骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景：骨保护素(osteoprotegerin，OPG)可抑制破骨细胞的分化，抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡，在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的：鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成，研究对象：人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存，12只6～8周龄BABL／c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预：RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体，在脂质体介导下转染CHO细胞，经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液，实验组：体外培养的鼠破骨细胞培养基中加人含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标：观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果：转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在la，25(OH)zD3(1&;#215;10^-8mol／L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞，在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液，TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5．547，p&;lt;0．01)，骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3．409，P&;lt;0．01)。结论：人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达，并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用。     

基因治疗骨质疏松、骨转移癌的可行性研究

目的：研究人骨保护素（OPG）转染小鼠胚胎成肌细胞C2C12后细胞形态及细胞周期的变化,方法：采用Wesern blot方法证实OPG在真核细胞中表达,对稳定转染OPG基因的C2C12细胞的形态,细胞周期等进行检测。结果：成功克隆了人OPG编码区基因并构建了直核表达载体pcDNA3-OPG。结论：人OPG编码区基因稳定转染的小鼠胚胎成肌细胞生长状态良好,DNA合成旺盛,无诱导细胞凋亡现象,为采用OPG基因治疗骨质疏松,骨转移癌等的可行性提供了依据。     

破骨细胞骨吸收机制的研究进展

人体骨骼依赖于骨吸收和骨形成之间的动态平衡 ,当破骨细胞的骨吸收功能超过成骨细胞的骨形成作用后 ,这一平衡的失调将导致骨质疏松或骨质破坏。因妇女绝经、过量服用糖皮质激素等多种因素引起的骨质疏松 ,Ｐａｇｅｔ’ｓ病 ,以及癌症骨转移造成的骨破坏 ,都与破骨细胞异常活跃的分化增殖和骨吸收功能有关。因此 ,破骨细胞 (ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ,ＯＣ)是治疗上述疾病的靶细胞[1,2 ] 。1　破骨细胞分化形成的微环境ＯＣ是一种特殊类型的多核巨细胞 ,来源于ＣＤ3 4+ 的骨髓造血干细胞 ,其分化主要受骨髓基质细胞和成骨细胞所分泌的集落细胞…     

异体骨关节移植后骨愈合的X线形式及影响因素

目的探讨肢体恶性肿瘤接受大段同种异体骨关节移植后和异体骨愈合在X线的表现及影响因素，以改进手术方法。方法1992年5月～1999年3月，对收治的90例中可纳入统计的85例骨恶性肿瘤在手术切除长段骨关节后，应用不同内固定方式进行异体骨关节移植，其中16例保留髁部关节面的异体骨段移植，57例异体关节移植，9例复合异体骨段人工髋关节置换，3例膝关节置换。术后平均随访2年9个月，以X线片表现判定骨愈合方式，依据Enneking肢体恶性肿瘤保肢术后的肢体功能标准，评价手术结果。结果85例101处异体骨与自体骨接合部有91处达到临床骨愈合。根据X线片表现特征，异体骨与自体骨间有4种愈合方式，其中以断端周围形成外骨痴、同时植骨间隙逐渐消失最多见；内固定不牢固是引起术后骨不愈合的主要原因；异体骨周围软组织覆盖、血供差及大段异体骨移植后诱发的免疫排异反应等可能影响骨愈合；远离异体骨与自体骨结合部的肿瘤复发或感染、不同长度的异体骨对骨愈合无肯定的负作用；选用牢固的髓内固定、断端周围植骨及采用骨膜袖套技术可减少术后骨不愈合的发生。结论大段异体骨关节移植后骨愈合有不同的X线片表现形式。手术设计应为异体骨提供充足的血液供应、牢固的内固定支撑和完善的软组织覆盖。     

人era的结构特点分析及其定点突变体的构建

目的：构建最近克隆的人era基因的定点突变体。方法：利用数据库对era的结构特点进行分析，在此基础上用改良的重叠延伸法分别构建人EraN端和C端的定点突变体。结果：获得了分别针对人EraN端TGP结合结构域（位于29－36氨基酸残基）和C端具有RNA结合活性的 KH结构域（位于297－340氨基酸残基）的定点突变体。结论:人era定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的 克隆人破骨细胞生成抑制因子（OPG／PCIF）编码区基因并在真核细胞中表达，为进一步研究OPG／OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法 以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT－PCR法得到人OPG／OCIF的编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结果 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG／OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致。成功构建OPG／OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳定转染OPG／OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG／OCIF在真核细胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子（OPG／OCIF）编码区全长cDNA并证实在真垓细胞中表达，为OPG／OCIF进一步的功能研究奠定了基础。     

保留骨骺的保肢手术临床研究

目的 介绍儿童及青少年保留骨骺的保肢手术方法，并讨论肿瘤复发率、转移情况及术后并发症与关节功能。方法1995年12月至2003年1月，对33例儿童及青少年肢体原发性恶性或侵袭性骨肿瘤进行保留骨骺的保肢手术，年龄8-16岁，平均12．2岁。股骨下端24例，胫骨上端9例；骨肉瘤23例，尤文肉瘤6例，软骨肉瘤2例，侵袭性骨母细胞瘤2例。Enneking外科分期：ⅠA期2例，ⅠB期2例，ⅡA期17例，ⅡB期12例。恶性肿瘤患者接受术前2-4个周期、术后6个周期的化疗。采用大段同种异体骨移植重建骨缺损，并用松质骨拉力螺钉将其与骨骺进行固定。结果29例患者随访资料完整。随访时间12～72个月，平均37．6个月。3例复发，分别于术后1年在骨骺处复发、术后15个月和30个月在原肿瘤位置的股动、静脉周围复发，复发率为10．3％。对复发病例行截肢术。共9例死亡，5年生存率为57．9％。4例患者发生5例并发症，发生率为17．2％。依据Enneking术后功能评价标准，优11例，良13例，可3例，差2例，总优良率为82．8％。结论四肢恶性骨肿瘤保留骨骺的保肢手术可以使患者获得较好的肢体功能，在严格掌握手术适应证和有效化疗的前提下，实施该手术是安全的。     

骶管内囊肿24例的影像学诊断和临床特点

目的：探讨骶管内蛛网膜囊肿的影像学和临床特点,以助于临床诊断,方法：观察24例经手术证实的骶管内蛛网膜囊肿患的X线片,CT,造影后CT,MRI等影像学资料中的影像改变,分析该组患的临床表现特点及手术中的病理特点,结果：X线片,CT,及MRI中均可显示出骶骨的骨性改变,造影后CT囊肿内造影剂显影,MRI可以清楚的显示出囊肿呈长T1及T2信号,信号强度与脑脊液一致,临床症状以骶管内神经受压表现为主,囊肿与硬膜囊一般有交通孔,结论：MRI是最好的影像学诊断方法;骶管内蛛网膜囊肿的发生是由于先天的硬膜缺损所致。     

膝关节周围骨肿瘤手术的肢体康复

0　引言　膝关节周围是骨原发恶性肿瘤的好发部位 .病变组织广泛侵袭 ,切除肿瘤造成骨与软组织缺损 ,各种重建方法都需最大限度地保留膝关节功能 .如何采取早期系统的康复治疗 ,是临床骨肿瘤保肢手术的重要内容 .1　对象和方法　 1992 - 0 5 / 1999- 0 3,膝关节周围恶性骨肿瘤患者 6 4例接受保肢手术治疗 .男 38例 ,女 2 6例 ;骨肉瘤 5 2例 ,恶性骨巨细胞瘤 5例 ,尤文瘤 3例 ,母细胞瘤 2例 ,原发神经外胚层肿瘤 2例 .手术方式 :异体半关节移植术 37例 ;异体骨段移植术 16例 ;复合异体骨段的人工全膝关节表面置换术3例 ,动力旋转铰链式人工全…