凸Cobb角、矢状面平衡(sagittal vertical axis,SVA)及冠状面平衡(C7PLCSVL)。统计手术时间、术中出血量和手术并发症情况。结果:431例患者合并椎管内畸形351例次、合并其他内脏畸形24例次。平均手术时间为412.4±150.6min,平均术中出血量为1879.9±1727.6ml,平均随访时间48.7±9.3个月。脊柱侧凸术前平均Cobb角为68.88°±27.55°,术后平均Cobb角为28.86°±18.90°,末次随访时30.77°±19.80°;SVA术前平均为22.15±19.37mm,术后24.15±22.22mm,末次随访时19.75±16.06mm;C7PL-CSVL术前平均为17.37±15.47mm,术后21.95±47.29mm,末次随访时13.03±12.39mm,末次随访的脊柱侧凸Cobb角和C7PL-CSVL与术前比较均有统计学差异(P0.05)。术后肺部并发症49例、神经并发症30例、内固定相关并发症20例、术后感染10例以及脑脊液漏8例。结论:先天性脊柱侧凸手术矫形效果良好,但手术相关并发症风险较高,术后并发症总体发生率为30.16%,其中肺部并发症和神经并发症最为常见。     

脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸

目的:探讨脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸的安全性和有效性。方法:回顾性分析2007年6月~2013年6月在我院采用脊柱截骨手术治疗的23例合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸患者。其中男6例,女17例;手术时年龄16.9±3.4岁(10~23岁)。腰骶部疼痛8例,其中5例仅表现为腰骶部疼痛,神经功能损害18例。术前冠状位Cobb角95.4°±25.2°(65°~156°)。Ⅰ型脊髓纵裂9例,Ⅱ型脊髓纵裂14例。脊髓圆锥位置均在L3水平以下。对合并Ⅰ型脊髓纵裂伴脊髓拴系的患者,采用骨性纵隔切除、一期脊柱截骨矫形;合并Ⅱ型脊髓纵裂伴脊髓拴系的患者单纯行一期脊柱截骨矫形(未处理纤维纵隔)。其中行全脊椎截骨13例,经椎弓根截骨10例。术前、术后3个月和末次随访时分别测量患者侧凸Cobb角,并按脊柱裂神经功能评分(SBNS)分级评估神经功能恢复情况。结果:手术时间571.1±136.5min(310~835min);术中失血量4888.3±2482.3ml(500~9600ml)。随访38.9±18.3个月(24~79个月)。术后冠状面Cobb角33.7°±15.9°(3°~73°),较术前明显改善(P0.05),矫正率平均为(62.3±14.1)%;末次随访时冠状面Cobb角37.4°±17.2°(5°~82°),矫正率平均为(58.1±14.7)%,较术后平均丢失4.2°±2.3°,与术后比较无明显矫形丢失(P0.05),但与术前相比有明显改善(P0.05)。末次随访时,18例患者神经损害症状获得不同程度改善,其中13例术前SBNS神经功能分级为Ⅱ级者术后恢复至Ⅰ级;2例Ⅲ级恢复至Ⅱ级;另外3例神经损害评分提高,SBNS分级维持不变,脊柱侧凸畸形及局部疼痛明显好转。围手术期出现并发症5例,其中2例术后出现单侧下肢肌力下降,1例术后2周下肢肌力恢复至4级,另1例于术后3个月恢复至术前水平,术后2年随访肌力基本恢复正常;术中发现胸膜破裂1例,术后脑脊液漏1例、泌尿系感染1例。所有病例术后无伤口感染、假关节形成、内固定松动/断裂及永久性神经损害并发症。结论:脊柱截骨术治疗合并脊髓纵裂伴脊髓拴系综合征的先天性脊柱侧凸患者安全有效,且对神经功能恢复有促进作用。     

汉坦病毒体外感染Vero-E6细胞诱导多种热休克蛋白的表达

目的：观察汉坦病毒（HV）体外感染非洲绿猴肾上皮细胞（Vero-E6细胞）诱导热休克蛋白（HSP）的表达并探讨其与病毒结构蛋白的相互关系。方法：采用HV76-118株体外实验性感染Vero-E6细胞,随机分为对照组和病毒感染组,运用免疫细胞化学染色、Western blot及双特异性抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）,观察HV感染后HSP27、HSP70、葡萄糖调节蛋白（Grp94）3种HSP的表达情况,并分析上述HSP与病毒核衣壳蛋白（NP）之间的相互关系。结果：HV76-118株感染Vero-E6细胞24 h后,免疫细胞化学染色法可检出HV-NP阳性信号。Westernblot结果表明,与对照组相比较,HSP27、HSP70、Grp94的表达水平在感染后24 h显著升高（P〈0.05,n=5）。更为重要的是,ELISA检测发现HV-NP同时与HSP27、HSP70、Grp94呈复合物形式存在。结论：HV体外感染可诱导Vero-E6细胞高表达多种HSP,且能与病毒结构蛋白形成复合物,上述过程可能参与了HV-宿主细胞的相互作用。     

抗体工程与病理学

抗体是一种免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）。抗体工程指的是抗体的人工改造、构建与重组。如同桥梁工程、水力工程是人力对桥梁及水力的构建与改造一样。抗体工程可以分为两种，一种是抗体化学工程，如抗体的标记，抗体与亲合物质结合以及EnVision法等。一般所谓抗体工程是指抗体的基因工程，是通过基因操作、扩增、酶切、连接、构建以及重组来实现的。乍看起来，抗体工程与病理学，特别是诊断病理学，并不那么亲切。但是，实地考查起来，它们之间也不那么遥远，而且随科学的发展，正让它们越走越近。     

不同浓度离子作用于颈动脉小体对血压的影响

背景:颈动脉窦存在压力感受器,是离子对血压调节最敏感的部位,在血压的调节中起到重要的作用,但不同离子通过颈动脉窦对血压的调节作用还不十分清楚。目的:观察用不同浓度、不同离子浸泡颈动脉窦后血压的变化。设计:自身对照实验。单位:解放军第四军医大学基础部教学实验中心。材料:实验于2000-12/2001-06在解放军第四军医大学基础部教学实验中心机能实验室完成。选取纯种新西兰兔18只,实验动物标准为二级,雌雄不限,体质量(2.0±0.2)kg,由解放军第四军医大学动物实验中心提供。方法:采用随机数字表法将白兔分为Na 组、K 组和Ca2 组,每组6只。将家兔麻醉后,气管插管,分离两侧颈动脉,一侧分离出颈动脉窦,另一侧进行血管插管并记录血压,用加液枪于颈动脉窦外分别由低浓度到高浓度滴加Na 、K 和Ca2 溶液,将颈动脉窦完全浸泡;记录每次加液前血压的基础值和加液后血压变化的峰值。主要观察指标:家兔颈动脉血压的基础值和加液后血压变化的峰值。结果:0.15,1.5mol/L的高浓度Na 加液后血压为(97±12),(83±17)mmHg,与基础值(106±14),(105±12)mmHg比较有显著的降血压作用(t=2.946,P<0.05);0.4mol/L的高浓度K 有显著的降血压作用[(106±12),(64±13)mmHg,(t=13.496,P<0.01)],其他浓度的K 降血压作用不明显(P>0.05);0.07mol/L的低浓度Ca2 加液后血压为(113±16)mmHg,与基础值(103±12)mmHg比较有显著的升血压作用(t=-3.627,P<0.01)。结论:Na 、K 和Ca2 可以通过直接作用于颈动脉窦调节血压。高浓度的Na 、K 具有降压作用,低浓度的Ca2 具有升压作用,这可能是血压调节的一种重要机制。     

热休克蛋白70、葡萄糖调节蛋白94和IgG在人肺癌组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白70(Hsp70)、葡萄糖调节蛋白94(Grp94)、IgG在人肺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学方法结合病理学图像分析系统研究40例肺癌组织中Hsp70、Grp94和IgG的表达.并用免疫荧光双标染色及激光共聚焦技术研究三者的定位关系.结果:人肺癌组织中Hsp70、Grp04、IsG都有高表达,阳性率分别为65%(26/40)、45%(18/40)和82.5%(33/40),Hsp70阳性定位胞核胞质,Grp94和IgG阳性定位主要在胞质,平均光密度值分别为(5.10±0.32)、(3.52±0.35)和(8.12±0.31).26例Hsp70阳性的肺癌病例中有10例与IsG有共定位关系,18例Grp94与IgG有共定位关系.结论:Hsp70、Grp94和IgG在肺癌组织中高表达,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用;肺癌肿瘤细胞表达的ISG与rap70、Grp94分别存在一定共定位关系,其在肿瘤的发展中可能具有协同作用或者在肺癌组织中存在Hsp70-IgG、Grp94-IgG和Hsp70-GW94-IgG复合物的形式.     

骨盆入射角与腰椎前凸角匹配度对强直性脊柱炎后凸畸形矫形术后矢状面平衡的影响

【摘要】 目的：探讨骨盆入射角与腰椎前凸角匹配度（pelvic incidence and lumbar lordosis mismatch,PI-LL）对强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）后凸畸形矫形术后脊柱骨盆矢状面平衡的影响。方法：回顾性研究2010年1月~2019年10月本团队行改良经椎弓根椎体截骨术治疗的85例AS后凸畸形患者,男75例,女10例;年龄37.1±8.8岁（20~67岁）,其中63例行单节段截骨矫形,22例行双节段截骨矫形。脊柱全长侧位片上测量术前、术后（3~4周）及末次随访时脊柱骨盆矢状面参数：骨盆入射角（pelvic incidence,PI）、骨盆倾斜角（pelvic tilt,PT）、骶骨倾斜角（sacral slope,SS）、腰椎前凸角（lumbar lordosis,LL）、PI-LL、截骨角（osteotomized vertebral angle,OVA）和矢状面躯干偏移（sagittal vertical axis,SVA）。术前及末次随访时采用脊柱侧凸研究学会-22（Scoliosis Research Society-22,SRS-22）问卷和Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）评估患者的肢体功能和生活质量。末次随访时SVA>5cm为脊柱矢状面失衡,PT>25°为骨盆矢状面失衡。通过Pearson相关系数分析术后PI-LL与末次随访SVA和PT的相关性,并运用受试者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线和最大约登指数计算术后PI-LL的阈值,获得PI-LL的最佳匹配度。根据术后PI-LL是否满足最佳匹配度分组,分析不同术后PI-LL对末次随访脊柱骨盆矢状面序列的影响。运用线性回归分析腰椎OVA与PI-LL矫正值的线性关系,计算线性回归方程。结果：85例AS患者术后平均随访30.8±6.3个月（24~84个月）,末次随访时LL（-31.6°）、PT（31.8°）、SS（15.5°）、PI-LL（16.7°）和SVA（8.6cm）均较术前明显改善（P<0.05）,ODI（23.45%）和 SRS-22（3.91分）评分显著性优于术前（P<0.05）。术后PI-LL与末次随访时的SVA和PT呈显著性正相关（r=0.525和0.659,P<0.01）。以末次随访时SVA为状态变量, 通过ROC曲线分析获得术后PI-LL的阈值为12.8°;以末次随访时的PT为状态变量,计算得到术后PI-LL的阈值为10.5°。当术后PI-LL≤10.5°时,可同时满足预防脊柱和骨盆矢状面失衡的要求。与术后PI-LL＞10.5°组比较,术后PI-LL≤10.5°组患者末次随访时PT（25.4° vs 36.6°）、LL（-40.8° vs -24.1°）、PI-LL（4.0° vs 26.2°）和SVA（5.6cm vs 10.9cm）更小（P<0.05）,脊柱（36.1% vs 75.5%）和骨盆（38.9% vs 85.7%）矢状面失衡率更低（P<0.05）。腰椎OVA与PI-LL矫正值呈较高强度线性正相关（r=0.707,P<0.01）,腰椎OVA=17.12+0.62×（PI-LL矫正值）,R2=50.1%。结论：AS后凸畸形患者截骨矫形术后的PI-LL与末次随访SVA和PT紧密相关,术后重建PI-LL≤10.5°可维持良好的脊柱骨盆矢状面平衡,降低中远期随访脊柱和骨盆矢状面失衡的风险。     

携带人VEGF_(165)和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达

[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA。[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF165、ANG-1基因,将得到的基因通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pTrack-CMV中,构建携带双基因的腺病毒穿梭载体pTrack-CMV-VIA。进而使用AdEasyTM腺病毒系统重组并包装腺病毒。通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测制备的腺病毒pAd-VIA感染的大鼠骨髓基质干细胞中外源基因VEGF165及Ang-1的表达。[结果]该重组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,证明基因序列正确。转染QBI-293A细胞后,可观察到GFP明显表达。重组合腺病毒载体pAd-VIA获得成功包装,扩增后病毒滴度为2×1010PFU/ml,大鼠骨髓基质干细胞转染48 h后,绿色荧光蛋白表达阳性,ELISA结果显示转染组在感染48 h后,培养细胞上清中的VEGF165浓度为(42.5±2.082)ng/105细胞,ANG-1浓度为(16.67±2.08)ng/105细胞,未转染组几乎未检测到外源基因的表达,有统计学差异(P0.05)。[结论]成功构建携带人VEGF165、ANG-1双基因共表达重组腺病毒载体,为组织工程人工骨血管化的研究奠定基础。     

抗人免疫球蛋白G多克隆荧光抗体的制备及在肾活检中的应用

目的：制备抗人免疫球蛋白G（IgG）多克隆荧光抗体，并用于肾病的病理诊断。方法：以免疫新西兰免制备多克隆抗体，用亲和层析的方法纯化抗体，并用ELISA法双向琼脂扩散，Westen-blot和免疫组化等方法对多克隆抗体进行测定。纯化的抗体标记荧）匕素，用免疫组化的方法鉴定并用于临床肾病的辅助诊断。结果：获得的抗体琼脂双扩滴度为1：32。ELISA法测定效价为1：128000，Westen-blot证实抗体特异性识别人IgG。纯化后抗体效价仍有1：56000，灰度分析证实纯化后的抗体纯度达80％：间接法免疫组化检测抗体滴度为1：800。标记荧光后效价无明显下降，免疫组化鉴定在临床病例中该荧光抗体能特异性识别人IgG。结论：得到纯化后的抗人IgG抗体有良好的特异性和亲和性，抗体的结合力较高，标记荧光后得到的多克隆荧光抗体对具有IgG阳性的肾组织反应特异性强，与商品化的抗人IgG抗体比较，效价及特异性均无显著差异，可用于肾病的临床诊断。