阴道毛滴虫致男性不育的机制研究

目的调查了解男性泌尿生殖系阴道毛滴虫（Tv）感染情况与不育的关系,及发生机制的研究。方法涂片、瑞-姬（W—G）染色和培养用光学双目显微镜观察了1986例精液内Tv及精子的活率、活力等指标;采用肝-胨-糖培养方法,对Tv体外培养后,除去虫体,留取培养液,稀释成3个不同浓度,将10例正常生育男性的优化精子分为等体积的（A、B、C、D）4组：A组加入未培养Tv的原培养液,B、C、D组依次加入（1．2×10^8／L、6×10^8／L、1．2×10^9／L）梯度培养液,分别于37％水浴箱中孵育0．5、1、2、4h观察精子运动参数。结果Tv检出率为38％,Tv感染者精子运动参数明显低于正常生育者（P〈0．01）。Tv培养液浓度在6×10^8／L以上时,精子的活率和活力与对照组相比均显著降低（P〈0．05）,并呈浓度时间依赖性。结论Tv对精子运动能力有明显的损害作用及代谢产物是其主要的损害抑制因素,是造成不孕不育的重要原因之一。     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

半定量RT-PCR检测腺样囊性癌细胞survivin mRNA的表达

目的探讨靶向surv iv in基因阻断后mRNA表达量的变化,以及在体外对肿瘤细胞的抑制作用。方法应用分子克隆技术构建siRNA真核表达载体Pgenesil/sur;通过脂质体转染腺样囊性癌(salivary adeno id cystic carcinom a,SACC)细胞。采用RT-PCR技术检测转染前后surv iv in mRNA表达量以及表达抑制率。结果转染后surv iv in mRNA表达水平x-±s(0.42±0.10)较转染前surv iv in mRNA表达水平(1.56±0.12)明显减低,P<0.05;在mRNA水平其表达抑制率为73.1%。转染空质粒载体Pgenesil-1 surv iv in mRNA表达水平(1.35±0.13)与空白对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论靶向surv iv in siRNA能阻断肿瘤细胞surv iv in基因mRNA表达,并有效抑制体外培养的肿瘤细胞SACC-83的增殖作用。     

不同保存温度对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞稳定性的影响

目的探讨不同条件下保存的血液对外周造血干细胞检测的影响。方法以SE-9000型血液分析仪检测不同温度、不同时间保存的血液外周造血干细胞的数量和百分率。结果4°C条件下保存12 h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;20°C条件下保存8 h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;而30°C条件下保存6 h内造血干细胞的数量和百分率无明显变化。结论血液样本在4~30°C条件下保存6 h对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞无影响。     

SE-9000型血液分析仪在检测外周血干细胞中的临床应用

目的探讨SE-9000型血液分析仪在外周血造血干细胞检测的临床应用价值.方法采用SE-9000型血液分析仪与流式细胞仪(FCM)对1例脐带血干细胞和2例骨髓干细胞移植患者的造血干细胞连续6 d进行检测.结果两种检测方法所得数据差异无显著性,具有良好的相关性(r=0.923,P<0.01).结论 SE-9000型血液分析仪为临床提供了一种快速简捷、费用经济的造血干细胞检测方法.     

高温合并化疗对耐药性VX-2细胞多药耐药基因的影响

目的：观察热化疗对多药耐药性VX-2细胞mdr基因的影响．方法：采用单纯化疗(阿霉素32μg／mL,1h),单纯热疗(42．5℃,1h)及热疗联合化疗(阿霉素32μg／mL 42．5℃,1h),分别作用于VX-2及VX-2,mdr1细胞．观察不同处理组细胞的存活率、mdr1 mRNA及．P-gp的表达情况．结果：热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1 mRNA的表达明显减低或消失,P—gp表达明显减低．结论：热化疗可以使多药耐药细胞mdr1 mRNA表达降低或消失,使P—gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性．     

人类精液中一氧化氮和转铁蛋白含量的关系

目的:探讨一氧化氮(NO)与人精液转铁蛋白(Tf)含量及精子质量的关系.方法:参照WHO标准,进行精液常规分析.无菌取大鼠睾丸,经胶原酶和透明质酸酶消化,分离出纯度较高的支持细胞,用Hams F-12培养液培养.实验组加入NO供体硝普钠(SNP),同对照组一起培养48 h取上清液,采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO-3).用免疫散射比浊法检测Tf含量.结果:130例不育者精液Tf含量、精子密度和活动率随NO含量升高而降低,呈显著的负相关(P<0.01),大鼠睾丸支持细胞悬液Tf含量正常生育组[(22±9)μmol/L]显著高于不育组[(13±8)μmol/L,P< 0.01].结论:精液Tf含量测定有助于评价精子质量,可作为反映支持细胞功能的特异指标,NO对精子运动能力及支持细胞产生和分泌Tf有抑制作用,这对研究不育症的机制有重要价值.     

血细胞检测流水线系统对白细胞形态的影响

目的探讨XN-9000全自动血细胞检测流水线系统对白细胞形态的影响。方法采用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K 2)专用负压管对空军军医大学西京医院和西安培华学院医学院收集的238例受试者(其中淋巴细胞性白血病26例、粒细胞性白血病17例、单核细胞性白血病15例、健康儿童80例、健康成人100例)采集静脉血2 mL,采用XN-9000全自动血细胞检测流水线系统在1 h内完成推片、瑞姬染色、阅片,同时采用手工推片、手工瑞姬染色,由两位经验丰富的主管技师进行显微镜分类计数。结果238例受试者EDTA-K 2抗凝血仪器推片后分别采用仪器染色和手工染色分类计数Ⅱ型反应性淋巴细胞结果[(8.65±2.35)%、(8.55±2.45)%]明显高于手工推片仪器染色和手工推片手工染色结果[(4.57±2.55)%、(4.67±2.45)%],差异有统计学意义(P<0.05)。健康对照者(健康儿童及成人)、粒细胞性白血病和单核细胞性白血病患者抗凝血经仪器推片分类计数Ⅱ型反应性淋巴细胞分别为(3.2±0.5)%、(3.5±0.4)%、(3.6±0.5)%,与手工推片结果[(3.1±0.8)%、(3.2±0.6)%和(3.4±0.8)%]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。淋巴细胞性白血病患者淋巴细胞形态有明显改变:淋巴细胞体积增大,外形不规则,着色不均,边缘蓝色较深,细胞核不规则,染色质细致,细胞质呈淡紫红色,似Ⅱ型(不规则型/单核细胞型)反应性淋巴细胞。淋巴细胞性白血病患者Ⅱ型反应性淋巴细胞的仪器推片结果为(85.2±5.6)%,与手工推片结果[(3.5±0.9)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论XN-9000全自动血细胞检测流水线系统对EDTA-K 2抗凝血活化膨胀的白细胞无法调节推片力度,加之白血病患者的血细胞密度高、阻力大而致细胞形态改变,使淋巴细胞似Ⅱ型反应性淋巴细胞,影响临床对疾病的诊断。手工推片可调节角度、速度及力度,细胞形态不易改变。当Ⅱ型反应性淋巴细胞多时,必须手工推片手工染色,显微镜检查确证后方可发报告。     

亚硝基铁氰化钠对正常人精子结构的影响

目的：观察一氧化氮（N0）供体亚硝基铁氰化钠（SNP）作用正常精子后超微结构的变化。方法：采用percoll梯度离心法选择具有正常生理功能的精子，与不同浓度的SNP孵育作用后，在透射电镜下观察精子的超微结构。结果：正常精子与300nmol／LSNP作用后，精子膜、顶体及精子线粒体出现不同程度的损伤和结构上的异常。结论：高浓度NO供体SNP可致精子膜、顶体及精子线粒体等超微结构的改变，进一步阐明了精子运动功能障碍的机制。     

硝普钠对人精子获能及顶体反应的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对人精子获能及顶体反应(AR)的影响。方法:在48例健康生育男性的精子悬液中加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP),于37℃孵育1h获能,用孕酮诱导AR15、30、45、60min,采用磷酸苯二钠法分别检测精子获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中酸性磷酸酶(ACP),同时用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子运动参数,观察NO对精子获能及AR的作用。结果:NO浓度在50、100nmol/L时精子悬液中ACP活性增高,精子运动参数明显增强,150、200nmol/L时ACP活性及精子运动参数变化不大,250、300nmol/L时精子悬液中ACP活性和精子运动参数明显降低。结论:NO对精子获能和AR具有双重性,在低浓度下有促进精子获能、AR和精子运动参数增强的作用,而在高浓度下对精子获能、AR和精子运动参数有抑制作用。精子ACP检测对精子群体获能和AR状态的评价是种较为客观、可靠的方法。