体外培养口腔黏膜角化细胞生物学的特性

目的 一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法 通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生长基本规律及其增殖能力，并通过流式细胞仪检测细胞染色休体倍性。结果 细胞接种后第1-3天为静止生长期，第5-10天处于对数生长期，第12天后进入平台期。倍增时间为24-48h；接种密度为200/cm^2时，培养细胞克隆形成率为0.979%。经流式细胞仪检测细胞染色体倍性结果表明原代及传代细胞均为二倍体细胞。结论 体外连续培养的口腔黏膜角化细胞为正常上皮细胞，增殖能力良好。     

组织工程技术修复自体肌健缺损的实验研究

肌腱缺损是目前临床上治疗的一大难题。目前常用的治疗方法主要有 3种 :(1)自体肌腱移植 ;(2 )人工肌腱代用品 ;(3)同种异体肌腱移植。因分别存在着供体来源缺乏 ,供区损伤 ,异物反应及免疫排斥反应等问题 ,使临床应用受到限制。作者采用组织工程技术 ,在自体动物体内构建肌腱组织并修复肌腱缺损 ,为进一步临床应用提供理论依据。一、材料和方法1.材料 :12周龄Ｌｅｇｈｏｒｎ鸡 40只。Ⅱ型胶原酶 (美国Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ公司 ) ,含 10 %胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液 (美国Ｇｉｂｃｏ公司 ) ,0 2 5 %胰蛋白酶。聚羟基乙酸 (ＰＧＡ) ,生物…     

增强型绿色荧光蛋白表达在同种异体组织工程软骨构建中的示踪作用

目的 观察重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能否形成同种异体组织工程化软骨并示踪构建过程，方法 利用重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞和组织工程材料pluronicF-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨，荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其构建过程。结果 重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨，增强型绿色荧光蛋白（EGFP）在3周和6周后均得到了明显表达，且未影响软骨组织的形成过程，结论 重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨，EGFP是组织工程化软骨形成过程的良好示踪剂，且不影响组织的形成。     

FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达

目的　研究FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中表达的差异。方法　用免疫组织化学、Western -blot、流式细胞仪分析等方法检测FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤组织及相关细胞中的表达差异以及在成纤维细胞中的亚细胞分布状况。结果　FGFR1阳性细胞主要存在于角质形成细胞、汗腺、皮脂腺、血管内皮细胞及成纤维细胞等 ,细胞爬片观察到阳性颗粒主要位于细胞核 ,细胞浆中不如细胞核中明显。FGFR1在单个细胞中的表达量无明显差异。结论　FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中表达无差异     

生物工程领域的崭新前沿—组织工程

组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理,研究和开发、修复和改善损伤组织和功能的生物替代物的一门科学,是继细胞生物学和分子生物学之后,生命科学发展史上又一新的里程碑,标志着医学将走出器官移植的范畴,步入制造组织和器官的新时代。 组织工程是在组织水平上操作的生物工程,主要致力于组织和器官的形成和再生,它是对外科领域中组织、器官缺损和功能障碍传统治疗方法和模式的一次革命。同时组织工程是一门多学科交叉的边缘学科,将是21世纪具有巨大潜力的高技术产业,必将产生巨大的社会和经济效益。 目前组织工程己得到了迅猛发展,在许多方面已取得重大突破,由于其所孕育的巨大科学价值及广阔的研究和应用前景,成了未来21世纪生命科学研究领域的焦点之一。因此,在国内尽快地建立和开展组织工程研究,对加快我国医学科学事业和国民经济的发展具有重大意义。     

组织工程化软骨组织形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间的实验研究

目的研究探讨自体组织工程化软骨在动物自体内形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间。方法取贵州香猪部分耳廓软骨组织体外消化分离软骨细胞,与可注射性生物材料Ｐｌｕｒｏｎｉｃ混合形成复合物,浓度为１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０×１０６／ｍｌ,将细胞－生物材料复合物接种于猪自体腹外侧壁皮下。第６周取材,分别称重,并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色,评价软骨组织形成的最适细胞浓度。参考上述实验结果,制成最适软骨细胞－生物材料复合物,接种到猪自体腹外侧壁皮下,分别在接种后第１、３、６、９和１５周取材,大体观察,并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色,确定软骨组织形成的最佳时间。结果在动物自体内形成的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织最适细胞浓度为５０×１０６／ｍｌ,最佳形成时间是第６周。结论成功地利用组织工程技术在具有免疫功能的自体动物体内形成了软骨组织,并确定了软骨组织形成的最佳细胞接种浓度和接种的软骨组织形成最佳时限。     

血管组织工程基质材料及管形支架的制备

目的：几种血管基质材料的制作及比较。方法：采用EDC交联胶原和粘多糖材料；采用戊二醛和热交联得到明胶加壳聚糖材料；应用去垢剂，渗透压改变和核酸酶消化的方法，对猪主动脉进行去细胞处理，得到完整的去细胞纤维支架。采用直接模具成型，形成多种管形支架。结果：得到明胶加壳聚糖、完整的猪主动脉去细胞纤维支架等几种基质材料；管形支架外径1cm，内径0．6～0．8cm，放置培养液中10d，可保持管腔形状，不塌陷，不变形。结论：明胶加壳聚糖三维结构好，主动脉脱细胞基质仍显致密，采用模具直接成型、冷冻干燥技术相结合，可以得到多种管状的可降解基质支架。     

人胚胎平滑肌细胞的三维培养观察

目的：体外培养人胚胎动脉平滑肌细胞（vasular smooth muscle cells,VSMCs），并观察人胚VSMCs在经过改性的乳酸与羟基乙酸共聚（polylatic acid-polyglycolic acid,PLGA)上的三维培养情况，观察细胞在PLGA上的生长情况。方法：成功培养人胚VSMCs后，将其与PLGA（膜材和三维材料）进行三维培养，通过倒置显微镜，扫描电镜和MTT法观察细胞的生长情况。结果：体外培养的人胚VSMCs生长旺盛，且其与改性后的PLGA具有良好的相容性，细胞在PLGA上生长良好，结论：改性后的PLGA与体外培养的人胚VSMCs有良好的相容性，为构建结构和功能与在体胆管上段胆管相似的胆管组织，最终为形成组织工程化胆管提供实验依据。