扁塑藤素调控Notch信号通路诱导人肺癌条件重编程细胞死亡的作用机制研究

目的：应用条件性重编程细胞（conditionally reprogrammed cells，CRCs）技术建立人肺癌细胞体外长期培养体系，研究扁塑藤素对人肺癌CRCs增殖和迁移能力的影响，并探讨相关作用机制。方法：免疫组化法检测Notch 1、HES1和Cyclin D3在肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平；使用CRCs技术分离培养非小细胞肺癌原代细胞；使用2，4，8，16 μmol·L^-1的扁塑藤素处理人肺癌CRCs，MTS法检测细胞活力，Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞中Notch信号通路相关蛋白Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平。结果：在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平高于癌旁组织；扁塑藤素能够诱导人肺癌CRCs死亡，并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性（P<0.05）；随着扁塑藤素作用浓度的增高，人肺癌CRCs凋亡率明显增高（P<0.05），细胞迁移能力下降（P<0.05）；扁塑藤素能够下调人肺癌CRCs中Notch 1、HES1和Cyclin D3的蛋白表达水平。结论：扁塑藤素可能通过调控Notch信号通路相关蛋白的表达水平，抑制人肺癌CRCs的增殖和迁移，并诱导其凋亡，为肺癌的治疗提供新的实验数据和理论依据。     

人骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及生物学特性的鉴定

目的建立人骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）分离、培养、诱导分化与鉴定的方法,并探讨其生物学特性。方法收集腰椎间盘退变性疾病患者的髂骨骨髓24例,密度梯度离心法分离的单个核细胞接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶,贴壁培养,EGM-2培养基诱导扩增EPCs。Dil-ac-LDL、FITC．UEA—I荧光双标、流式细胞术鉴定EPCs,计算纯度。透射电镜和管腔形成实验鉴定EPCs向血管内皮细胞（ECs）分化的能力。结果培养72h换液时可见贴壁细胞形成明显细胞克隆集落,第5天集落数增加,1周后细胞融合达80％,至第14天细胞呈铺路石样排列。培养至第7天细胞Dil-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色阳性率为（95．1±4．0）％,CD133、CD34、KDR、VE。Cadherin标记阳性率分别为（18．5±4．4）％、（45．4±7．8）％、（66．7±7．2）％、（20．5±5-3）％。培养第10天细胞透射电镜显示成熟血管ECs特有的Weibel-Palade小体。管腔形成实验表明,体外ECMatrix上培养7至12d的EPCs具有较强的管腔形成能力。结论采用密度梯度离心与贴壁培养法分离、培养的人髂骨骨髓来源的单个核细胞在特定诱导条件下可分化为EPCs,纯度较高,稳定性和重复性好。EPCs培养7至12d,具有良好的管腔形成能力。     

氯化锰标记前列腺癌细胞株的体外MRI研究

目的 初步探索使用氯化锰（MnCl2）标记前列腺癌细胞株（PC-3）行体外MRI的可行性和安全性.方法 将PC-3进行复苏、培养和扩增.在细胞培养箱中,PC-3与8组含不同MnCl2浓度的F-12 HAM＇S培养基共同培养1h,收集已标记的PC-3并行MRI.另对不同细胞数量级和不同时间点的MnCl2标记的PC-3行MRI.用含维拉帕米的培养基培养MnCl2标记的PC-3 4 h,在不同时间点取标记后的PC-3行MRI.用WST-8法测定氯化锰标记的PC-3活性.结果 MnCl2标记的PC-3在T1WI显示为高信号,其信号强度与未标记的PC-3形成明显差异（P＜0.01）,以1.0 mmol /L MnCl2为标记浓度时信号强度最强.1.0mmol/L MnCl2标记的PC-3在细胞数量为0.5×106时可呈高信号.在体外培养的条件下,标记后24 h的PC-3信号强度明显下降,标记后72 h基本恢复至未标记的PC-3信号强度水平.维拉帕米可延长MnCl2标记的PC-3有效成像时间至72 h.标记后4 h,除0.1 mmol/L MnCl2对PC-3的活性没有影响（P ＞ 0.05）外,其余各浓度组（＞ 0.1mmol/L）的MnCl2对PC-3的活性均有不同程度的影响（P ＜ 0.05）;标记后24h,0.5 ～ 1.0 mmol/L MnCl2对细胞的活性影响不明显（P ＞ 0.05）.结论 MnCl2可以有效标记PC-3,并能在T1WI以高信号成像且具有一定灵敏度.在浓度低于或等于1.0 mmol/L时,标记PC-3有一定的安全性,但标记维持时间较短.钙离子通道阻滞剂（维拉帕米）可适当延长PC-3的MnCl2标记维持时间.     

条件性重编程技术分离培养人原代乳腺癌干细胞

目的应用条件性重编程细胞(Conditionally Reprogrammed Cells,CRCs)技术建立高效、稳定的人乳腺癌干细胞体外培养,建立潜在的乳腺癌干细胞靶向药研究模型。方法收集人乳腺癌组织样本,采用CRCs技术分离培养原代乳腺癌细胞,用CD24免疫磁珠标记原代乳腺癌细胞后使用磁性细胞分选仪分选出乳腺癌干细胞,免疫荧光法测定广谱细胞角蛋白(Pan Cytokeratin,pan-CK)表达,流式细胞术检测干细胞标志物CD44,CD24和乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH1)的表达水平,克隆形成实验和微球体形成实验分别用于测定克隆形成和乳腺微球体形成。结果利用CRCs技术分离培养的原代乳腺癌细胞能够稳定传代扩增至第9代,并保持乳腺癌细胞的特征。采用CRCs技术结合磁性细胞分选仪对乳腺癌原代细胞进行培养和分选后,乳腺癌非干性细胞微球体形成率显著低于干性细胞,乳腺癌非干性细胞克隆形成率显著低于干性细胞。乳腺癌干细胞可扩增至第5代。结论联合利用CRCs和免疫磁珠分选能够从原代乳腺癌组织中高效分离出具有肿瘤干细胞生物学特性并能稳定传代扩增的乳腺癌干细胞,这一体系可作为潜在的乳腺癌干细胞靶向药物研究模型。     

离体大鼠肝脏灌流技术及其在植物药研究中的应用进展

离体大鼠肝灌流技术是肝脏灌流技术应用最广泛的一种。该模型兼备体外实验和整体动物实验的优点,被广泛应用在药物代谢、药物相互作用、胆汁分泌等研究中。本文对离体大鼠肝灌流技术及其在植物药研究中的应用进展进行了综述。     

离体大鼠肝脏灌流技术及其在植物药研究中的应用进展

离体大鼠肝灌流技术是肝脏灌流技术应用最广泛的一种.该模型兼备体外实验和整体动物实验的优点,被广泛应用在药物代谢,药物相互作用,胆汁分泌等研究中.本文对离体大鼠肝灌流技术及其在植物药研究中的应用进展进行了综述.     

肉桂醛对PC-3细胞增殖、EMT及干细胞特性的影响

目的 探索肉桂醛（cinnamaldehyde,CA）对PC-3细胞增殖、上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及干细胞特性的作用及机制，为CA作为潜在抗前列腺癌骨转移药物提供前期实验参考。方法 通过CCK-8法、Transwell实验、基质黏附实验及成球实验检测CA对PC-3细胞增殖、迁移、侵袭、黏附及成球的影响，qRT-PCR分析CA处理PC-3细胞后miR-143及AGO2 mRNA表达情况，Transwell实验和基质黏附实验检测单独加入CA、转染miR-143mimic、AGO2-siRNA同时处理CA及AGO2、同时转染miR-143mimic及AGO2后PC-3细胞的侵袭、迁移及黏附情况。Western blot实验检测CA或转染miR-143mimic后PC-3细胞AGO2、EMT及干细胞特性相关蛋白的表达情况。结果 CA呈浓度依赖性抑制PC-3细胞的增殖、迁移、侵袭、黏附及成球能力，与对照组相比差异均有统计学意义（P <0.01）;qRT-PCR分析发现CA可上调PC-3细胞中miR-143表达、抑制AGO2...