森林脑炎病毒prM-E蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫活性测定

目的为了表达森林脑炎病毒prME蛋白,为森林脑炎快速诊断试剂的研制奠定基础。方法经过RTPCR扩增、重组转移载体构建、细菌内转座和昆虫细胞转染,以杆状病毒昆虫细胞表达系统成功地表达了森林脑炎病毒MDJ01株prME蛋白。结果从感染细胞上清中电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,说明重组病毒感染细胞后产生病毒样表达颗粒(viruslikeparticlesVLPs),并且分泌至细胞外。免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的重组蛋白能够与抗森林脑炎病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性。ELISA和间接免疫荧光染色证实,重组prME蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在昆虫细胞中表达的prME具有良好的抗原性,本研究为森林脑炎快速特异诊断试剂研制奠定了基础。     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的采研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19,14,10(K19,K14,K10)的特征与规律。方法分别取4～12岁少儿及35～53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织。采用免疫组织化学SP法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10。结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低。瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部二三层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛。结论瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一。     

扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较。结果所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性。结论建立了ZEBOV及SEBOV Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测。     

应用上唇动脉逆行血供邻近瓣和Bernard-Webster颊部推进组织瓣修复巨大下唇癌切除术后缺损：1例报告及文献复习

报告1例因巨大下唇鳞状细胞癌切除术后导致的下唇缺损病例,应用上唇动脉逆行血供的扇形邻位旋转组织瓣和Bernard-Webster颊部推进组织瓣,即刻修复缺损,术后半年行口角开大修整术。结合相关文献进行探讨,比较各种下颌缺损修复方法的优缺点。     

改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨移植的长期组织学改变

文题释义：改良型富血小板纤维蛋白膜：是第二代富血小板浓缩制品富血小板纤维蛋白通过低速延时的方法得到的改良型富血小板纤维蛋白凝胶,再经过压制后得到的一种具有一定韧性的膜状物,可起到包裹作用,有利于细胞的增殖分化。 颗粒软骨移植：将自体软骨切成1.0-2.0 mm的颗粒状后移植于受区,但术后远期存在移植物吸收、变形等风险,目前国内外关于有效减少颗粒软骨移植后并发症等风险的报道仍然较少。背景：已有学者研究并制备了改良型富血小板纤维蛋白,并通过动物实验证实了改良型富血小板纤维蛋白可以促进自体软硬组织的再生与修复。目的：制备改良型富血小板纤维蛋白膜,观察改良型富血小板纤维蛋白膜及自体筋膜包裹颗粒软骨移植术后移植物的组织学改变。 方法：新西兰雄兔12只,均进行以下相同手术流程：制备改良型富血小板纤维蛋白膜,取兔左耳软骨组织及右后肢自体筋膜组织,制备成3种移植物：颗粒软骨;自体筋膜包裹颗粒软骨;改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨。将移植物分别回植于兔背部皮下,术后4个月取出移植物,进行一般形态观察和组织病理学检测。 结果与结论：①自体筋膜和改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨移植物厚度较颗粒软骨移植物厚,移植物外形较圆润,表面较平整;②改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨移植物软骨细胞存活率和再生潜力明显优于另外2种移植物(P < 0.05);其他组织学参数各组之间无显著差异;③结果说明：改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨移植能够提高颗粒软骨存活率和移植物塑形效果,减少移植后软骨再吸收。ORCID:0000-0002-4733-9912(杨银辉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

转化生长因子-β1,2在不同发育阶段皮肤组织中的定位及表达量的变化

目的:探讨转化生长因子-β_{1, 2}(TGF-β₁和TGF-β₂)与α-平滑肌肌动蛋白(α-ASMA)在胎儿和成人皮肤中的分布和表达变化规律。方法:20例被测标本中包括不同胎龄的胎儿皮肤15例和成人皮肤5例。用免疫组化方法和病理技术确定这3种蛋白在不同发育阶段皮肤中的定位和表达量。结果:在妊娠早期的胎儿皮肤中, TGF-β_{1, 2}和α-ASMA呈弱阳性表达, 随着胎儿生长发育, 这3种蛋白的阳性细胞率逐渐增大;在妊娠晚期胎儿和成人皮肤中这3种蛋白的表达量明显多于妊娠早期胎儿皮肤(P＜0.01)。TGF-β_{1, 2}的阳性信号主要存在于表皮细胞, 内皮细胞和部分成纤维细胞中, α-ASMA蛋白定位于肌成纤维细胞和汗腺上皮细胞内。结论:TGF-β₁和TGF-β₂可能在皮肤的发生、结构和功能的维持以及皮肤损伤后的修复中起重要作用。     

抗SARS冠状病毒中和活性单克隆抗体的筛选及其结合位点分析

目的 建立能分泌具有中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体（McAb）细胞株，制备有中和活性的抗SARS-CoV MeAb，用于SARS-CoV感染的早期特异诊断和进行SARS-CoV结构蛋白的功能研究。方法 用灭活纯化sARS-c0V（BJ01株）免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合技术，建立能稳定分泌SAILS病毒MeAb的杂交瘤细胞系，然后用中和试验进一步筛选分泌具有中和活性的抗SARS-CoV MeAb细胞株。利用SARS-CoV的S和N蛋白的不同长度肽段通过EusA鉴定McAb的特异结合区域，分析S和N蛋白不同区域诱导产生抗体的能力和特性。结果 建立了12株能稳定分泌抗SARS-CoV McAb的杂交瘤细胞株，间接免疫荧光法检测抗体效价在1：320～1：20 480之间，其中6株具有较好的中和SARS-CoV的能力。具有中和活性的McAb中，3株是针对S蛋白的，2株是针对N蛋白的。其中抗S蛋白的中和抗体活性比抗N蛋白的中和抗体活性高，另外1株可能是针对SARS-CoV的其他结构蛋白的。进一步对6株抗S蛋白的McAb的特异抗原结合表位分析，发现其中3株结合位点在S蛋白第12～311氨基酸之间，2株在第310～535氨基酸之间，后者中和效价高于前者，另1株是针对S2蛋白的，SARS病毒的受体结合区正位于第310～535氨基酸这一区段。具有中和活性的McAb通过间接免疫荧光、ELISA、酶标免疫组化法和胶体金方法对SARS病毒进行检测，都显示出高度的特异性和良好亲和力。结论 成功制备了具中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体，并分别测定了McAb对S蛋白和N蛋白的特异抗原结合活性，初步确定了S蛋白的中和表位。为今后SARS病毒的特异诊断、结构蛋白的功能分析和重组疫苗的研制奠定了较好的基础。     

人工晶状体植入术后虹膜和睫状体中肿瘤坏死因子αmRNA表达的实验研究

最新实验研究发现,人工晶状体植入术后房水内肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)的含量将增高,且TNF在术后眼内炎性反应中发挥重要作用。为进一步探讨其机制,我们观察和研究了兔眼人工晶状体植入术后虹膜和睫状体组织中TNFα mRNA表达的规律,并探讨了其对术后眼内炎性反应的影响。     

野生型p53及相关调控基因的转录、翻译水平与肠道干细胞分化的关系

目的：探讨野生型p53(wtp53)基因及其相关调控基因转录、翻译水平的变化与肠道干细胞分化的关系。方法：利用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学技术，以细胞分化标志肝脂肪酸结合蛋白（L-Fabp）mRNA水平为动态参照，分别检测大鼠胚胎期E14d，E19d和幼鼠其E19d至成年大鼠，RT-PCR能够检测到小肠细胞内L-Fabp的mRNA，其中P2d，L-Fabp的mRNA含量最高，证实这两个期间为肠道干细胞高分化阶段。从胚胎到成年大鼠，小肠细胞p21mRNA及其蛋白表达均为阴性，p53mRNA水平无明显变化。然而从E14d-P2d，小肠上皮细胞p53蛋白信号呈逐渐增强趋势。P7d以后至成年期，p53蛋白信号为阴性。结论：在肠道干细胞迅速分化期，p53蛋白高表达可能是因为其半衰期延长，最终导致蛋白量累积的结果，而与转录水平无关，提示蛋白的稳定性对于p53调节肠道干细胞分化期基因的稳定性十分重要，另外，p53蛋白调节肠道干细胞的分化机制与p21途径无关。     

血小板源性生长因子及其受体在胎儿皮肤中的表达

目的：观察血小板源性生长因子（PDGF）两亚基（A，B）及其两种受体（PDGFR-α和PDGFR-β）在胎儿和成人皮肤组织中的表达持下征以及可能的生物学意义。方法 16例被测标本中包括不同胎龄的胎儿皮肤组织8例和成人皮肤组织8例。用免疫组化方法和病理技术研究这四种蛋白在胎儿和成人皮肤组织中的定位和表达量的变化规律。结果：在胎儿皮肤组织中，PDGF-A、PDGF-B、PDGFR-α和PDGFR-β的阳性细胞率较低，其中PDGF-A、B主要分布于表皮角质层细胞和血管内皮细胞内，PDGFR-α定位于表皮细胞和内皮细胞的细胞膜上，PDGFR-β则在内皮细胞的细胞膜上上有少量分布。在成人皮肤组织中，PDGF两种亚基和两种受体的阳性细胞率进一步增大，PDGF-A、B的阳性细胞主要为表皮基底层细胞和内皮细胞，PDGFR-α主要分布于表皮细胞、内皮细胞和部分成纤维细胞的细胞膜上，β-型受体在表皮基底层细胞和内皮细胞的质膜上有阳性表达。结论：PDGF及其受体可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要。在发育早期的胎儿皮肤组织中，四路蛋白低表达可能与胎儿无瘢痕愈合密切相关。