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1.
目的 建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法 使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相关血液标本的检测效果。结果 ddPCR反应体系中最佳引物和探针浓度分别为0.8 μmol/L和0.4 μmol/L;最佳扩增条件:95 ℃ 10 min;95 ℃ 30 s,60 ℃ 1 min,循环40次;98 ℃酶失活10 min。布鲁氏菌核酸DNA为0.96 ng/反应~3.68 fg/反应时,ddPCR检出靶标基因拷贝数为2.00×105拷贝/反应~1拷贝/反应,ddPCR测得值的对数值与DNA浓度的对数值有线性关系。在疫情相关血液标本DNA的检测中,ddPCR阳性率远高于培养法和试管凝集法;16份人血液标本中靶标基因浓度为5~65拷贝/mL血液(平均29拷贝/mL血液),5份羊血液标本中靶标基因浓度为25~245拷贝/mL血液(平均98拷贝/mL血液)。结论 ddPCR灵敏性高,可检测微量核酸DNA,适合临床血液标本的检测以及布病病原体的分子流行病学调查。  相似文献   
2.
<正>Wolff、Parkinson和White于1930年首次报道了预激综合征(WPW综合征),1944年Ohnell进一步证实了房室旁道的存在[1]。预激综合征人群发病率约1‰~3‰[2],行射频导管消融术(radiofrequency catheter ablation,RFCA)成功率超过90%,手术创伤性小、安全性高且能达到根治目的。本文报道预激综合征消融术后并发三度房室传导阻滞1例。  相似文献   
3.
目的 建立一种微量的布鲁氏菌病抗体凝集检测方法,用于布鲁氏菌病高通量检测。方法 依据我国《布鲁氏菌病诊断标准》(WS269-2007)规定的病人诊断标准,用试管凝集试验做诊断标准。通过优化微量凝集试验抗原浓度,对142份疑似病人血清同时做试管凝集和微量凝集试验,进行效果评价。结果 最优的微量凝集抗原浓度为1:10,建立微量凝集法具有较高的敏感度和特异度,分别为98.9%和92.3%;和常规试管凝集法相比,两种方法符合率为96.5%。常规试管凝集检测得到21份阴性样本,22份可疑样本(1:50),99份阳性样本(>1:100)。微量凝集检测得到30份阴性样本、17份可疑样本(1:50)、95份阳性样本(>1:100)。两种试验方法,结果相同的占70.4%(100/142),经统计学检验差异无统计学意义(χ2=0.8,P>0.05)。结论 建立一种可显色的布鲁氏菌病抗体微量凝集检测方法,可以在96孔V型板上同时检测24份标本,且结果易判读,更适宜基层防疫人员现场检测,最终为疫情处置提供强有力的技术支持。  相似文献   
4.
目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎性介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法72只SD大 鼠,随机分为休克不复苏组(SR,n=24),醋酸钠林格液组(AR,n=24)及乌司他丁组(UR,n=24)。通过股动脉放血将3组制成休 克模型(平均动脉压维持在30~40 mmHg),SR组休克制备成功后不予复苏,并分别于休克后1、4、6 h(若大鼠死亡则大鼠死亡即 刻)取大鼠肺组织;AR组、UR组分别系维持休克60 min后应用醋酸钠林格液、醋酸钠林格液联合乌司他丁进行30 min液体复 苏,并分别于复苏后1、4、6 h取大鼠肺组织。利用实时荧光定量PCR法检测各组肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、 IL-10的mRNA含量以及通过Western blot检测TLR4、MyD88、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p65、IRAK4、p-IRAK4(Thr345、Ser346)、 p-IRAK4(Thr342)、TRAF6的蛋白相对表达量。在光镜下观察3组肺组织病理学变化。结果与休克组相比,醋酸钠林格液组 肺组织炎症浸润程度稍减轻,其中miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平升高(P<0.05),IκB-α、p-IRAK4(Thr342)及p-IRAK4 (Thr345、ser346)的蛋白表达增加(P<0.05);TNF-α、IL-1和IL-6的水平降低(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK- 4及TRAF6的蛋白表达减少(P<0.05)。与醋酸钠林格液组比较,乌司他丁组的肺组织炎性损伤得到了进一步改善,升高了miR- 146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平(P<0.01)及IκB-α、p-IRAK4(Thr342)及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达(P<0.01),降低 了TNF-α、IL-1和IL-6的水平(P<0.01)和TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达(P<0.01)。结论乌 司他丁联合醋酸钠林格液复苏创伤失血性休克大鼠可能是通过增强miR-146a的表达,负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路,进而 调节体内促炎因子和抗炎因子平衡,以达到保护肺组织的作用。  相似文献   
5.
目的 探讨新疆急、慢性布鲁菌病患者细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、INF-γ)、炎性因子(PCT、hs-CRP)及RF、ESR、ASO、血培养的临床诊断意义。方法 对布鲁菌病住院患者(病例组)和正常对照人群(对照组)采用多重微球流式免疫荧光发光法和生化等技术检测多种细胞因子及炎性因子,并进行统计学分析。结果 病例组和对照组IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α和IFN-γ分别为2.74(0.97~6.25)和0.56(0.53~0.64)、34.10(13.05~60.8)和0.78(0.41~2.52)、1.83(1.15~2.75)和0.89(0.77~1.13)、6.77(2.48~13.74)和1.03(0.68~1.20)、35.23(5.79~74.98)和1.33(0.80~2.17)、212.96(42.3~436.72) pg/mL和1.69(1.36~1.89) pg/mL,病例组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。急性组和慢性组IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ分别为65.32(36.27~68.60)和29.38(11.30~53.09)、2.38(1.51~3.34)和0.89(0.77~1.13)、11.98(3.92~16.49)和5.27(2.24~12.49)、50.88(16.59~96.69)和28.24(5.30~64.40)、319.00(145.14~588.52)pg/mL和160.52(36.5~418.54) pg/mL,PCT和hs-CRP分别为0.08(0.06~0.12) pg/mL和0.04(0.03~0.06) pg/mL、12.60(5.0~30.8)mg/L和3.30(1.2~16.2) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);低抗体滴度组和高抗体滴度组IL-6、PCT 、hs-CRP 、RF、ESR、血培养阳性率分别为30.46(11.30~50.02) pg/mL和46.20(17.72~79.69) pg/mL、0.04(0.03~0.06) pg/mL和0.07(0.04~0.11) pg/mL、3.03(0.85~9.70) mg/L和13.65(2.97~31.43) mg/L、3.0(0.8~9.7)IU/mL和13.6(3.0~31.4)IU/mL、15(7~31)mm/h和27(15~46)mm/h、15.3%和33.3%,差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示6种细胞因子均为布鲁菌病患病程度的危险因素,多因素Logistic回归分析显示IL-6和INF-γ水平是布鲁菌病患病程度的独立危险因素。结论 IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ及PCT、hs-CRP等指标不仅能及时准确反映布鲁杆菌感染发病程度和临床分期的免疫状况,而且IL-6和INF-γ表达水平具有独立的临床诊断评估作用,血培养在急性期或高滴度组具有重要的临床诊断价值。  相似文献   
6.
目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。  相似文献   
7.
MALDI-TOF-MS鉴定布鲁氏菌方法建立和评价   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的为了快速、准确、便捷的检测和鉴定布鲁氏菌,本研究拟建立鉴定布鲁氏菌属的MALDI-TOF-MS方法,利用现场分离菌株对该方法进行特异性和敏感性评价。方法收集布鲁氏菌标准菌株和地方流行株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立布鲁氏菌鉴定数据库。并用39株布鲁氏菌菌株,对建立的数据库进行验证。结果经数据库鉴定,39株布鲁氏菌菌株与数据库中布鲁氏菌的匹配分数全部大于2.300,均报告为布鲁氏菌,表明鉴定结果的可信度很高。聚类分型结果表明,在蛋白质水平,MALDI-TOF-MS将测试的布鲁氏菌分成3大类。结论MALDI-TOF-MS对布鲁氏菌进行鉴定,具有快速、准确、灵敏等优点,可以实现对布鲁氏菌属的准确鉴定,对布鲁氏菌病的临床诊断具有较高的使用价值。  相似文献   
8.
9.
背景与目的:乳腺黏液腺癌(mucinous carcinoma,MC)恶性程度较低,预后较好。目前美国国立综合癌症网络 (National Comprehensive Cancer Network,NCCN)指南推荐对雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)阴性MC的辅助化疗按照非特殊类型的浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)处理,即激素受体阴性、淋巴结阴性的pT≥0.6 cm的MC考虑及需要辅助化疗。探讨IDC和MC的临床、病理学等因素与乳腺癌特异生存率(breast cancer-specific survival,BCSS)的关系,为MC的辅助治疗策略提供依据。方法:回顾性分析2000—2009年美国流行病监测与最终治疗结果(Surveillance, Epidemiology, and End Results,SEER)数据库中可手术的245 235例IDC及6 705例MC的病例资料,比较两种不同组织学类型乳腺癌的临床病理学特征及BCSS率的差异。结果:MC患者ER阳性率高达97.3%,而IDC为76.0%(P<0.01);中位随访104个月,整体上MC的预后优于IDC,MC的10年BCSS率为92.0%,而IDC为84.0%(P<0.001);ER和PR均阳性的MC和IDC的10年BCSS率分别为93.0%和87.0%(P<0.001),ER和PR均阴性则分别为81.0%和76.0%(P=0.022);激素受体阴性的MC患者中,pT 2 N 0 M 0 和pT 3-4 N 0 M 0 的BCSS率均较低,分别为85.2%和80.0%,而pT 1 N 0 M 0 预后较好,10年BCSS率为94.5%,其中接受化疗和未经过化疗的10年BCSS率分别为94.1%和94.6%(P=0.87)。结论:MC生物学行为较好,与IDC相比,MC具有更好的长期生存;激素受体阴性、pT 1 N 0 M 0 的MC预后好,辅助化疗并没有进一步改善生存,提示对这部分高选择的患者有可能豁免辅助化疗,减少不必要的毒性。  相似文献   
10.
        血栓性微血管病(thrombotic microangiopathy,TMA)是一组以微血管栓塞为病理特征的疾病。主要表现为微血管病性溶血性贫血、血小板减少、微循环血小板血栓引起神经系统、肾脏等器官受累[1]。经典的血栓性微血管病主要指血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒综合征(HUS)。TTP和HUS均有溶血及肾脏受累的症状,且血浆置换可取得较好的疗效,两者之间的鉴别诊断较为困难,其病理变化均为内皮细胞损伤、微血管内血栓形成。近年来也有学者提出将两种疾病合称为TTP-HUS综合征。 浏览更多请关注本刊微信公众号及当期杂志。  相似文献   
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