抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达

目的 构建抗前列腺特异抗原（PSA）单链抗体（scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽（linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。     

前列腺癌相关雄激素受体突变体的促细胞增殖效应

目的评价前列腺癌相关雄激素受体突变体(mtAR)对细胞生长的促进作用。方法利用三种腺病毒表达载体:野生型雄激素受体(Ad-wtAR);一个被广泛研究的前列腺癌(CaP)相关的mtAR(Ad-mtAR,T877A);以及作为对照的腺病毒载体,我们评价并比较了野生型AR及mtAR的促细胞生长效应。结果相对于被野生型或者对照的腺病毒转染的LNCaP、PC3细胞,转染mtAR的LNCaP、PC3细胞无论有无合成的雄激素(R1881)存在的情况下均显示出更强的细胞增殖作用。并且,用腺病毒载体转染T877A的LNCaP和PC3细胞显示了对R1881更强的反应性。结论这些发现提出了崭新的关于mtAR在CaP细胞中作用的细胞生物学方面的见解,并且表明mtAR(T877A)可能为前列腺癌病程的进展提供了选择性的细胞生长的便利。     

原发性色素沉着性结节性肾上腺皮质病1例报道及文献回顾

目的:分析探索原发性色素沉着性结节性肾上腺皮质病（primary pigmented nodular adrenocortical disease,PPNAD）的临床表现、实验室检查特点、辅助检查特征及诊疗方案。方法:对空军军医大学第一附属医院泌尿外科收治的1例PPNAD患者的临床资料及国内文献所报道的46例患者临床资料进行回顾性分析。46例患者中男性16例,女性30例;其中44例表现为典型库欣综合征体貌,2例仅表现为高血压;伴Carney综合征(Carney complex,CNC)者16例,2例有甲状腺占位;疾病确诊年龄为11~58岁。实验室检查证实患者均具备促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）非依赖性特征,大、小剂量地塞米松抑制试验均不被抑制者45例,1例被抑制,16例患者服用地塞米松后尿游离皮质醇（urinary free cortisol,UFC）升高。影像学完善头部MRI检查者发现垂体占位性病变者2例,无病变者20例,肾上腺CT检查可有双侧肾上腺多发结节或增粗、单侧肾上腺结节或肿物、单侧肾上腺增粗或未见明显变化等表现。治疗方式有腹腔镜下双侧肾上腺全切术、单侧肾上腺肿物切除术及单侧肾上腺全切术。结果:双侧肾上腺切除术联合术后终身激素替代治疗疗效确切,无复发;肾上腺次全切除术和单侧肾上腺切除术后无需激素替代治疗,但存在一定的复发风险。结论:PPNAD临床罕见,确诊主要依据病理检查,对于影像学检查阳性的非依赖性ACTH患者应高度怀疑本病。腹腔镜下双侧肾上腺切除联合术后激素替代治疗是目前治疗PPNAD的合理方案,具体术式应根据患者自身情况拟定。     

Tum5蛋白多克隆抗体的制备及纯化

目的制备Tum5蛋白多克隆抗体并纯化。方法利用pQE30-Tum5重组质粒在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗Tum5多克隆抗体,ELISA方法检测抗体滴度,亲和层析法纯化兔抗Tum5多克隆抗体。结果利用pQE30-Tum5重组质粒,经原核表达和亲和层析获得Tum5蛋白;利用Tum5蛋白制备多克隆抗体,纯度大于95%。结论利用原核表达的Tum5蛋白成功地制备了兔抗Tum5多克隆抗体。     

输尿管支架在恶性肿瘤引起的输尿管梗阻治疗中的应用新进展

正恶性肿瘤引起的输尿管梗阻(malignant ureteral obstruction,MUO)通常由盆腔恶性肿瘤局部侵犯或压迫输尿管导致,大多数病例来自妇科、消化道及腹膜后肿瘤,且肿瘤的放化疗导致输尿管周围纤维化会加重梗阻的程度,此类患者如不进行治疗,将很快出现上尿路功能损害,甚至器官功能衰竭。上尿路减压和维持输尿管通畅为首选的治疗方案,治疗的目标是解除输尿管梗阻,避免泌尿系统的并发症,为患者提供继续治疗原发肿瘤的机会。随着技术进步及新材料的开发,各种输尿管支架包括聚合物输尿管支架、金属输尿管支架被应用于临床治疗MUO,为泌尿外科医师提供了更多的选择,同时有助于提高患者生活质量。     

索拉非尼治疗转移性肾癌疗效与不良反应的关系

目的:探索索拉非尼在治疗转移性肾细胞癌（mRCC）患者中的不良反应与疗效之间的关系。方法:回顾性研究西京医院接受索拉非尼治疗的mRCC患者63例,利用卡方检验分析肿瘤控制率与不良反应的发生频率和严重程度的相关性,利用Kaplan-Meier方法分析16种不良反应,筛选出与患者PFS,OS相关的不良反应,将P＜0.05变量纳入多变量Cox比例风险回归模型进行进一步的多因素分析,确定独立预后因素。结果:63例接受索拉非尼治疗的患者中,完全缓解2例（3.2％）,部分缓解16例（25.4％）,疾病稳定37例（58.7％）,疾病进展8例（12.7％）。中位PFS为12.0个月,中位OS为24.0个月。卡方检验结果示肿瘤控制率与不良反应的发生频率和严重程度相关（均P＜0.05）。多变量分析显示,更好的PFS的独立预后因素包括腹泻（OR 0.255,95％CI 0.130~0.500,P=0.000）和皮疹（OR 0.235,95％CI 0.114~0.482,P=0.000）。OS的独立预后因素包括腹泻（OR 0.454,95％CI 0.246~0.839,P=0.012）,皮疹（OR 0.405,95％CI 0.211~0.776,P=0.006）和高血压（OR 0.373,95％CI 0.177~0.784,P=0.009）。结论:索拉非尼治疗mRCC患者的疗效与不良反应的发生频率和严重程度呈正相关。皮疹和腹泻是影响PFS的独立保护因素,皮疹,腹泻和高血压是影响OS的独立保护因素。这一结论仍需大量前瞻性研究证实。     

显微镜下Mathieu术式治疗尿道下裂的技术探讨

目的:探讨显微镜下Mathieu术式治疗阴茎型尿道下裂的临床疗效.方法:回顾性分析2016年1月-2019年6月期间收治53例阴茎型尿道下裂患儿资料,根据是否在显微镜下手术分为研究组33例和对照组20例.研究组采用ZEISS 88显微镜下Mathieu术尿道成形术,对照组采用传统Mathieu术尿道成形术,比较两组手术...     

霉酚酸酯对肾移植患者细胞凋亡的影响

目的：探讨霉酚酸酯（MMF）对移植肾固有细胞凋亡的影响。方法：对两组同种异体肾移植术后10天的患者的移植肾活检标本进行前瞻性研究。第一组20例患者接受泼尼松（Pred),环孢素（CsA)和硫唑嘌呤（Aza)三联药物治疗,第二组10例用MMF代替Aza。用的组织病理技术作病理诊断。通过原位末端标记（TUNEL）法测定标本中肾小球,间质和肾小管上皮细胞凋亡。结果：根据Banff分类法,所有的活检标本都表现为正常或临界改变（其中2例为临界改变）,在应用MMF组肾小管上皮细胞,肾上球及肾间质细胞凋亡显著低于Aza组（P＜0．01）,结论：MMF可减少肾移植后的肾小管上皮细胞,肾小球及肾间质细胞的凋亡,并对移植肾具有保护作用。     

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及与临床意义. 方法 采用RT-PCR、免疫荧光法分别检测正常膀胱组织(12例)及膀胱癌标本中EZH2 mRNA(38例)及EZH2蛋白(68例)的表达. 结果 免疫荧光法检测显示正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为33.3%、79.4%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2蛋白表达率分别为65.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2蛋白表达率分别为68.9%、100.0%(P<0.05).RT-PCR检测结果 :正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为25.0%、84.2%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2 mRNA表达率分别为70.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2 mRNA表达率分别为72.7%、100.0%(P<0.05).EZH2在膀胱尿路上皮癌明显地高表达,EZH2表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期密切相关. 结论 结果 提示EZH2对于膀胱尿路上皮癌的早期诊断及判断预后可能有重要的意义.