靶向乙型肝炎表面抗原嵌合抗原受体T细胞对肝细胞癌杀伤作用的研究

目的:分析靶向乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对表达HBsAg的肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建HBsAg-CAR基因,通过慢病毒载体将其转导入T细胞(健康捐献者的血液中获取),制备HBsAg-CAR-T细胞。制备CD19-CAR-T细胞作为Mock组,未转导的T细胞为Untransduced组。上述三种效应细胞分别与肝癌细胞共同培养,检测三组细胞对肝癌细胞的杀伤作用及抗肿瘤细胞因子(肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素2等)释放水平。建立免疫缺陷NPG小鼠PLC/PRF/5肝癌皮下成瘤模型,随机分组,尾静脉注射HBsAg-CAR-T细胞(实验组,n=5)或未转导的T细胞(对照组,n=5),注射后第15天测量肿瘤体积。结果:体外培养过程中,HBsAg-CAR-T细胞具有较高的增殖能力及存活率,CAR的表达稳定。与表达HBsAg的肝癌细胞共培养后,HBsAg-CAR-T组释放的抗肿瘤细胞因子明显高于Mock组及Untransduced组,差异均有统计学意义(均P<0.05);HBsAg-CAR-T组对HBsAg表达阳性的肝癌细胞的杀伤率明显高于Mock组及Untransduced组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组NPG小鼠肿瘤体积为(250.8±62.8)mm 3,低于对照组小鼠肿瘤体积(757.5±102.6)mm 3,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HBsAg-CAR-T细胞能够特异性识别并杀伤HBsAg阳性肝癌细胞,并释放高水平的抗肿瘤细胞因子。     

利用非胰岛细胞进行1型糖尿病基因治疗的研究进展

1型糖尿病是由于胰腺 β 细胞特异的自身免疫破坏 ,使胰岛素的产生减少所造成的。目的在于进行胰岛素替代的基因治疗战略目前主要有 :①刺激 β 细胞生长 ;②诱导 β 细胞分化和再生 ;③移植基因工程改造的胰岛或 β 细胞 ;④利用基因工程技术使非 β 细胞产生胰岛素。对于 1型糖尿病 ,由于 β 细胞的自身免疫破坏作用持续存在 ,依赖于 β 细胞的增殖和再生的治疗方法可能效果有限。而利用基因工程技术将胰岛素基因转入非 β 细胞 ,发展 β 细胞替代物 ,可避免 β 细胞特异的自免疫攻击。以非 β 细胞为靶细胞的胰岛素基因治疗应很好的实现…     

肝硬化环境下黏附分子表达对肝癌转移的影响

目的 探讨肝硬化环境对肝癌肝内、外转移的影响.方法 健康雄性BALB/c小鼠,采用CCl4诱导建立肝硬化小鼠模型并设正常对照组.分别在肝硬化组及对照组的肝脏左叶上原位种植小鼠肝癌细胞,术后1、2、3周收取标本.通过大体及病理切片观察肿瘤的生长及转移行为.检测了肝脏组织中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)和E-钙黏附素(E-cadherin)的表达情况.结果 术后观察发现,肝硬化基础上的肝癌更容易出现肝内转移(14/19)与远处转移(4/19),与对照组相比(5/17,1/17)差异具有统计学意义(P＜0.05).同时肝硬化组黏附类分子较对照组表达明显上调(P＜0.01).钙黏附素表达则无明显差异.结论 肝硬化环境更利于肝癌发生肝内、外转移.这种转移行为可能与肝硬化组织中各种黏附因子表达增高有关.     

内毒素活化巨噬细胞早期和晚期基因表达的cDNA芯片分析

目的　利用 c DNA芯片技术分析内毒素活化的小鼠腹腔巨噬细胞早期和晚期基因表达 ,以更全面了解内毒素在感染、创伤反应中通过巨噬细胞介导的炎症和免疫反应。方法　以未刺激的和用 1mg/ L脂多糖 ( L PS)分别刺激 2 h(早期 )和 2 4 h(晚期 )的小鼠腹腔巨噬细胞制备 33P标记的 c DNA探针 ,并分别与小鼠 c DNA表达芯片 (含 1176个已知基因 )杂交。结果　巨噬细胞活化早期的 3倍差异表达基因为 6 9个 ,其中4 4个上调 ,2 5个下调 ;巨噬细胞活化晚期的 3倍差异表达基因中有 11个上调 ,2 6个下调 ;只有 8个基因同时出现于活化早期和晚期的差异表达基因中。许多转录因子、细胞内信号转导调节蛋白、炎症细胞因子和细胞凋亡相关基因的表达均发生了明显的调节变化。发现 BTB和 CNC同源 1( BACH1)、早期生长反应蛋白 2( EGR2 )、E4 7反应蛋白 1( EIP1)、Ngfi A结合蛋白 2 ( NAB2 )、成髓细胞白血病癌基因样蛋白 ( MYBL2 )、神经纤维癌蛋白基因 1( NF1)、睫状神经营养因子 ( CNTF)和 Sema4 A等一些以前未曾报道与 L PS诱导的巨噬细胞活化相关的基因。结论　采用 c DNA芯片技术了解内毒素诱导的巨噬细胞活化早期和晚期的综合基因表达信息 ,有助于更好地了解感染、创伤后细菌内毒素诱导的炎症免疫反应     

白细胞介素-1受体相关激酶1蛋白过表达对细菌脂蛋白耐受的影响

目的 探讨细菌脂蛋白(BLP)信号转导分子Toll样受体2(TLR2)和白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)与BLP耐受发生的关系.方法 在人胚肾293(HEK293)细胞中过表达TLR2以及IRAK-1蛋白,利用蛋白质免疫印迹法和双荧光素酶报告基因检测实验观察其对BLP耐受的影响.结果 以BLP刺激稳定转染并表达TLR2的HEK293细胞可以剂量依赖性地诱导NF-κB活化,而且BLP预处理HEK-TLR2细胞可诱导BLP耐受的发生.在HEK-TLR2细胞中过表达IRAK-1可以剂量依赖性地增加NF-κB的活化并逆转BLP耐受:转染前BLP活化组与耐受组的NF-κB活化程度分别为0.329±0.010和0.168±0.010;转染0.02μg IRAK-1质粒后活化组与耐受组的NF-κB活化程度分别为0.493±0.010和0.427±0.035,均比转染前明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 HEK293细胞中过表达TLR2不能阻止BLP耐受的诱导,但是在HEK-TLR2细胞中过表达IRAK-1可部分逆转BLP耐受,提示IRAK-1蛋白表达水平的变化在BLP耐受发生中起关键作用;IRAK-1可作为细菌感染和脓毒症治疗的重要靶点.     

第一肝门阻断对大鼠硬化肝组织超微结构的影响

目的 探讨第一肝门阻断（Pringle阻断）对硬化肝组织及其超微结构的影响.方法 将四氯化碳诱导的肝硬化模型大鼠分为假手术（sham operation,SO）对照组和Pringle阻断（portal triad clamping,PTC）组,PTC组阻断45 min、复流6h取下腔静脉血和肝组织标本,检测血中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）水平及肝组织中三磷酸腺苷（adenosinetriphosphate,ATP）含量,制作组织病理切片及电镜切片,观察组织损伤及肝超微结构的改变.结果 血液中ALT水平∶SO组（1 17.8±58.0） IU/L,PTC组（1 147.0±297.0） IU/L,PTC组高于SO组（P＜0.05）;肝组织中ATP的含量∶SO组（3.80±0.75）μmol/g,PTC组（1.10±0.26）μmol/g,PTC组低于SO组（P＜0.05）;超微结构观察SO组肝细胞线粒体轻微肿胀,而PTC组肝细胞线粒体明显肿胀,线粒体膜损伤破裂,线粒体嵴疏松溶解,肝细胞核固缩,光镜下见肝细胞片状坏死.结论 大鼠硬化肝组织中肝细胞对于Pringle阻断引起的缺血损伤更为敏感,对于硬化肝应尽量缩短PrinCe阻断时间.     

99Tcm标记的二乙烯三胺五乙酸半乳糖基人血清白蛋白扫描评估肝脏功能的临床应用

随着外科技术的进步,扩大的肝切除手术已经越来越频繁.但是,扩大的肝切除手术可以导致较小的术后剩余肝体积,增加了术后肝功能不全的风险,特别是当患者合并有肝实质的脂肪变性、胆汁淤积及纤维化时.鉴于术后肝功能不全的治疗非常困难,精准的评估术前预留肝脏功能对于判定患者能否耐受扩大肝切除术就尤为重要.     

重症急性胰腺炎大鼠血清Chemerin水平变化的实验研究

目的探讨在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠血清中Chemerin、C反应蛋白（C—reative protein,CRP）、肿瘤坏死因子Ot（TNF—Ot）水平的变化。方法胆胰管内注射5％牛黄胆酸钠造模。将动物随机分为对照组、假手术组、重症急性胰腺炎组,各组于术后12h时间点处死动物,处死前抽血测血清淀粉酶、Chemerin、TNF—Ot、CRP水平,同时取处死大鼠的胰腺组织,测定胰腺／体重比值,行HE染色,观察大鼠胰腺组织病理变化。结果SAP组血清chemerin、CRP、TNF—Ot水平较正常对照组、假手术组均明显升高（P〈0．01）。血清Chemerin、CRP、TNF—Ot水平改变与胰腺组织病理评分呈正相关（r=0．802、0．785,0．769,P〈0．01）。结论Chemerin可能与重症急性胰腺炎的发生、发展有关,可作为早期预测急性胰腺炎严重程度的有效指标之一。     

不同入肝血流阻断方式对小鼠肝癌生长和转移的影响

目的探讨不同血流阻断方式对肝癌生长和转移的影响。方法选择昆明小鼠24只,随机分为正常对照组(suspended operation,SO)、肝门阻断组(occlusion of the portal triad,OPT)、保留肝动脉持续阻断门静脉组(occlusion of portal vein,OPV)各8只。采用门静脉注射肿瘤的方法建立肝癌模型,建模后3d采用阻断范围为左外叶和中叶、阻断时间为60min的入肝血流阻断方式,复流后5d分别对三组动物测定肝脏置换区域(HRA)、增殖性细胞核抗原(PCNA)在肝癌组织中的阳性表达率。结果门静脉注射小鼠肝癌细胞8d后,对照组阻断叶HRA(%)值为7.658±2.552,OPT组升高到35.612±4.234,OPV组升高到9.02±3.006(P<0.01);对照组非阻断叶HRA(%)值为8.107±2.003,OPT组升高到8.698±3.021,OPV组升高到8.607±2.304(P<0.01)。对照组中阻断叶与非阻断叶肿瘤生长比率为1,OPT组值为2.82,OPV组值为1.1。对照组中肿瘤细胞PCNA阳性表达率为30%,OPT组为78%,OPV组为45%。结论保留肝动脉持续阻断门静脉可减缓肝癌的生长和转移。     

限制流量的部分门静脉动脉化对肝脏功能的远期影响

目的 对比部分门静脉动脉化(APS)与限制流量的APS术后对肝脏微循环及肝脏结构功能的远期影响.方法 建立APS和限制流量的APS的大鼠实验模型,对肝脏微循环和结构功能改变进行为期6个月的对比观察.结果 APS组肝组织LDF为(1.389±0.125)PU,限流组肝组织激光多普勒血流量(laser doppler flow,LDF)为(1.203±0.135)PU,APS组肝脏血流量明显大于限制流量后APS组(P＞0.05).APS组血清ALT、AST水平与限制流量的APS相比呈升高趋势,但两组间差异无统计学意义(P＜0.05);APS组血清ALP水平明显升高,与限制流量的APS组差异有统计学意义(P＜0.05).肝内门静脉及其分支显著增宽、壁增厚、内膜胶原纤维增多.而限制流量的门静脉动脉化术后未出现以上改变.结论 APS术后,限制流量是必需的,防止过高血流量对肝脏功能和结构的损害.