新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽(cecropin XJ)是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0.01~1 000 mg·L-1浓度范围内的cecropin XJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropin XJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 Cecropin XJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),并具有浓度依赖性,IC50值为61.19 mg·L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropin XJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Western blot结果表明,cecropin XJ能够引起Bcl-2表达下调,Bax表达上调,促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。Cecropin XJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropin XJ介导的AGS细胞死亡率。结论 Cecropin XJ可通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。     

多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocidaP.m)是有荚膜的革兰氏阴性杆菌,是普遍存在的致病菌能够引发动物的各类疾病,如牛和水牛的出血性败血症,猪的萎缩性鼻炎,兔的脓血症,野生和家养鸟类的禽霍乱,以及人类各种与动物叮咬有关的疾病,包括皮下感染、脓毒性的关节炎、脑膜炎、心内     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子调控树突状细胞发育和功能的研究进展

树突状细胞(DC)是重要的抗原提呈细胞,专门负责抗原捕获、加工并提呈给下游T淋巴细胞从而诱导免疫应答或者免疫耐受。维持DC亚群在体内的动态平衡是保证机体免疫系统正常运转的基础。无论机体处于炎症或静息状态,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对DC亚群发育、分布、功能及维持DC亚群动态平衡均具有重要的调控作用。本文主要综述了GM-CSF对DC亚群发育与功能的调控作用。阐明DC发育与功能的调控机制,有助于开发新的基于DC的免疫治疗方案。     

酵母系统表达疾病相关蛋白的研究

随着分子生物学技术的发展 ,利用生物工程技术表达药用蛋白、生物活性蛋白已成为一种有潜在发展前景的生产方式 ,如全世界用于治疗糖尿病的胰岛素 ,大约有一半的用量是由酿酒酵母表达出来的。ThomasKjeldsen等用毕赤巴斯德酵母表达出了有活性的与人类天然胰岛素结构相同的胰岛素[1] 。与传统的原核表达系统相比 ,酵母真核表达系统具有易培养、繁殖快及真核细胞对翻译后蛋白的加工及修饰过程 ,如二硫键的正确形成 ;前体蛋白的水解加工 ;糖基化作用等 ,并且能将表达的蛋白产物分泌到细胞外的培养基中 ,简化了表达产物的回收和纯化 ,有利于蛋…     

应用SSH技术研究H2O2胁迫下细粒棘球蚴基因的表达

目的构建H2O2胁迫下细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)与正常组织差异表达的消减cDNA文库。方法以H2O2胁迫细粒棘球蚴cDNA为试验方(tester),正常生长的细粒棘球蚴cDNA为驱动方(driver),应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)研究H2O2胁迫下细粒棘球蚴基因的表达。结果文库扩增后得到124个阳性克隆,菌落PCR分析,均得到200~1000bp插入片段。将整个文库克隆进行测序,测得序列结果利用BLAST在线软件与GenBank数据库进行同源序列比对分析和BlastX分析。结果获得重要基因的cDNA序列,如氧化还原酶、蛋白激酶、生长因子等。另有部分克隆在GenBank中无法查到对应的同源基因,可能代表了新基因。结论成功构建了H2O2胁迫与正常组织差异表达的消减cDNA文库,为研究细粒棘球蚴在抗氧化过程中的相关靶基因筛选奠定基础。     

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）硫氧还蛋白过氧化物酶（thioredoxin peroxidase TPx）基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。     

不同途径的乳球菌介导重组IL-12基因抗小鼠黑素瘤的效果

利用自身免疫系统或其组分治疗肿瘤是一种新的治疗手段.白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)是一种具有多种生物学活性的免疫调节因子,它可以促进NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的活性,能刺激T细胞及NK细胞的增殖,并诱导分泌IFN-γ等多种细胞因子[1],因此在抗肿瘤及抗感染中起重要作用.与其他细胞因子一样,直接应用IL-12会导致全身不良反应甚至危及生命.2003年Huber等[2]发现通过滴鼻给药可以降低IL-12介导的不良反应,此外有研究表明利用质粒、腺病毒或腺病毒转染的间质干细胞靶发送IL-12基因到肿瘤部位表达也能抑制肿瘤生长[3-5],而不致产生严重的不良反应.然而质粒发送存在缺乏组织的特异性和靶向性、转染效率较低且基因表达时间短[6]等缺点,发送重组腺病毒载体易导致转染细胞毒性及死亡、基因表达时间受限、可诱导机体产生免疫反应[7]等,限制了这些方式临床应用的效果.     

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。     

动物线粒体DNA的研究现状及其在啮齿动物遗传结构中的应用

自 1963年Nass通过电镜证实了线粒体DNA的存在以来 ,国内外许多学者对一些高等动植物尤其是动物线粒体DNA(MitochondrialDNA ,mtDNA)进行了多种研究 ,在mtDNA的结构、组成、复制、转录、基因表达的调控及mtDNA突变与线粒体病之间的关系 ,以及在分子基础上揭示或重新认定了许多动物的起源和分类 ,为动物的亲缘关系的认定以及遗传育种提供了大量的背景资料[1～ 3 ] 。近年来 ,随着限制性片段长度多态性 (Restrictionfregmentlengthpolymorphism ,RFLP)分析技术及PCR技术的发展和应用 ,mtDNA进化遗传学研究成为目前分子进化研究领…     

啮齿动物遗传多态性的研究现状

遗传多样性是指种内基因的变化,包括种内显著不同的种群间和同一种群内的遗传变异,也称为基因多样性。在物种内部因生境的不同也会产生遗传上的多样化,各种生物不同亚种和人工驯化(种植)的品种或品系中都存在着丰富的遗传多样性,以上是物种各水平多样性的最重要的来源。 对遗传多样性的系统研究始于上个世纪,达尔文在《物种起源》中用大量资料和证据揭示出生物中普遍存在变异现象,并发现了大部分变异有遗传倾向,他把这种可遗传的变异称为